本文關(guān)鍵詞：MiR-141-3p在小鼠胚胎成纖維細(xì)胞衰老中的作用機(jī)制探索，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本文通過構(gòu)建動(dòng)物和細(xì)胞衰老模型,重點(diǎn)研究了衰老過程中miR-141-3p的變化規(guī)律,及其相關(guān)調(diào)控機(jī)制。深度測(cè)序的結(jié)果表明:與年青組SD大鼠相比,雖然成年組腦組織的miR-141-3p水平上調(diào),但老年組顯著下調(diào)。qPCR檢測(cè)的結(jié)果與深度測(cè)序檢測(cè)的結(jié)果趨勢(shì)相同;且生物信息學(xué)分析的結(jié)果顯示:氧化應(yīng)激的上游轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子Nrf2的調(diào)控基因Keap1是miR-141-3p的靶基因。因而,本文構(gòu)建了H2O2誘導(dǎo)的NIH3T3細(xì)胞衰老模型,結(jié)果發(fā)現(xiàn):與正常對(duì)照組相比,衰老細(xì)胞的生長(zhǎng)減緩,SA-β-gal染色陽(yáng)性率上升,miR-141-3p表達(dá)量下降,Keap1和Nrf2蛋白表達(dá)量均上升。進(jìn)而,本文合成了miR-141-3p mimic和inhibitor,研究了它們對(duì)衰老細(xì)胞模型的作用,結(jié)果顯示:miR-141-3p mimic能改善細(xì)胞的衰老表型,并下調(diào)Keap1、Nrf2的mRNA和蛋白表達(dá);而與之相對(duì),miR-141-3p inhibitor會(huì)促進(jìn)細(xì)胞的衰老表型,并上調(diào)Keap1、Nrf2的mRNA和蛋白表達(dá)。綜合以上,衰老過程中miR-141-3p的表達(dá)下降,可能通過調(diào)控Keap1-Nrf2/ARE氧化應(yīng)激通路,從而加速衰老。
【關(guān)鍵詞】：mi R-141-3p 衰老 Keap1 Nrf2 氧化應(yīng)激
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-9
• 一、綜述9-16
• 1.1 衰老與mi RNA9-13
• 1.1.1 組織衰老和miRNA10-11
• 1.1.2 細(xì)胞衰老和miRNA11-12
• 1.1.3 miRNA衰老研究新思路12-13
• 1.2 氧化應(yīng)激通路13-15
• 1.3 本論文切入點(diǎn)與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路15-16
• 二、不同年齡大鼠腦內(nèi)miR-141-3p的表達(dá)變化16-23
• 2.1 引言16
• 2.2 材料與方法16-20
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料和試劑16-17
• 2.2.2 動(dòng)物造模17
• 2.2.3 miRNAs抽提17-19
• 2.2.4 miRNAs深度測(cè)序19
• 2.2.5 生物信息學(xué)分析19-20
• 2.2.6 qPCR驗(yàn)證miR-141-3p的表達(dá)量20
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-23
• 2.3.1 miR-141-3p的差異表達(dá)20-21
• 2.3.2 差異表達(dá)的miR-141-3p潛在的靶基因和調(diào)控通路21-23
• 三、細(xì)胞衰老對(duì)miR-141-3p及其靶基因的影響23-41
• 3.1 引言23
• 3.2 材料和方法23-35
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料和試劑23-25
• 3.2.2 細(xì)胞造模25-27
• 3.2.3 SA-β-gal染色及活性測(cè)定27-28
• 3.2.4 不同濃度H2O2對(duì)NIH3T3生長(zhǎng)的影響28-29
• 3.2.5 MDA濃度檢測(cè)29-30
• 3.2.6 生長(zhǎng)曲線的測(cè)定30
• 3.2.7 qPCR檢測(cè)miR-141-3p表達(dá)量30-33
• 3.2.8 Westren Blot檢測(cè)Keap1、Nrf2蛋白表達(dá)量33-35
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-41
• 3.3.1 SA-β-gal染色及活性測(cè)定35-37
• 3.3.2 生化指標(biāo)的檢測(cè)37-38
• 3.3.3 生長(zhǎng)曲線38
• 3.3.4 miR-141-3p表達(dá)量38-39
• 3.3.5 Keap1、Nrf2蛋白表達(dá)量39-41
• 四、miR-141-3p功能分析41-55
• 4.1 引言41
• 4.2 材料和方法41-50
• 4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料和試劑41-42
• 4.2.2 轉(zhuǎn)染42-43
• 4.2.3 qPCR檢測(cè)miR-141-3p表達(dá)量43-47
• 4.2.4 SA-β-gal活性47
• 4.2.5 qPCR檢測(cè)Keap1、Nrf2 mRNA表達(dá)量47-50
• 4.2.6 Westren blot檢測(cè)Keap1、Nrf2蛋白表達(dá)量50
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果50-55
• 4.3.1 轉(zhuǎn)染效率50-51
• 4.3.2 miR-141-3p表達(dá)量51
• 4.3.3 SA-β-gal活性51-52
• 4.3.4 Keap-1、Nrf2 mRNA表達(dá)量52-53
• 4.3.5 Keap-1、Nrf2蛋白表達(dá)量53-55
• 五、討論與總結(jié)55-58
• 參考文獻(xiàn)58-65
• 已發(fā)表的論文目錄65-66
• 致謝66

【共引文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：MiR-141-3p在小鼠胚胎成纖維細(xì)胞衰老中的作用機(jī)制探索，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：267626