發(fā)布時間：2020-05-29 21:07

【摘要】：目的:通過檢測α-硫辛酸(α-LA)對帕金森病(PD)模型大鼠黑質(SN)以及PD細胞模型中膜鐵轉運蛋白1(FP1)、鐵調節(jié)蛋白1(IRP1)和鐵調節(jié)蛋白2(IRP2)表達的影響,探討α-LA在PD模型中調節(jié)鐵轉出的機制。方法:動物實驗:健康雄性SD大鼠60只,隨機分為假手術組(15只)、模型組(45只)。采用立體定位技術將6-羥基多巴胺(6-OHDA)注入大鼠右側紋狀體建立PD動物模型,假手術組注入同等量的生理鹽水。建模第4周后運用旋轉實驗篩選成功模型(30只),隨機分為PD模型組(15只)和PD治療組(15只)。PD治療組給予α-LA 50mg/kg.d腹腔注射,連續(xù)2周,PD模型組給予同等量生理鹽水。治療14天后,用Cylinder test測試大鼠左前肢的使用率;取各組大鼠右側中腦SN,采用免疫組織化學染色方法檢測酪氨酸羥化酶(TH)的表達情況,采用普魯士藍染色方法檢測鐵陽性細胞數(shù)量的變化,采用Western Blot方法檢測FP1、IRP1、IRP2的表達情況。細胞實驗:體外培養(yǎng)PC12細胞,運用MTT法分別篩選6-OHDA的最適造模濃度和α-LA的最適保護濃度。分為3組:正常對照組、模型組(100μmol/L 6-OHDA)、α-LA干預組(100μmol/Lα-LA+100μmol/L 6-OHDA)。采用比色法測定各組細胞內丙二醛(MDA)、鐵含量;采用Western Blot方法測定各組細胞內FP1、IRP1、IRP2的表達情況。結果:動物實驗:(1)與假手術組比較,PD模型組大鼠左前肢使用率顯著降低(P0.01);右側SN內TH陽性神經(jīng)元數(shù)量明顯減少(P0.01),鐵染色陽性細胞數(shù)量明顯增加(P0.01),FP1蛋白表達明顯減少(P0.01),IRP2蛋白表達明顯增加(P0.01),IRP1蛋白表達差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。(2)與PD模型組比較,PD治療組大鼠左前肢使用率明顯上升(P0.01);右側SN內TH陽性神經(jīng)元數(shù)量明顯增加(P0.01),鐵染色陽性細胞數(shù)量明顯減少(P0.01),FP1蛋白表達明顯增加(P0.01),IRP2蛋白表達明顯減少(P0.01),IRP1蛋白表達差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。細胞實驗:(1)與正常對照組比較,模型組細胞活力明顯下降(P0.01);細胞內MDA、鐵含量明顯增加(P0.01);細胞內FP1蛋白表達明顯降低(P0.01),IRP1、IRP2蛋白表達明顯增加(P0.01)。(2)與模型組比較,α-LA干預組細胞活力明顯上升(P0.01);細胞內MDA、鐵含量明顯減少(P0.01),細胞內FP1蛋白表達明顯增加(P0.01),IRP1蛋白表達降低(P0.05),IRP2蛋白表達明顯降低(P0.01)。結論:(1)PD模型大鼠中α-LA可降低中腦SN內IRP2的表達,通過IRP2/IRE途徑,使FP1表達增加,進而增加細胞內鐵離子的轉出,降低鐵沉積。(2)PD細胞模型中α-LA可降低細胞內IRP1、IRP2的表達,通過IRPs/IRE途徑,增加FP1的表達,促進細胞對鐵離子的轉出,抑制鐵沉積。
【圖文】：

貴州醫(yī)科大學 2018 屆科學學位碩士研究生學位論文20圖2-1 各組大鼠右側黑質TH陽性神經(jīng)元的表達情況(A:假手術組；B:PD模型組；C:PD治療組)（ABC法×40）標尺=100 μm 注:右上插圖顯示箭頭所指神經(jīng)元200倍鏡下觀察結果Fig.2-1The expression of TH positive neurons in the right substantia nigra in each group rats(A: sham operation group; B: PD model group; C: PD treatment group)（ABC method ×40）ruler=100 μm Note: The upper right illustration shows the observations of the 200 timesmicroscopic neurons表 2-2 各組大鼠右側中腦黑質區(qū)域 TH 陽性細胞數(shù)目的比較( ± s，n = 3 )Tab. 2-2 Comparison of the number of TH positive cells in the right midbrain substantianigra of rats in each group組別 TH 陽性細胞數(shù)（個）假手術組 148.00±2.00PD模型組 27.33±3.06**PD 治療組 71.00±3.61##注：**P<0.01 與假手術組比較；##P<0.01 與 PD 模型組比較。2.1.4 普魯士藍染色檢測大鼠右側黑質鐵沉積情況如圖所示（圖2-2），黑質區(qū)域鐵染色陽性細胞呈亮藍色。假手術組大鼠右側黑質區(qū)域極少見到鐵染色陽性細胞，其余各組大鼠右側黑質均能看到鐵染色陽性細胞，，形態(tài)不規(guī)則，主要分布在黑質致密部，少量在黑質網(wǎng)狀部。與假手術組比較，PD模型組大鼠右側黑質鐵陽性細胞數(shù)量明顯增加（P<0.01）；與PD模型組比較，PD 治療組大鼠右側黑質鐵陽性細胞數(shù)量顯著減少（P<0.01），見（表2-3）。

貴州醫(yī)科大學 2018 屆科學學位碩士研究生學位論文21圖2-2 各組大鼠右側中腦黑質鐵染色陽性細胞情況(A：假手術組；B：PD模型組；C：PD治療組) (200×) 標尺=100 μmFig.2-2 The expression of iron-positive cells in the right substantia nigra in each group rats(A: sham operation group; B: PD model group; C: PD treatment group) (200×)ruler=100 μm表 2-3 各組大鼠右側黑質鐵染色陽性細胞數(shù)目的比較( ± s，n =3，個/HP)Tab.2-3 Comparison of the number of iron positive cells in the right substantia nigra of ratsin each group組別 鐵染色陽性細胞數(shù)假手術組 0.33±0.58PD模型組 10.00±1.00**PD 治療組 3.67±0.58##注：**P<0.01 與假手術組比較；##P<0.01 與 PD 模型組比較。2.1.5 Western Blot 法檢測大鼠右側黑質 FP1、IRP1、IRP2 蛋白水平Western Blot檢測結果如（圖2-3，表2-4）所示。與假手術組比較，PD模型組大鼠右側中腦黑質FP1蛋白表達明顯減少（P<0.01），IRP2蛋白表達明顯增加（P<0.01），IRP1蛋白表達差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；與PD模型組比較，PD治療組大鼠右側中腦黑質FP1表達明顯增加（P<0.01）
【學位授予單位】：貴州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R742.5;R-332

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本文編號：2687500