【摘要】：組蛋白去乙�；福℉istone Deacetylases，HDACs）是一種蛋白修飾酶，可以從乙酰化的底物的賴(lài)氨酸上移除乙�；c另外一個(gè)向底物賴(lài)氨酸上添加乙�；牡鞍准易�-組蛋白乙酰基轉(zhuǎn)移酶（Histone Acetyl-transferase，HAT）保持細(xì)胞內(nèi)功能蛋白和組蛋白的乙�；潭�，從而通過(guò)它們調(diào)節(jié)細(xì)胞的周期，增殖和分化。GATA-1轉(zhuǎn)錄因子，具有DNA的WGATAR識(shí)別結(jié)構(gòu)域，可以結(jié)合到DNA上，在血細(xì)胞的發(fā)育初期中發(fā)現(xiàn)GATA1的表達(dá)量逐漸升高并代替GATA2結(jié)合到靶基因上游的啟動(dòng)子和增強(qiáng)子區(qū)域的GATA結(jié)合位點(diǎn)上，通過(guò)與其招募的蛋白或復(fù)合物的活性不同，調(diào)節(jié)GATA1靶基因的表達(dá)，從而在血細(xì)胞發(fā)育的初期發(fā)揮重要作用。 GATA-1敲除的小鼠被證明在E10.5到E11.5天的時(shí)候死于貧血性白血病，進(jìn)一步證明GATA1在血液形成中的重要作用。FOG1（Friend of GATA1），作為GATA1正向調(diào)節(jié)的靶蛋白，其敲除的小鼠與GATA1敲除的小鼠表型相似。FOG1具有與GATA1直接結(jié)合的鋅指結(jié)構(gòu)，文獻(xiàn)報(bào)道包含HDAC1和HDAC2的NuRD復(fù)合物可以通過(guò)與FOG-1的直接作用而與GATA-1間接相互作用，但是目前還不清楚為什么作為轉(zhuǎn)錄抑制復(fù)合物的NuRD一直存在于無(wú)論是GATA1激活或是GATA1抑制的靶基因調(diào)控區(qū)域。本論文通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明HDAC1可以和GATA-1直接相互作用，而GATA-1與HDAC1的作用以及HDAC1的乙�；揎椩谘�(xì)胞的發(fā)育過(guò)程中，對(duì)GATA-1的靶基因的表達(dá)有重要的調(diào)控作用，即GATA-1與HDAC1的作用對(duì)GATA-1調(diào)節(jié)的靶基因有抑制作用，而這種抑制作用可以在HDAC1乙�；那闆r下轉(zhuǎn)變?yōu)榧せ钭饔谩１菊撐年U明了HDAC1作為一種普遍認(rèn)為是轉(zhuǎn)錄抑制因子的蛋白，在其被乙酰化后失去其去乙�；钚裕M(jìn)而可以轉(zhuǎn)變成轉(zhuǎn)錄激活因子，并在多個(gè)血細(xì)胞的分化模型上證明了這個(gè)理論。同時(shí)HDAC6作為一種可以同時(shí)存在于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中的去乙�；福湓谘�(xì)胞的終末發(fā)育成熟階段也起到了重要的調(diào)節(jié)作用，本論文研究發(fā)現(xiàn)HDAC6knock down的血細(xì)胞系MEL，在其終末發(fā)育的排出細(xì)胞核階段有一定缺陷，表現(xiàn)為細(xì)胞核不能完全排除，從而導(dǎo)致完全發(fā)育成熟的紅細(xì)胞數(shù)量明顯降低。
【圖文】：

5. Chromatin Immunoprecipitation 實(shí)驗(yàn)方法示意圖。ChIP 實(shí)驗(yàn)中，在我們?cè)谑占煌椒ㄌ幚淼募?xì)胞后，crosslink 處理穩(wěn)與 DNA 的結(jié)合，然后超聲破碎染色體成為 DNA 片段，使其大小0-500bp， 然后使用待檢測(cè)蛋白的抗體免疫沉淀那些已經(jīng)被 crosslink 固A 上轉(zhuǎn)錄因子及其調(diào)控因子，再 reverse crosslink 去除免疫沉淀中沉淀蛋白，只保留與相應(yīng)蛋白作用的 DNA 片段，，沉淀 DNA 片段并洗滌之后些免疫沉淀得到的 DNA 為模板，使用特定區(qū)域的引物進(jìn)行 PCR，依據(jù)特異性PCR 產(chǎn)物的多少來(lái)判斷此 PCR 涵蓋 DNA區(qū)域與多少免疫沉淀中特異性抗體對(duì)應(yīng)的蛋白相互作用。PCR 產(chǎn)物越多，說(shuō)明免疫沉淀里得A 模板越多，即有越多的特異性轉(zhuǎn)錄因子蛋白結(jié)合在此區(qū)域。

1HDACl及其突變體蛋白的結(jié)構(gòu)區(qū)域示意圖
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R3411

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本文編號(hào)：2628241