【摘要】：銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是一種重要的條件致病菌,能夠引起泌尿系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)感染。同時,銅綠假單胞菌具有普遍的耐藥性和環(huán)境適應(yīng)性。因此,預(yù)防和控制銅綠假單胞菌的感染是當(dāng)前病原微生物學(xué)研究中的一項重要課題。銅綠假單胞菌中的群體感應(yīng)系統(tǒng)(Quorum-sensing,QS)控制著眾多致病因子的表達,在其感染過程中起著關(guān)鍵性作用。銅綠假單胞菌群體感應(yīng)系統(tǒng)是一個非常復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò),根據(jù)其信號通路的不同分為三種,分別是Las、Rhl以及PQS系統(tǒng)。盡管以前對群體感應(yīng)系統(tǒng)的調(diào)控做了大量研究,但其調(diào)控機制尚未完全闡明。本研究通過構(gòu)建轉(zhuǎn)座突變庫,在細菌全基因組水平篩選參與PQS信號合成的基因。我們總共篩選到了11個影響PQS合成酶基因pqsH表達的突變體,并對其中的一個蛋白PA1429進行了深入研究。結(jié)果表明,PA1429基因缺失突變后,PQS的合成基因pqsH,pqsA及PQS的調(diào)節(jié)基因pqsR的表達水平明顯升高。同時,Las系統(tǒng)和Rhl系統(tǒng)相關(guān)基因的表達也顯著增強,說明PA1429負調(diào)節(jié)QS系統(tǒng)的表達。進一步的研究發(fā)現(xiàn),PA1429突變后,細菌運動能力增強,生物被膜的形成增多,小鼠急性肺炎感染的毒力升高。此外,PA1429基因缺失使細菌對氧化壓力的敏感性升高,且PqsH介導(dǎo)了PA1429對氧化壓力的敏感性。綜上所述,我們發(fā)現(xiàn)了銅綠假單胞菌PA1429是一個全新的QS系統(tǒng)及相關(guān)毒力的調(diào)控蛋白,并對其調(diào)控機制進行了初步研究。本研究結(jié)果進一步豐富了對銅綠假單胞菌群體感應(yīng)系統(tǒng)和毒力調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的認(rèn)識,為銅綠假單胞菌的防控提供了一定的理論基礎(chǔ)。
【圖文】：

西北大學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位論文，在細菌到穩(wěn)定期達到最大量[36]。研究發(fā)現(xiàn) PQS 系統(tǒng)同樣生、生物被膜的形成等多種毒性因子的表達[34,35]。在這兩個系統(tǒng)之間有著連接的作用，一方面 PQS 系統(tǒng)正調(diào)控I 基因有正調(diào)控的作用；另一方面 PQS 系統(tǒng)受到 Las 系統(tǒng)的控調(diào)控[37]。如 PQS 信號分子的合成所需的基因 pqsH、pqsR，并且 pqsR 還受到 RhlR 蛋白的負調(diào)控的作用，它們之間有示，銅綠假單胞菌 QS 系統(tǒng)可以在不同的層次上調(diào)節(jié)各種毒復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)[40]。除了這三個系統(tǒng)外,一定還存在許多未亟待我們的進一步探究。

以可以將待檢測基因的啟動子連于其前端，，使目酶基因表達，表達的熒光素酶催化底物產(chǎn)生發(fā)光道載體的化學(xué)發(fā)光強弱來反應(yīng)目的基因在不同環(huán)基本過程說明如下[75]：。根據(jù)目的基因的啟動子序列設(shè)計引物，以PAO1產(chǎn)物進行切膠純化回收。。目的片段和 pMS402 質(zhì)粒同樣用 XhoI 和 BamHI接。利用化學(xué)轉(zhuǎn)化將連接產(chǎn)物導(dǎo)入 E. coli DH5α 感受在含 Kan 的 LB 平板上。。將平板上長出的單克隆通過 PCR 擴增驗證，正酶切驗證。兩次驗證均正確后得到所需載體，低
【學(xué)位授予單位】：西北大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R378

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 楊帆;張樂;盛哈蕾;張克斌;;銅綠假單胞菌中群體感應(yīng)系統(tǒng)的研究進展[J];中國抗生素雜志;2012年01期

2 孔偉娜;梁海華;沈立新;段康民;;銅綠假單胞菌中Ⅲ型分泌系統(tǒng)受Rhl和PQS群體感應(yīng)系統(tǒng)調(diào)節(jié)[J];微生物學(xué)報;2009年09期

本文編號：2646363