【摘要】：銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是一種重要的條件致病菌,能夠引起泌尿系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)感染。同時(shí),銅綠假單胞菌具有普遍的耐藥性和環(huán)境適應(yīng)性。因此,預(yù)防和控制銅綠假單胞菌的感染是當(dāng)前病原微生物學(xué)研究中的一項(xiàng)重要課題。銅綠假單胞菌中的群體感應(yīng)系統(tǒng)(Quorum-sensing,QS)控制著眾多致病因子的表達(dá),在其感染過(guò)程中起著關(guān)鍵性作用。銅綠假單胞菌群體感應(yīng)系統(tǒng)是一個(gè)非常復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò),根據(jù)其信號(hào)通路的不同分為三種,分別是Las、Rhl以及PQS系統(tǒng)。盡管以前對(duì)群體感應(yīng)系統(tǒng)的調(diào)控做了大量研究,但其調(diào)控機(jī)制尚未完全闡明。本研究通過(guò)構(gòu)建轉(zhuǎn)座突變庫(kù),在細(xì)菌全基因組水平篩選參與PQS信號(hào)合成的基因。我們總共篩選到了11個(gè)影響PQS合成酶基因pqsH表達(dá)的突變體,并對(duì)其中的一個(gè)蛋白PA1429進(jìn)行了深入研究。結(jié)果表明,PA1429基因缺失突變后,PQS的合成基因pqsH,pqsA及PQS的調(diào)節(jié)基因pqsR的表達(dá)水平明顯升高。同時(shí),Las系統(tǒng)和Rhl系統(tǒng)相關(guān)基因的表達(dá)也顯著增強(qiáng),說(shuō)明PA1429負(fù)調(diào)節(jié)QS系統(tǒng)的表達(dá)。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn),PA1429突變后,細(xì)菌運(yùn)動(dòng)能力增強(qiáng),生物被膜的形成增多,小鼠急性肺炎感染的毒力升高。此外,PA1429基因缺失使細(xì)菌對(duì)氧化壓力的敏感性升高,且PqsH介導(dǎo)了PA1429對(duì)氧化壓力的敏感性。綜上所述,我們發(fā)現(xiàn)了銅綠假單胞菌PA1429是一個(gè)全新的QS系統(tǒng)及相關(guān)毒力的調(diào)控蛋白,并對(duì)其調(diào)控機(jī)制進(jìn)行了初步研究。本研究結(jié)果進(jìn)一步豐富了對(duì)銅綠假單胞菌群體感應(yīng)系統(tǒng)和毒力調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的認(rèn)識(shí),為銅綠假單胞菌的防控提供了一定的理論基礎(chǔ)。
【圖文】：

西北大學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位論文，在細(xì)菌到穩(wěn)定期達(dá)到最大量[36]。研究發(fā)現(xiàn) PQS 系統(tǒng)同樣生、生物被膜的形成等多種毒性因子的表達(dá)[34,35]。在這兩個(gè)系統(tǒng)之間有著連接的作用，一方面 PQS 系統(tǒng)正調(diào)控I 基因有正調(diào)控的作用；另一方面 PQS 系統(tǒng)受到 Las 系統(tǒng)的控調(diào)控[37]。如 PQS 信號(hào)分子的合成所需的基因 pqsH、pqsR，并且 pqsR 還受到 RhlR 蛋白的負(fù)調(diào)控的作用，它們之間有示，銅綠假單胞菌 QS 系統(tǒng)可以在不同的層次上調(diào)節(jié)各種毒復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)[40]。除了這三個(gè)系統(tǒng)外,一定還存在許多未亟待我們的進(jìn)一步探究。

以可以將待檢測(cè)基因的啟動(dòng)子連于其前端，，使目酶基因表達(dá)，表達(dá)的熒光素酶催化底物產(chǎn)生發(fā)光道載體的化學(xué)發(fā)光強(qiáng)弱來(lái)反應(yīng)目的基因在不同環(huán)基本過(guò)程說(shuō)明如下[75]：。根據(jù)目的基因的啟動(dòng)子序列設(shè)計(jì)引物，以PAO1產(chǎn)物進(jìn)行切膠純化回收。。目的片段和 pMS402 質(zhì)粒同樣用 XhoI 和 BamHI接。利用化學(xué)轉(zhuǎn)化將連接產(chǎn)物導(dǎo)入 E. coli DH5α 感受在含 Kan 的 LB 平板上。。將平板上長(zhǎng)出的單克隆通過(guò) PCR 擴(kuò)增驗(yàn)證，正酶切驗(yàn)證。兩次驗(yàn)證均正確后得到所需載體，低
【學(xué)位授予單位】：西北大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R378

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 楊帆;張樂(lè);盛哈蕾;張克斌;;銅綠假單胞菌中群體感應(yīng)系統(tǒng)的研究進(jìn)展[J];中國(guó)抗生素雜志;2012年01期

2 孔偉娜;梁海華;沈立新;段康民;;銅綠假單胞菌中Ⅲ型分泌系統(tǒng)受Rhl和PQS群體感應(yīng)系統(tǒng)調(diào)節(jié)[J];微生物學(xué)報(bào);2009年09期

本文編號(hào)：2646363