【摘要】：目的通過(guò)本研究,探討過(guò)表達(dá)P2X4R對(duì)6-羥基多巴(6-OHDA)誘導(dǎo)的帕金森病(Parkinson’s disease,PD)大鼠模型中黑質(zhì)內(nèi)白介素-1β(Interleukin-1β;IL-1β)、白介素-18(Interleukin-18;IL-18)表達(dá)的影響,從而研究P2X4R及其介導(dǎo)炎性因子IL-1β以及IL-18的表達(dá)在PD發(fā)病機(jī)制中的作用。方法采用200~250 g Wistar雄性大鼠,按照完全隨機(jī)原則分為6組,每組大鼠采用以下不同的處理方法:1.對(duì)照組:大鼠左側(cè)黑質(zhì)定位注射含0.02%抗壞血酸的生理鹽水;2.6-OHDA組:大鼠左側(cè)黑質(zhì)定位注射6-OHDA;3.目的基因陰性對(duì)照(RNAP2X4)組:大鼠左側(cè)黑質(zhì)定位注射攜帶過(guò)表達(dá)P2X4R的目的慢病毒;4.RNA-P2X4+6-OHDA組:大鼠經(jīng)左側(cè)黑質(zhì)定位注射攜帶過(guò)表達(dá)P2X4R的目的慢病毒1周后,再次于左側(cè)黑質(zhì)定位注射6-OHDA;5.空載病毒陰性對(duì)照(P2X4-NC)組:大鼠左側(cè)黑質(zhì)定位注射空載陰性病毒;6.P2X4-NC+6-OHDA:大鼠經(jīng)左側(cè)黑質(zhì)定位注射空載陰性病毒1周后,再次于左側(cè)黑質(zhì)定位注射6-OHDA。根據(jù)以上不同處理,各組大鼠造模完成2周后,分別給予腹腔注射阿撲嗎啡進(jìn)行行為學(xué)檢測(cè),篩選造模成功(右側(cè)旋轉(zhuǎn)速率≥7/min)大鼠繼續(xù)進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。于造模4周后將各組造模后大鼠以10%水合氯醛腹腔注射麻醉后斷頭取腦,取出腦組織分別進(jìn)行不同處理保存?zhèn)溆谩Ｍㄟ^(guò)免疫熒光染色方法檢測(cè)各組大鼠腦組織黑質(zhì)中的TH陽(yáng)性多巴胺能神經(jīng)元數(shù)量的變化情況,應(yīng)用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)P2X4R、IL-1β以及IL-18在各組大鼠腦組織黑質(zhì)中的m RNA相對(duì)表達(dá)量,應(yīng)用Western blot法分別檢測(cè)各組黑質(zhì)中P2X4R、IL-1β以及IL-18蛋白表達(dá)水平。結(jié)果1.熒光定量PCR結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比,6-OHDA組、P2X4-NC+6-OHDA組模型大鼠腦組織黑質(zhì)中P2X4R、IL-1β及IL-18的m RNA含量顯著增多(P0.001);與P2X4-NC+6-OHDA組比較,RNA-P2X4+6-OHDA組模型大鼠腦組織黑質(zhì)中P2X4R的m RNA含量顯著增多(P0.01),IL-1β的m RNA含量顯著增多(P0.05),IL-18的m RNA含量顯著增多(P0.001),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.免疫熒光染色結(jié)果顯示:與對(duì)照組比較,6-OHDA組、P2X4-NC+6-OHDA組模型大鼠腦組織黑質(zhì)中TH陽(yáng)性多巴胺能神經(jīng)元計(jì)數(shù)顯著減少(P0.001);與P2X4-NC+6-OHDA組比較,RNAP2X4+6-OHDA組模型大鼠黑質(zhì)TH陽(yáng)性多巴胺能神經(jīng)元數(shù)量減少(P0.001),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。P2X4-NC組和RNA-P2X4組模型大鼠腦組織黑質(zhì)中TH陽(yáng)性多巴胺能神經(jīng)元數(shù)量與對(duì)照組進(jìn)行比較,結(jié)果無(wú)顯著差異。3.Western blot結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,6-OHDA組、P2X4-NC+6-OHDA組模型大鼠腦組織黑質(zhì)中P2X4R、IL-1β及IL-18的蛋白相對(duì)表達(dá)量增加(P0.001);與P2X4-NC+6-OHDA組比較,RNA-P2X4+6-OHDA組模型大鼠腦組織黑質(zhì)中P2X4R的蛋白相對(duì)表達(dá)量增加(P0.01),IL-1β的蛋白相對(duì)表達(dá)量增加(P0.001),IL-18的蛋白相對(duì)表達(dá)量增加(P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論通過(guò)本研究結(jié)果顯示,通過(guò)慢病毒介導(dǎo)P2X4R過(guò)表達(dá)可上調(diào)大鼠黑質(zhì)中炎性因子IL-1β及IL-18的表達(dá),從而對(duì)多巴胺能神經(jīng)元有一定損傷作用,對(duì)PD的發(fā)生發(fā)展過(guò)程產(chǎn)生影響。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R742.5;R-332

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 汪錫金,陳生弟;帕金森病與免疫(綜述)[J];中國(guó)神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志;2005年01期

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1 鄭雨;煙酰胺單核苷酸腺苷酰轉(zhuǎn)移酶1對(duì)慢性帕金森病小鼠模型黑質(zhì)中TH及Caspase3蛋白表達(dá)的影響[D];青島大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：2662455