本文關(guān)鍵詞：雙shRNA表達(dá)載體對HSV-2的UL27、UL54基因的干擾作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:構(gòu)建針對HSV-2的UL27和UL54的雙sh RNA質(zhì)粒表達(dá)載體,探討雙sh RNA表達(dá)載體對雙靶基因的干擾作用以及對HSV-2病毒增殖的影響。方法:利用p Genesil10-3p質(zhì)粒構(gòu)建的靶向UL27、UL54的雙sh RNA質(zhì)粒表達(dá)載體(Dual-sh RNA),靶向UL27的單sh RNA質(zhì)粒表達(dá)載體(UL27-sh RNA)和靶向UL54的單sh RNA質(zhì)粒表達(dá)載體(UL54-sh RNA),通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞,采用熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效果,并對轉(zhuǎn)染后細(xì)胞接種HSV-2病毒。24 h后采用MTT法檢測細(xì)胞存活率;終點滴定法檢測細(xì)胞上清液中病毒滴度;QPCR(Quantitative Real-time PCR,QPCR)檢測UL27和UL54的m RNA的表達(dá)水平;蛋白印跡法檢測g B和ICP27蛋白表達(dá)量,比較雙sh RNA質(zhì)粒表達(dá)載體介導(dǎo)雙基因干擾與UL27-sh RNA+UL54-sh RNA聯(lián)合介導(dǎo)的雙基因干擾以及單基因干擾對UL27、UL54的抑制效果,探討雙sh RNA質(zhì)粒表達(dá)載體對HSV-2病毒增殖的影響。結(jié)果:(1)MTT法檢測結(jié)果表明,單基因干擾組UL27-sh RNA、UL54-sh RNA均能不同程度提高細(xì)胞存活率,分別為78±2.65%,68.67±3.21%;聯(lián)合干擾和Dual-sh RNA組的細(xì)胞存活率最高,分別為91.67±1.53%、90.33±1.15%;聯(lián)合干擾、Dual-sh RNA、單干擾組同陰性對照組相比具有顯著差異(P0.05),聯(lián)合干擾組與Dual-sh RNA組之間無顯著差異。(2)終點滴定法測定結(jié)果顯示,各干擾組子代病毒滴度均有不同程度降低,單干擾組UL27-sh RNA、UL54-sh RNA的子代病毒滴度分別為10-3.2±0.3、10-3.4±0.1;聯(lián)合干擾組和Dual-sh RNA作用較為明顯其子代病毒滴度分別為10-2.07±0.15、10-2.2±0.26,與單干擾組及空白組相比均具有顯著差異(P0.05),聯(lián)合干擾組與Dual-sh RNA組之間無顯著差異。(3)QPCR檢測結(jié)果,各干擾組中UL27和UL54m RNA表達(dá)水平均有不同程度降低,聯(lián)合干擾組抑制率為85.3±1.53%和81.3±6.51%;Dual-sh RNA抑制率為84±1%和87.7±2.08%,分別與單干擾組及陰性對照組相比具有顯著差異(P0.05),聯(lián)合干擾組與Dual-sh RNA組之間無顯著差異。UL27-sh RNA組中UL27 m RNA表達(dá)抑制率為65.3±2.52%;UL54-sh RNA組中UL54 m RNA表達(dá)抑制率為71.6±3.51%,分別與空白對照組相比均有顯著差異(P0.05)。(4)WB檢測g B和ICP27蛋白表達(dá)量,結(jié)果顯示各干擾組能不同程度降低靶基因蛋白表達(dá)量,雙干擾組中目的蛋白表達(dá)量明顯降低,與單干擾組相應(yīng)蛋白表達(dá)量相比具有顯著差異(P0.05),聯(lián)合干擾組與Dual-sh RNA組之間同一目的蛋白表達(dá)量無顯著差異。結(jié)論:雙sh RNA質(zhì)粒表達(dá)載體能夠有效地抑制HSV-2目的基因表達(dá);雙sh RNA質(zhì)粒表達(dá)載體介導(dǎo)的雙基因干擾與兩種單sh RNA質(zhì)粒表達(dá)載體介導(dǎo)的雙基因干擾對HSV-2病毒復(fù)制的抑制效果相同;雙基因干擾優(yōu)于單基因干擾對HSV-2病毒的抑制作用。
【關(guān)鍵詞】：Ⅱ型單純皰疹病毒 UL27基因 UL54基因 短發(fā)卡RNA RNA干擾 雙shRNA表達(dá)載體
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：Q78;R373
【目錄】：

• 中英縮略詞對照表4-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-14
• 材料與方法14-29
• 結(jié)果29-36
• 討論36-39
• 結(jié)論39
• 展望39-41
• 參考文獻(xiàn)41-45
• 綜述 RNA干擾治療Ⅱ型單純皰疹病毒研究進(jìn)展45-56
• 參考文獻(xiàn)52-56
• 致謝56-57
• 作者簡介57

【參考文獻(xiàn)】

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 潘曉瑜;UL27、UL54基因shRNA聯(lián)合干擾HSV-2復(fù)制研究[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2013年

  本文關(guān)鍵詞：雙shRNA表達(dá)載體對HSV-2的UL27、UL54基因的干擾作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：267981