本文關鍵詞：甲型副傷寒沙門菌hla-spaO融合基因構建及其表達產物免疫保護作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的構建甲型副傷寒沙門菌h1a-spaO融合基因及其原核表達系統(tǒng),確定重組表達產物rH1a-SpaO免疫保護作用。 方法采用柔性肽序列連接引物PCR構建并擴增hla與spaO基因的融合基因h1a-spaO, T-A克隆后測序。采用常規(guī)基因工程方法構建h1a-spaO融合基因原核表達系統(tǒng),SDS-PAGE檢測rH1a-SpaO表達情況。采用Western Blot鑒定rH1a-SpaO抗原性和免疫反應性,微量肥達試驗確定rH1a-SpaO抗血清凝集甲型副傷寒沙門菌的能力。采用小鼠感染模型了解rH1a-SpaO對甲型副傷寒沙門菌致死性感染的保護作用并與等量單一重組表達蛋白H1a (rH1a)及SpaO (rSpaO)比較。 結果所構建的h1a-spaO融合基因與單一hla或spaO基因核苷酸和氨基酸序列相似性均為100%。h1a-spaO融合基因原核表達系統(tǒng)能高效表達rH1a-SpaO。 rH1a-SpaO能與rHHla或rSpaO抗血清結合,rH1a-SpaO抗血清也能識別rHl1a和rSpaO并經(jīng)H抗原凝集甲型副傷寒沙門菌。100ngrH1a-SpaO對甲型副傷寒沙門菌感染小鼠的免疫保護率(93.3%)明顯高于等量rHla(60.0%)及rSpaO (53.3%)(p0.05)。 結論重組融合蛋白抗原rHla-SpaO免疫保護作用較等量單一：rHla或rSpaO更強,可作為甲型副傷寒兩價基因工程疫苗或傷寒／副傷寒莢膜多糖-蛋白結合疫苗的有效抗原。
【關鍵詞】：甲型副傷寒沙門菌 h1a-spaO融合基因 重組表達 免疫原性 免疫保護性
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R378.22
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 1 引言10-12
• 2 rH1a-SpaO、rH1a、rSpaO原核表達載體構建、抗血清制備及免疫原性鑒定12-30
• 2.1 實驗材料12-14
• 2.2 實驗方法14-28
• 2.3 實驗結果28-30
• 3 微量肥達試驗30-32
• 3.1 實驗材料30
• 3.2 實驗方法30-31
• 3.3 實驗結果31-32
• 4 小鼠免疫保護試驗32-35
• 4.1 實驗材料32
• 4.2 實驗方法32-33
• 4.3 實驗結果33-35
• 5 討論35-37
• 6 結論37-38
• 參考文獻38-41
• 綜述41-49
• 參考文獻46-49
• 作者簡介及在讀期間所取得的科研成果49

【參考文獻】

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  本文關鍵詞：甲型副傷寒沙門菌hla-spaO融合基因構建及其表達產物免疫保護作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：270273