發(fā)布時間：2017-03-23 01:06

  本文關(guān)鍵詞：siRNA沉默Bmi-1基因表達(dá)對K562細(xì)胞自噬的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:自噬是一種溶酶體的降解途徑,它廣泛存在于真核生物細(xì)胞內(nèi)。一般情況下適度的自噬水平可以維持正常細(xì)胞的自我穩(wěn)態(tài),但是過高水平的自噬可引起細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的代謝紊亂而導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)發(fā)生自噬性死亡。Bmi-1(B-cell-specific Moloney murine leukemia virus insertion site 1)基因是多梳基因(Polycomb Group genes,PcG)家族的重要成員之一。目前研究發(fā)現(xiàn),Bmi-1基因可參與到干細(xì)胞的增殖、分化以及衰老等過程,在很多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起到了非常重要的作用。本實驗擬選取慢性髓細(xì)胞白血病K562細(xì)胞作為研究對象,來探討B(tài)mi-1基因是否參與K562細(xì)胞株的自噬情況以及其可能的分子機制。方法:1、本實驗選用慢性髓細(xì)胞白血病K562細(xì)胞作為研究對象。2、依照本實驗室前期已設(shè)計好的五種siRNA質(zhì)粒序列:pGenesil-2-HK(陰性對照質(zhì)粒),pGenesil-2-Bmi-11,pGenesil-2-Bmi-12,pGenesil-2-Bmi-13和pGenesil-2-Bmi-14序列經(jīng)小干擾siRNA方法分別轉(zhuǎn)染K562細(xì)胞,得到六種細(xì)胞:將未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞稱為K562-W,將轉(zhuǎn)染陰性對照質(zhì)粒細(xì)胞稱作K562-V,將轉(zhuǎn)染干擾質(zhì)粒的細(xì)胞依次稱為K562-S1,K562-S2,K562-S3,K562-S4。3、Western blot和RT-PCR實驗方法檢測不同的干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染K562細(xì)胞后Bmi-1蛋白和mRNA的表達(dá)情況。4、采用MTT實驗方法檢測不同的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染K562細(xì)胞后在不同作用時間下對K562細(xì)胞增殖的影響。5、采用透射電鏡掃描的方法檢測不同的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染K562細(xì)胞前后細(xì)胞自噬的發(fā)生情況。6、采用western blot實驗方法檢測不同的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染K562細(xì)胞前后細(xì)胞中各種蛋白質(zhì)包括:Beclin1、LC3、Akt、p-Akt、mTOR、PTEN的表達(dá)情況。結(jié)果:1、RT-PCR和western blot實驗結(jié)果顯示經(jīng)轉(zhuǎn)染后的K562-S1與K562-S3細(xì)胞明顯的抑制了Bmi-1的表達(dá),而K562-S2與K562-S4細(xì)胞抑制Bmi-1的表達(dá)效果不如K562-S1與K562-S3細(xì)胞明顯,所以我們選用K562-S1和K562-S3細(xì)胞以及K562-W和K562-V細(xì)胞進行后續(xù)實驗。2、MTT結(jié)果顯示經(jīng)不同質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后的K562-S1和K562-S3細(xì)胞與K562-W和K562-V細(xì)胞相比生長速度明顯受到抑制(P0.05),而K562-W和K562-V細(xì)胞之間無顯著性差異(P0.05)。3、透射電鏡掃描觀察細(xì)胞內(nèi)自噬情況顯示K562-S1和K562-S3細(xì)胞存在自噬小體,而K562-W和K562-V細(xì)胞未發(fā)現(xiàn)自噬小體。4、Western blot實驗結(jié)果顯示,當(dāng)小干擾siRNA沉默Bmi-1基因后,自噬特異性蛋白Beclin1和LC3-II的表達(dá)增加,而p-Akt和mTOR的表達(dá)下降,且PTEN蛋白的表達(dá)增加。若在K562細(xì)胞中加入3-MA培養(yǎng)2h后再進行轉(zhuǎn)染,則轉(zhuǎn)染后的K562-S1細(xì)胞中自噬特異性蛋白Beclin1和LC3-II的表達(dá)比未加3-MA轉(zhuǎn)染的細(xì)胞明顯下降,并且加3-MA后轉(zhuǎn)染的K562-V細(xì)胞Beclin1和LC3-II的表達(dá)與未加3-MA的K562-V細(xì)胞相比無變化。而在轉(zhuǎn)染干擾質(zhì)粒的同時加入mTOR抑制劑雷帕霉素(Rapamycin)后,mTOR的表達(dá)相對減少,且自噬特異性蛋白Beclin1和LC3-II的表達(dá)相對增加。并且加3-MA后轉(zhuǎn)染的K562-V細(xì)胞mTOR的表達(dá)也相對減少,且自噬特異性蛋白Beclin1和LC3-II的表達(dá)也相對增加。結(jié)論:沉默Bmi-1基因的表達(dá)后會導(dǎo)致K562細(xì)胞發(fā)生自噬,其機制可能是Bmi-1-siRNA通過調(diào)控PTEN/Akt/mTOR通路實現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：Bmi-1基因 siRNA 自噬 白血病
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R363
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-11
• 材料和方法11-20
• 結(jié)果20-24
• 討論24-28
• 結(jié)論28-29
• 參考文獻29-33
• 綜述33-43
• 參考文獻39-43
• 致謝43-44

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1 葉青;鄭民華;;自噬的分子機制與病理生理意義[J];國際病理科學(xué)與臨床雜志;2007年04期

2 何韜;王海杰;譚玉珍;;自噬在細(xì)胞存活和死亡中的作用[J];生理科學(xué)進展;2008年01期

3 張志才;邵增務(wù);;自噬分子機制的研究進展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展;2008年01期

4 趙勇;師長宏;伍靜;張海;;自噬的形態(tài)特征及分子調(diào)控機制[J];中國比較醫(yī)學(xué)雜志;2010年10期

5 王梅;李慶林;;自噬與癌癥的治療[J];安徽醫(yī)藥;2010年08期

6 伍靜;趙勇;師長宏;張海;;自噬的形態(tài)特征及分子調(diào)控[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展;2010年20期

7 王雄;譚璐;;自噬研究進展[J];亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥;2010年10期

8 卞龍艷;;運動與自噬的關(guān)系進展研究[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2011年07期

9 王偉;徐忠東;陶瑞松;;腫瘤發(fā)生過程中自噬與凋亡關(guān)系的研究[J];合肥師范學(xué)院學(xué)報;2011年06期

10 王光輝;;自噬與疾病[J];生物化學(xué)與生物物理進展;2012年03期

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1 韋雪;漆永梅;張迎梅;;鎘、活性氧自由基與自噬發(fā)生的分子機制[A];中國活性氧生物學(xué)效應(yīng)學(xué)術(shù)會議論文集（第一冊）[C];2011年

2 秦正紅;粱中琴;陶陸陽;黃強;劉春風(fēng);蔣星紅;倪宏;邢春根;;自噬在細(xì)胞生存與死亡中的作用[A];中國藥理學(xué)會第九次全國會員代表大會暨全國藥理學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

3 秦正紅;;自噬與腫瘤和神經(jīng)細(xì)胞生存——藥物作用的新靶位[A];全國生化與分子藥理學(xué)藥物靶點研討會論文摘要集[C];2008年

4 李芹;丁壯;;自噬功能研究進展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第八屆全國會員代表大會暨第十五次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2013年

5 胡晨;張璇;滕衍斌;胡海汐;周叢照;;家蠶中自噬相關(guān)蛋白Atg8的結(jié)構(gòu)研究[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會2009年學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2009年

6 陳希;李民;Xiao-Ming Yin;李林潔;;通過不同途徑誘導(dǎo)自噬的化合物對Atg9的依賴性不同[A];細(xì)胞—生命的基礎(chǔ)——中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會2013年全國學(xué)術(shù)大會·武漢論文摘要集[C];2013年

7 陳涓涓;敬靜;蔡元博;張俊龍;;針對活體細(xì)胞自噬行為的發(fā)光金屬配合物的設(shè)計[A];中國化學(xué)會第28屆學(xué)術(shù)年會第8分會場摘要集[C];2012年

8 寧曉潔;鐘自彪;王彥峰;付貞;葉啟發(fā);;缺血再灌注誘導(dǎo)小鼠肝細(xì)胞自噬[A];2013中國器官移植大會論文匯編[C];2013年

9 吳曉琦;李丹丹;鄧蓉;江山;楊芬;馮公侃;朱孝峰;;CaMKKβ磷酸化Beclin 1調(diào)控自噬及其在腫瘤治療中的作用[A];2011醫(yī)學(xué)科學(xué)前沿論壇第十二屆全國腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

10 周鴻雁;裴中;陳杰;申存周;錢浩;劉妍梅;冼文彪;鄭一帆;陳玲;;線粒體動力改變參與了LRRK2突變導(dǎo)致的自噬[A];中華醫(yī)學(xué)會第十三次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

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1 生命學(xué)院;俞立課題組在《科學(xué)》發(fā)文揭示自噬調(diào)控的重要機制[N];新清華;2012年

2 周飛 張粹蘭;花櫚木“自噬”可抗癌[N];廣東科技報;2011年

3 張明永;水稻自噬基因研究取得新進展[N];廣東科技報;2011年

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1 賈盛楠;轉(zhuǎn)錄因子p8調(diào)控自噬的功能研究[D];浙江大學(xué);2015年

2 皮會豐;DNM1L蛋白介導(dǎo)的線粒體自噬在鎘致肝臟毒性中的作用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 李倩;miRNAs介導(dǎo)的自噬抑制在類鼻疽桿菌感染免疫逃逸中的作用機制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

4 黎炳護;激活TRPV1誘導(dǎo)自噬在血管平滑肌細(xì)胞泡沫化中作用及機制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 陳江偉;自噬在椎間盤退變中的作用及機制研究[D];上海交通大學(xué);2014年

6 李榮榮;自噬在布比卡因肌毒性中的作用及機制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2015年

7 王維;NF-κB信號通路參與介導(dǎo)的自噬在高血壓大鼠心血管重構(gòu)的作用研究[D];山東大學(xué);2015年

8 劉春朋;日糧硒缺乏對雞肝臟蛋白質(zhì)組學(xué)及自噬變化的影響[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

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10 李少瑩;自噬在LPS誘導(dǎo)的肺泡上皮細(xì)胞死亡中的作用及機制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

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1 匡紅;Jnk2通過smARF的降解來調(diào)控壓力誘導(dǎo)的線粒體自噬及組織損傷[D];浙江理工大學(xué);2015年

2 洪永桃;自噬在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞中的作用及甲氨蝶呤對自噬的影響[D];川北醫(yī)學(xué)院;2015年

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9 包勇;Kap1在LBH589誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞MCF-7自噬形成中的作用[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

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  本文關(guān)鍵詞：siRNA沉默Bmi-1基因表達(dá)對K562細(xì)胞自噬的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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