【摘要】：應(yīng)激可以引起機(jī)體產(chǎn)生一系列復(fù)雜的生理和心理反應(yīng)。過于強(qiáng)烈或持久的應(yīng)激反應(yīng)往往導(dǎo)致認(rèn)知功能障礙、情緒行為改變等,甚至誘發(fā)焦慮癥、抑郁癥和創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙等嚴(yán)重的神經(jīng)精神問題。有大量研究表明內(nèi)源性阿片系統(tǒng)在學(xué)習(xí)記憶過程中有著重要的調(diào)控作用。同時(shí)應(yīng)激反應(yīng)產(chǎn)生的內(nèi)源性阿片肽和糖皮質(zhì)激素之間存在密切關(guān)系。但內(nèi)源性阿片系統(tǒng)是否參與急性應(yīng)激引起的學(xué)習(xí)記憶的損傷,其機(jī)制目前尚不明確。本實(shí)驗(yàn)室前期研究利用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)高臺應(yīng)激50 min損傷小鼠空間參考記憶的提取,且阻斷μ阿片受體可以反轉(zhuǎn)高臺應(yīng)激引起的空間參考記憶提取的損傷效應(yīng)。以上行為學(xué)結(jié)果提示μ阿片受體系統(tǒng)可能參與調(diào)控急性應(yīng)激引起的小鼠空間參考記憶提取,但是在急性應(yīng)激過程中μ阿片受體及其配體的變化并不清楚。本課題通過分子生物學(xué)方法觀察急性應(yīng)激引起的μ阿片受體和配體的變化,并在此基礎(chǔ)上構(gòu)建GABA能神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和谷氨酸能神經(jīng)元上μ阿片受體的條件特異性基因敲除鼠,為進(jìn)一步研究μ阿片受體介導(dǎo)急性應(yīng)激后記憶損傷的具體途徑提供技術(shù)基礎(chǔ)。結(jié)果分為兩部分:第一部分:μ阿片受體和內(nèi)源性阿片肽在急性應(yīng)激中的變化(1)ELISA檢測高臺應(yīng)激50min后小鼠海馬腦啡肽含量顯著升高,說明急性應(yīng)激通過增強(qiáng)腦啡肽釋放而引發(fā)記憶損傷。(2)Western Blot檢測高臺應(yīng)激后小鼠海馬μ阿片受體磷酸化水平和細(xì)胞膜上μ阿片受體的表達(dá)量,結(jié)果顯示急性應(yīng)激引起μ阿片受體的磷酸化水平顯著升高,應(yīng)激25 min細(xì)胞膜上μ阿片受體無明顯變化,應(yīng)激50 min細(xì)胞膜上μ阿片受體顯著減少,說明急性應(yīng)激激活μ阿片受體。(3)高臺應(yīng)激50min小鼠血清皮質(zhì)酮含量顯著升高,μ阿片受體拮抗劑預(yù)處理并不影響高臺應(yīng)激導(dǎo)致的皮質(zhì)酮的釋放增高,說明μ阿片受體活化介導(dǎo)的空間參考記憶的損傷效應(yīng)獨(dú)立于皮質(zhì)酮及其受體介導(dǎo)的途徑。第二部分:細(xì)胞特異μ阿片受體基因條件性敲除鼠的構(gòu)建和鑒定(1)利用Cre/Loxp基因重組系統(tǒng)對特定基因進(jìn)行組織特異性刪除。本研究利用此原理構(gòu)建細(xì)胞特異μ阿片受體基因條件性敲除鼠,PCR選擇條件性敲除鼠的全敲鼠和對照鼠。(2)Western Blot檢測GABA能神經(jīng)元μ阿片受體基因特異性敲除鼠海馬和紋狀體的μ阿片受體的表達(dá)情況,結(jié)果顯示μRGABA-/-海馬和紋狀體μ阿片受體表達(dá)減少。檢測星形膠質(zhì)細(xì)胞μ阿片受體基因特異性敲除鼠海馬的μ阿片受體的表達(dá)情況,結(jié)果顯示μRAstro-/-海馬μ阿片受體表達(dá)減少。檢測谷氨酸能神經(jīng)元μ阿片受體基因特異性敲除鼠海馬的μ阿片受體的表達(dá)情況,結(jié)果顯示μRGlut-/-海馬μ阿片受體表達(dá)無明顯變化。(3)免疫熒光多重標(biāo)記檢測μRGABA-/-和μRAstro-/-基因鼠海馬μ阿片受體的表達(dá)。綜合以上結(jié)果GABA能神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞μ阿片受體基因條件特異性敲除鼠構(gòu)建成功。
【圖文】：

圖１－１應(yīng)激系統(tǒng)ｍ逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－１邋Ｔｈｅ邋ｓｔｒｅｓｓ邋ｓｙｓｔｅｍ．逡逑

圖２－１急性應(yīng)激對小鼠海馬ＥＮＫ含量的影響
【學(xué)位授予單位】：陜西師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R338

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2636731