【摘要】：目的:通過(guò)檢測(cè)α-硫辛酸(α-LA)對(duì)帕金森病(PD)模型大鼠黑質(zhì)(SN)以及PD細(xì)胞模型中膜鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(FP1)、鐵調(diào)節(jié)蛋白1(IRP1)和鐵調(diào)節(jié)蛋白2(IRP2)表達(dá)的影響,探討α-LA在PD模型中調(diào)節(jié)鐵轉(zhuǎn)出的機(jī)制。方法:動(dòng)物實(shí)驗(yàn):健康雄性SD大鼠60只,隨機(jī)分為假手術(shù)組(15只)、模型組(45只)。采用立體定位技術(shù)將6-羥基多巴胺(6-OHDA)注入大鼠右側(cè)紋狀體建立PD動(dòng)物模型,假手術(shù)組注入同等量的生理鹽水。建模第4周后運(yùn)用旋轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)篩選成功模型(30只),隨機(jī)分為PD模型組(15只)和PD治療組(15只)。PD治療組給予α-LA 50mg/kg.d腹腔注射,連續(xù)2周,PD模型組給予同等量生理鹽水。治療14天后,用Cylinder test測(cè)試大鼠左前肢的使用率;取各組大鼠右側(cè)中腦SN,采用免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)酪氨酸羥化酶(TH)的表達(dá)情況,采用普魯士藍(lán)染色方法檢測(cè)鐵陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量的變化,采用Western Blot方法檢測(cè)FP1、IRP1、IRP2的表達(dá)情況。細(xì)胞實(shí)驗(yàn):體外培養(yǎng)PC12細(xì)胞,運(yùn)用MTT法分別篩選6-OHDA的最適造模濃度和α-LA的最適保護(hù)濃度。分為3組:正常對(duì)照組、模型組(100μmol/L 6-OHDA)、α-LA干預(yù)組(100μmol/Lα-LA+100μmol/L 6-OHDA)。采用比色法測(cè)定各組細(xì)胞內(nèi)丙二醛(MDA)、鐵含量;采用Western Blot方法測(cè)定各組細(xì)胞內(nèi)FP1、IRP1、IRP2的表達(dá)情況。結(jié)果:動(dòng)物實(shí)驗(yàn):(1)與假手術(shù)組比較,PD模型組大鼠左前肢使用率顯著降低(P0.01);右側(cè)SN內(nèi)TH陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)量明顯減少(P0.01),鐵染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量明顯增加(P0.01),FP1蛋白表達(dá)明顯減少(P0.01),IRP2蛋白表達(dá)明顯增加(P0.01),IRP1蛋白表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)與PD模型組比較,PD治療組大鼠左前肢使用率明顯上升(P0.01);右側(cè)SN內(nèi)TH陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)量明顯增加(P0.01),鐵染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量明顯減少(P0.01),FP1蛋白表達(dá)明顯增加(P0.01),IRP2蛋白表達(dá)明顯減少(P0.01),IRP1蛋白表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。細(xì)胞實(shí)驗(yàn):(1)與正常對(duì)照組比較,模型組細(xì)胞活力明顯下降(P0.01);細(xì)胞內(nèi)MDA、鐵含量明顯增加(P0.01);細(xì)胞內(nèi)FP1蛋白表達(dá)明顯降低(P0.01),IRP1、IRP2蛋白表達(dá)明顯增加(P0.01)。(2)與模型組比較,α-LA干預(yù)組細(xì)胞活力明顯上升(P0.01);細(xì)胞內(nèi)MDA、鐵含量明顯減少(P0.01),細(xì)胞內(nèi)FP1蛋白表達(dá)明顯增加(P0.01),IRP1蛋白表達(dá)降低(P0.05),IRP2蛋白表達(dá)明顯降低(P0.01)。結(jié)論:(1)PD模型大鼠中α-LA可降低中腦SN內(nèi)IRP2的表達(dá),通過(guò)IRP2/IRE途徑,使FP1表達(dá)增加,進(jìn)而增加細(xì)胞內(nèi)鐵離子的轉(zhuǎn)出,降低鐵沉積。(2)PD細(xì)胞模型中α-LA可降低細(xì)胞內(nèi)IRP1、IRP2的表達(dá),通過(guò)IRPs/IRE途徑,增加FP1的表達(dá),促進(jìn)細(xì)胞對(duì)鐵離子的轉(zhuǎn)出,抑制鐵沉積。
【圖文】：

貴州醫(yī)科大學(xué) 2018 屆科學(xué)學(xué)位碩士研究生學(xué)位論文20圖2-1 各組大鼠右側(cè)黑質(zhì)TH陽(yáng)性神經(jīng)元的表達(dá)情況(A:假手術(shù)組；B:PD模型組；C:PD治療組)（ABC法×40）標(biāo)尺=100 μm 注:右上插圖顯示箭頭所指神經(jīng)元200倍鏡下觀察結(jié)果Fig.2-1The expression of TH positive neurons in the right substantia nigra in each group rats(A: sham operation group; B: PD model group; C: PD treatment group)（ABC method ×40）ruler=100 μm Note: The upper right illustration shows the observations of the 200 timesmicroscopic neurons表 2-2 各組大鼠右側(cè)中腦黑質(zhì)區(qū)域 TH 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目的比較( ± s，n = 3 )Tab. 2-2 Comparison of the number of TH positive cells in the right midbrain substantianigra of rats in each group組別 TH 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)（個(gè)）假手術(shù)組 148.00±2.00PD模型組 27.33±3.06**PD 治療組 71.00±3.61##注：**P<0.01 與假手術(shù)組比較；##P<0.01 與 PD 模型組比較。2.1.4 普魯士藍(lán)染色檢測(cè)大鼠右側(cè)黑質(zhì)鐵沉積情況如圖所示（圖2-2），黑質(zhì)區(qū)域鐵染色陽(yáng)性細(xì)胞呈亮藍(lán)色。假手術(shù)組大鼠右側(cè)黑質(zhì)區(qū)域極少見(jiàn)到鐵染色陽(yáng)性細(xì)胞，其余各組大鼠右側(cè)黑質(zhì)均能看到鐵染色陽(yáng)性細(xì)胞，，形態(tài)不規(guī)則，主要分布在黑質(zhì)致密部，少量在黑質(zhì)網(wǎng)狀部。與假手術(shù)組比較，PD模型組大鼠右側(cè)黑質(zhì)鐵陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量明顯增加（P<0.01）；與PD模型組比較，PD 治療組大鼠右側(cè)黑質(zhì)鐵陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量顯著減少（P<0.01），見(jiàn)（表2-3）。

貴州醫(yī)科大學(xué) 2018 屆科學(xué)學(xué)位碩士研究生學(xué)位論文21圖2-2 各組大鼠右側(cè)中腦黑質(zhì)鐵染色陽(yáng)性細(xì)胞情況(A：假手術(shù)組；B：PD模型組；C：PD治療組) (200×) 標(biāo)尺=100 μmFig.2-2 The expression of iron-positive cells in the right substantia nigra in each group rats(A: sham operation group; B: PD model group; C: PD treatment group) (200×)ruler=100 μm表 2-3 各組大鼠右側(cè)黑質(zhì)鐵染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目的比較( ± s，n =3，個(gè)/HP)Tab.2-3 Comparison of the number of iron positive cells in the right substantia nigra of ratsin each group組別 鐵染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)假手術(shù)組 0.33±0.58PD模型組 10.00±1.00**PD 治療組 3.67±0.58##注：**P<0.01 與假手術(shù)組比較；##P<0.01 與 PD 模型組比較。2.1.5 Western Blot 法檢測(cè)大鼠右側(cè)黑質(zhì) FP1、IRP1、IRP2 蛋白水平Western Blot檢測(cè)結(jié)果如（圖2-3，表2-4）所示。與假手術(shù)組比較，PD模型組大鼠右側(cè)中腦黑質(zhì)FP1蛋白表達(dá)明顯減少（P<0.01），IRP2蛋白表達(dá)明顯增加（P<0.01），IRP1蛋白表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；與PD模型組比較，PD治療組大鼠右側(cè)中腦黑質(zhì)FP1表達(dá)明顯增加（P<0.01）
【學(xué)位授予單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R742.5;R-332

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本文編號(hào)：2687500