【摘要】：樹突狀細胞(dendritic cells,DCs)是最為重要的專職性抗原提呈細胞(antigen presenting cells,APC),其所誘生的CD8+T細胞應答是機體抗腫瘤和抗胞內微生物感染的重要效應細胞。我們前期的研究發(fā)現,乙酰膽堿N型受體激動劑尼古丁刺激可促進CD8+DCs介導的抗原交叉提呈,從而增強其抗腫瘤效應。甘露糖受體MR作為DCs表面最重要的模式識別受體之一,它所介導的抗原內吞是CD8+DCs介導抗原交叉提呈的關鍵步驟。文獻報道,OVA負載能夠促進MR的K48多聚泛素化從而促進抗原至內體的定位,我們前期的研究也發(fā)現,尼古丁刺激不僅上調了 MR的表達而且也促進了內吞抗原轉運至內體。但截至到目前,我們尚不清楚,MR發(fā)生K48多聚泛素化修飾過程中關鍵的E3連接酶以及其在CD8+DCs介導抗原交叉提呈中的作用。為此,本課題首先以Real-time PCR、Western Blot篩選可能的針對MR的K48多聚泛素化修飾的關鍵E3連接酶;次以免疫共沉淀技術檢測E3連接酶C-Cbl以及Cbl-c在內體中的定位以及與MR的相互作用情況;再以基因沉默結合免疫共沉淀技術檢測C-Cbl以及Cbl-c基因沉默對MR的K48多聚泛素化修飾的影響;最后通過流式細胞術、激光共聚焦顯微鏡檢測C-Cbl以及Cbl-c基因沉默對交叉提呈產物SIINFEKL-H2Kb形成的影響。結果顯示:乙酰膽堿N型受體激動劑尼古丁刺激能夠促進E3連接酶C-Cbl和Cbl-c基因水平和蛋白水平的表達;尼古丁刺激顯著增強了 Cbl的磷酸化激活;尼古丁刺激不僅增加了 C-Cbl以及Cbl-c至內體的定位,而且促進了其與MR的相互作用;E3連接酶C-Cbl和Cbl-c基因沉默不僅逆轉了尼古丁刺激對MR的K48多聚泛素化的增強作用,而且減弱了 CD8+DCs交叉提呈的能力。綜上所述,本課題發(fā)現了 MR的K48多聚泛素化修飾過程中關鍵的E3連接酶,進而完善了尼古丁促進MR的K48多聚泛素化修飾從而增強CD8+DC交叉提呈的具體分子機制。
【圖文】：

外源性抗原攝取的機制決定了它被提呈的途徑，研究表明，如果模式逡逑抗原ＯＶＡ經ＭＲ介導進入ＤＣｓ，那么ＯＶＡ將被靶向到早期內體進而發(fā)生交叉逡逑提呈反應啟動ＣＤ８＋的Ｔ細胞免疫應答，如圖２所示；而清道夫受體介導外源性逡逑抗原內吞進入溶酶體降解為抗原肽，進而與ＭＨＣＩＩ類分子結合，最終引起ＣＤ４＋逡逑的Ｔ細胞免疫應答［Ｍ］。由此我們知道，ＭＲ是ＤＣｓ介導抗原發(fā)生交叉提呈的關逡逑鍵受體。ＢｕｒｇｄｏｒｆＳ等人的研宄發(fā)現，ＭＲ的胞質區(qū)發(fā)生Ｋ４８多聚泛素化修飾是逡逑ＭＲ介導內吞抗原轉位至胞質中的先決條件〖６］。我們實驗室前期的研宄也發(fā)現，，逡逑乙酰膽堿Ｎ型受體激動劑尼古丁能夠顯著增強ＤＣｓ的交叉提呈能力［８］，并且尼逡逑古丁刺激通過激活ＰＩ３Ｋ－Ａｋｔ－ｍＴＯＲ－ｐ７０Ｓ６通路上調了邋ＭＲ的表達［１３］。提示ＭＲ逡逑介導的內吞抗原定位于早期內體是ＣＤ８＋ＤＣＳ介導抗原交叉提呈的關鍵環(huán)節(jié)，ＭＲ逡逑的Ｋ４８多聚泛素化修飾在此環(huán)節(jié)中占據重要地位。逡逑ＣＷ邐ＣＯＳ＇邐丫邋ＭＲ邋ｐ邋ＭＨＣＩ逡逑Ｔ邐由邋ｄ邐了邋⑶逡逑？ｐｉｎ0ｏ＿＊邐＊°ＶＡ邋ＭＨＣＨ逡逑＊邐＊邋ＯＶＡ－ｄｅｒｌｖｅｄ逡逑ＳＲ－ｍ？＜ｌｉａｔｅｄ邋／逡逑ｅｏｄｏｃｙｔｏｓｉｉ／邋＼邐＼逡逑呭巍獤躵>ＴＫ＇．“逡逑圖２迎介導的＃埃福郹埃８交叉提呈過程逡逑（ＢｕｒｇｄｏｒｆＳ，邋Ｓｃｉｅｎｃｅ．邋２００７，２７：３１６－６１２）逡逑３逡逑

的巨噬細胞以及內皮細胞中。ＭＲ是由Ｎ端富含半胱氨酸的區(qū)域、ＩＩ型纖連蛋白逡逑重復區(qū)域（ＦＮＩＩ）、多個Ｃ型凝集素樣糖類識別區(qū)域、一個跨膜結構域以及較短逡逑的Ｃ端胞質結構域五個結構域組成，如圖１所示。其胞外的富含半胱氨酸的結構逡逑域具有凝集素活性，能夠與Ｓ０４－４－Ｎ－乙憸半乳糖胺、Ｓ０４－３－Ｎ－乙酰半乳糖胺和逡逑Ｓ０４－３－半乳糖結合；Ｃ型凝集素樣糖類識別區(qū)域能夠識別和結合甘露糖、巖藻糖逡逑和Ｎ－乙酰胺基葡萄糖為末端的糖類；胞漿內段的１４１０、１４１１、１４４１三個賴氨酸逡逑殘基位點是ＭＲ發(fā)生泛素化修飾的位點。ＭＲ主要通過對甘露糖蛋白的清除在機逡逑體免疫自穩(wěn)態(tài)以及抗腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用［１７＿１９］。逡逑２逡逑
【學位授予單位】：廈門大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R392

【相似文獻】

相關期刊論文 前8條

1 田軍;許熊飛;;CD103~-CD11b~(hi)DC通過CD70途徑交叉提呈流感病毒抗原[J];中國腫瘤生物治療雜志;2010年04期

2 任宏艷;張?zhí)煊?趙思敏;董慧霞;李衛(wèi)霞;周猛;王立新;;TLR2-MyD88通路在B細胞交叉提呈腫瘤來源自噬小體抗原過程中作用的初步研究[J];現代免疫學;2017年05期

3 ;《實用臨床醫(yī)藥雜志》2011年臨床綜合繼續(xù)醫(yī)學教育參考答案(1)[J];實用臨床醫(yī)藥雜志;2011年03期

4 劉軍民,張連生,李玉峰;樹突狀細胞對APL凋亡細胞溶解抗原交叉提呈誘導產生的抗白血病效應[J];第四軍醫(yī)大學學報;2005年14期

5 王立新;;自噬、衰老與腫瘤免疫[J];實用老年醫(yī)學;2010年03期

6 張明生,黃華梁;抗原提呈的研究進展[J];國外醫(yī)學(免疫學分冊);2000年04期

7 曲春楓;杜君;孫宗棠;;不同單核細胞亞群來源樹突狀細胞的特性及其在腫瘤免疫治療中的作用[J];中國腫瘤生物治療雜志;2009年03期

8 姚文榮;楊貴波;;C型凝集素9家族A成員的研究進展[J];細胞與分子免疫學雜志;2016年06期

相關會議論文 前4條

1 丁圓圓;劉乙齊;郭振紅;許熊飛;趙德志;李霞;曹雪濤;;Siglec-G負向調節(jié)樹突狀細胞抗原交叉提呈功能及其作用機制研究[A];第九屆全國免疫學學術大會論文集[C];2014年

2 錢程;白易;錢莉;馬鋒;侯晉;陳永堅;王青青;曹雪濤;;整合素CD11b抑制樹突狀細胞抗原交叉提呈的機制研究[A];第二屆中國免疫學會青年學者論壇論文集[C];2012年

3 ;樹突狀細胞對APL凋亡細胞溶解抗原交叉提呈誘導產生的抗白血病效應[A];2005年華東六省一市血液病學學術會議暨浙江省血液病學學術年會論文匯編[C];2005年

4 王雙;魏煒;馬光輝;;碳酸鈣納米球可高效遞送抗原并介導交叉提呈[A];2015年中國化工學會年會論文集[C];2015年

相關博士學位論文 前2條

1 丁圓圓;Siglec-G負向調節(jié)樹突狀細胞抗原交叉提呈功能及其作用機制研究[D];浙江大學;2014年

2 龔偉;呼吸道合胞病毒重組蛋白抗原免疫應答平衡調控研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2009年

相關碩士學位論文 前9條

1 盧囡囡;Cbl催化甘露糖受體K48多聚泛素化在尼古丁促進樹突狀細胞交叉提呈中的作用[D];廈門大學;2018年

2 徐丹丹;內體Akt/IKKα/IKKβ信號體介導Sec61內體轉位并促進樹突狀細胞交叉提呈[D];廈門大學;2018年

3 高淑慧;CCL17在DC交叉呈遞長表位肽活化CTL抗腫瘤中的作用[D];廣東藥科大學;2018年

4 胡純芳;K48泛素化甘露糖受體在尼古丁增強樹突狀細胞交叉提呈中的作用研究[D];廈門大學;2017年

5 白易;整合素CD11b抑制樹突狀細胞抗原交叉提呈的機制研究[D];第二軍醫(yī)大學;2011年

6 喬長濤;樹突狀細胞交叉提呈新城疫病毒抗原的初步研究[D];吉林農業(yè)大學;2014年

7 劉穎;不同疫苗佐劑對OVA誘生CTL免疫應答的影響[D];西北農林科技大學;2011年

8 王美菊;促進蛋白抗原誘生CD8~+ CTL反應的疫苗佐劑的研究[D];西北農林科技大學;2012年

9 朱清華;人Toll樣受體9基因克隆及真核重組載體的構建[D];吉林大學;2011年

本文編號：2631552