【摘要】：目的:以痤瘡大鼠炎癥模型為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,觀察大鼠耳廓組織大體觀改變、組織病理表現(xiàn)以及TNF-α、MMP-2蛋白表達(dá)情況,探討h AMSCs培養(yǎng)上清液對(duì)痤瘡大鼠炎癥模型的影響。方法:選取SD大鼠,雌性,體重(250±30)g,共49只,隨機(jī)分為A、B、C、D、E、F、G七組,每組7只,A組為正�？瞻讓�(duì)照組、B組為生理鹽水注射組、C組為痤瘡模型組、D組為痤瘡模型未治療組、E組為痤瘡模型異維A酸紅霉素凝膠涂擦治療組、F組為痤瘡模型h AMSC培養(yǎng)上清液涂擦治療組、G組為痤瘡模型h AMSC培養(yǎng)上清液注射治療組。A組不予特殊處理,7天后處死;B組給予無菌生理鹽水50μl,大鼠雙側(cè)耳廓中央皮下注射,共1次,7天后處死。C、D、E、F、G組均給予痤瘡丙酸桿菌混懸液50μl,大鼠雙側(cè)耳廓中央皮下注射,共1次,建立痤瘡模型。C組于建模7天后處死;D組建模7天后繼續(xù)觀察4周后處死;E組建模7天后給予局部涂擦異維A酸紅霉素凝膠,每天1次,共4周后處死;F組建模7天后局部涂擦h AMSCs培養(yǎng)上清液,方法同E組;G組建模7天后給予局部注射h AMSCs培養(yǎng)上清液,每周2次,共4周后處死。建模2天后用無菌針頭挑取耳廓腫脹部位組織接種于血平板,厭氧罐中培養(yǎng)48小時(shí),肉眼觀察菌落形態(tài);無菌針頭挑取菌落,涂片,光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)菌形態(tài)。實(shí)驗(yàn)期間,7組動(dòng)物均正常飼養(yǎng),每天觀察大鼠耳廓組織大體觀改變;各組大鼠在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,處死,取大鼠耳廓組織行HE染色觀察耳廓組織病理改變;免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)各組耳廓組織TNF-α、MMP-2蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:1、微生物學(xué)檢查:建模后用無菌針頭挑取耳廓腫脹部位組織微生物學(xué)檢查證實(shí)為痤瘡丙酸桿菌感染。2、造模結(jié)果判斷:1)肉眼觀察結(jié)果:A組耳廓無變化;B組于注射當(dāng)時(shí)形成腫脹,24小時(shí)后腫脹消退;C組大鼠耳廓局部皮膚腫脹,可見丘疹。2)組織病理觀察結(jié)果:A、B組未見明顯炎癥細(xì)胞浸潤;C組表皮角化過度,部分毛囊口擴(kuò)張,面積增大,毛囊皮脂腺周圍及真皮內(nèi)炎癥細(xì)胞彌漫性浸潤,各層分界不清。3)TNF-α和MMP-2免疫組織化學(xué)觀察結(jié)果:A、B組可見弱陽性蛋白表達(dá);C組可見蛋白呈強(qiáng)陽性表達(dá);C組與A、B組比較蛋白陽性表達(dá)上調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3、痤瘡模型未治療組與治療組結(jié)果判斷:1)肉眼觀察結(jié)果:D組大鼠耳廓丘疹明顯增多增大;E、F、G組耳廓丘疹基本消退。2)組織病理觀察結(jié)果:D組結(jié)果基本同C組;E、F、G組毛囊口面積縮小,真皮及毛囊皮脂腺周圍可見少量炎癥細(xì)胞浸潤。3)TNF-α和MMP-2免疫組織化學(xué)觀察結(jié)果:D組與C組比較大鼠耳廓組織中陽性蛋白表達(dá)無明顯增減,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);E、F、G組與C、D組比較陽性蛋白表達(dá)下調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);E、F、G組與A、B組比較陽性蛋白表達(dá)無明顯增減,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);E、F、G組組間比較陽性蛋白表達(dá)無明顯差異,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.h AMSCs培養(yǎng)上清液干預(yù)可減輕大鼠耳廓炎癥反應(yīng),其機(jī)制可能是通過上清液中IL-10、TIMP來抑制TNF-α、MMP-2的表達(dá),從而減輕炎癥反應(yīng)。2.h AMSCs培養(yǎng)上清液涂擦治療組與注射治療組無明顯療效差異。
【圖文】：

圖 1：a 瓊脂表面可見針尖至粟粒大小半球形白色菌落生長。b 鏡下表現(xiàn)呈革蘭弱陽性分節(jié)狀的粗大桿菌。.2 造模結(jié)果判斷．2．1 肉眼觀察結(jié)果（圖2）。A組 雙側(cè)耳廓無變化；B組于注射當(dāng)時(shí)形成腫脹，24小時(shí)后腫脹消退廓增厚，質(zhì)地較硬，表面粗糙，可見散在丘疹。

亂的粗大桿菌。2.2 造模結(jié)果判斷2．2．1 肉眼觀察結(jié)果（圖2）。A組 雙側(cè)耳廓無變化；B組于注射當(dāng)時(shí)形成腫脹，，24小時(shí)后腫脹消退；C組耳廓增厚，質(zhì)地較硬，表面粗糙，可見散在丘疹。A B
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R758.733;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2642217