【摘要】：人類免疫缺陷型病毒HIV自1983年被發(fā)現(xiàn)以來已有30多年的時間,開發(fā)有效、安全且價格低廉的預防性與治療性艾滋疫苗及抗病毒藥物仍然是預防和治療艾滋病的首要任務。世界上各個國家的研究團隊正在嘗試不同的技術手段致力于艾滋疫苗的研發(fā)。隨著單細胞分選和二代測序等技術的發(fā)展,從HIV感染者體內(nèi)分離出了一系列超強的廣譜中和抗體,通過對這些廣譜中和抗體結構的晶體學分析發(fā)展出了新型免疫原設計,其中包括以HIV廣譜中和抗體表位或是以保守性表位為基礎的表位聚焦的免疫原設計,主要是借助外源支架或是病毒顆粒展示不同的表位遞呈給機體免疫系統(tǒng),旨在誘導出廣譜中和抗體。本研究在先前報道的對p24突變蛋白結構及免疫原性研究的基礎上,利用其可組裝為顆粒、具有高度保守的序列以及大量的T、B細胞可識別的免疫優(yōu)勢表位的特性,以該突變型的衣殼蛋白為支架展示不同的包膜蛋白表位構建融合蛋白,探索其作為HIV表位展示載體進行免疫原設計的可能性。根據(jù)前期對p24突變體N21C/A22C蛋白結構及性質(zhì)的研究,以CypA連接環(huán)為表位展示區(qū),設計構建一系列不同Env表位的重組克隆,以實驗室成熟的大腸桿菌原核表達系統(tǒng)表達出了不同的N21C/A22C-V3及N21C/A22C-V1V2融合蛋白,包括B亞型NL4-3與89.6和D亞型的94UG114,并通過離子層析及疏水層析純化后獲得純度較高的各亞型的重組蛋白。利用ELISA、Western blot等手段分析其理化特征;利用流式細胞術、免疫熒光、酶聯(lián)免疫吸附實驗及基于免疫斑點印跡(ELISPOT)平臺的TZM-bl中和檢測方法評價重組蛋白的免疫原性包括多抗血清的抗體滴度、中和能力及細胞免疫應答特征。對重組蛋白反應活性及小鼠免疫原性進行檢測,重組蛋白與不同的中和抗體反應性良好,并且免疫后的小鼠多抗血清可以中和不同亞型的病毒,同時又可激起免疫小鼠Thl和Th2型的細胞免疫應答。綜上,本研究評價了以突變型的衣殼蛋白N21C/A22C作為載體的可行性,為以顆�；職さ鞍诪橹Ъ艿拿庖咴O計提供了概念驗證,可作為HIV-1疫苗研發(fā)的免疫原設計策略,同時也為后續(xù)表位聚焦的疫苗研究提供參考。
【圖文】：

盡管我們對艾滋病毒及其預防和治療的科學認識有所提高，并且全球衛(wèi)生和政府及民間社會組織多年來所付出的重大努力也取得了迸展，艾滋病全球總?cè)颈壤氏陆底邉�，但在一些低收入地區(qū)仍然存在較多的艾滋病毒感染者，其一些感染者仍無法獲得預防，護理和治療，越來越多的人被診斷出患有艾滋開發(fā)快速有效的ＨＩＶ診斷試劑、對ＨＩＶ疫苗和抗ＨＩＶ藥物及新型治療方法的

＝＇！逡逑－－—－、，，Ｍ邋－邋Ｘ＾ｊｆ邋｛逡逑圖１．５邋ＨＩＶ－ｌ蛋白結構表示和ＨＩＶ－ｌ顆粒示意圖丨２６丨逡逑Ｆｉｇｕｒｅ．１．５邋Ｓｕｒｆａｃｅ邋ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎｓ邋ｏｆ邋ＨＩＶ－１邋ｐｒｏｔｅｉｎ邋ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ邋ａｎｄ邋ｓｃｈｅｍａｔｉｃ逡逑ｖｉｅｗ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ＨＩＶ－１邋ｐａｒｔｉｃｌｅ丨２６丨逡逑１．４．１邋ＨＩＶ－１包膜蛋白逡逑ＨＩＶ－１包膜（Ｅｎｖ）糖蛋白在病毒復制周期中通過介導病毒和細胞膜在進入逡逑過程中的融合而發(fā)揮重要作用。Ｅｎｖ糖蛋白被合成為多蛋白前體（ｇｐｌ６０），其被逡逑細胞蛋白酶裂解成成熟表面糖蛋白ｇｐｌ２０和跨膜糖蛋白ｇｐ４ｈｇｐｌ２０含有五個可逡逑變域（Ｖ１－Ｖ５）和五個恒定域（Ｃ１－Ｃ５）。ｇｐ４１由含有融合肽（ＦＰ），七肽重復序逡逑列（ＨＲ１和ＨＲ２）以及胞外近膜區(qū)域（ＭＰＥＲ），跨膜區(qū)（ＴＭＤ）和穿膜區(qū)．（ＣＴ）逡逑的胞外域組成，而ＣＴ包含幾種基序：內(nèi)化信號ＹＳＰＬ；肯尼迪序列（ｋｓ）；兩親逡逑性ａ－螺旋ＬＬＰ－１，邋ＬＬＰ－２和ＬＬＰ－３；和參與內(nèi)吞和細胞內(nèi)Ｅｎｖ分布的Ｃ末端二亮逡逑氨酸基序（ＬＬ）（圖１．６）邋［２７］。逡逑ＨＩＶ－１邋Ｅｎｖ糖蛋白是在粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ＲＥＲ邋）上由單一剪接的雙順反子ｖｐｕ邋／邋ｅｎｖ逡逑ｍＲＮＡ合成的多蛋白前體［２８］。未加工的Ｅｎｖ前體糖蛋白（ｇｐｌ６０）含有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ＥＲ）逡逑在其Ｎ端的信號序列，從而將Ｅｎｖ靶向粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜。該信號肽在共轉(zhuǎn)錄時被逡逑ＥＲ內(nèi)的細胞信號肽酶除去。ｇｐ４１的跨膜結構域（ＴＭＤ）含有疏水性終止轉(zhuǎn)移信＾逡逑６逡逑
【學位授予單位】：廈門大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R392

【參考文獻】

相關博士學位論文 前1條

1 張麗雙;HIV-1 MPER表位分支肽免疫原免疫原性及其衍生多肽促感染活性的研究[D];吉林大學;2013年

相關碩士學位論文 前1條

1 張寧;以改造隱性表位為基礎的HIV復合多表位疫苗的構建及其免疫應答分析[D];第四軍醫(yī)大學;2010年

本文編號：2694861