【摘要】：背景:創(chuàng)傷性腦損傷(Traumatic brain injury,TBI)中,過度的炎癥反應是一種嚴重的繼發(fā)性腦損傷,同時具備有益的和致病的雙重作用。大量的數(shù)據(jù)表明,他汀類藥物除了具有降脂的作用,還具有廣泛的免疫調(diào)節(jié)和抗炎特性。在他汀類藥物中,阿托伐他汀作被證實在實驗性TBI模型中具有神經(jīng)保護作用;然而,關(guān)于其對TBI后急性期神經(jīng)炎癥的影響證據(jù)不足。目的:本研究目的是:評估阿托伐他汀對創(chuàng)傷性腦損傷急性期免疫調(diào)節(jié)反應的影響,探討其對TBI后外周血白細胞侵犯以及對小膠質(zhì)細胞/巨噬細胞極化的調(diào)節(jié)作用。方法:利用電子控制性腦皮質(zhì)撞擊儀(eCCI)建立C57BL/6小鼠TBI模型。TBI后1h開始,連續(xù)三天口服阿托伐他汀或生理鹽水。使用改良的神經(jīng)系統(tǒng)嚴重程度評分(mNSS)和轉(zhuǎn)棒實驗(Rota-rod)評估TBI小鼠短期神經(jīng)功能障礙程度。應用免疫組織化學和流式細胞術(shù)對入侵腦組織的白細胞亞群進行分析。應用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)的方法檢測促炎性和抗炎性細胞因子和趨化因子。通過定量實時PCR(qRT-PCR)和流式細胞術(shù)檢測M1型和M2型小膠質(zhì)細胞/巨噬細胞的轉(zhuǎn)化。通過末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導的dUTP缺口末端標記測定法(TUNEL)染色和神經(jīng)元細胞核(NeuN)的免疫熒光雙重染色標記和鑒定凋亡的神經(jīng)元。結(jié)果:阿托伐他汀以1mg/kg/day的劑量治療可顯著減少TBI小鼠神經(jīng)元凋亡并改善其行為缺陷。阿托伐他汀治療后,T細胞,中性粒細胞和自然殺傷(NK)細胞的入侵也顯著減少,促炎細胞因子(IFN-γ和IL-6)和趨化因子(RANTES和IP-10)的產(chǎn)生也減弱。值得注意的是,阿托伐他汀治療顯著增加了外周脾和腦中調(diào)節(jié)性T細胞(Tregs)的比例,同時增加了其主要效應細胞因子IL-10和TGF-β1的水平。我們還發(fā)現(xiàn)阿托伐他汀顯著減弱總小膠質(zhì)細胞/巨噬細胞的活化,但可通過抑制M1小膠質(zhì)細胞/巨噬細胞極化和增強M2小膠質(zhì)細胞/巨噬細胞極化而提高M2/M1比率。結(jié)論:我們的數(shù)據(jù)表明,阿托伐他汀治療可以有效地調(diào)節(jié)TBI后過度的神經(jīng)炎癥反應,其機制包括調(diào)節(jié)外周白細胞的入侵和調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細胞/巨噬細胞的極化狀態(tài)。
【圖文】：

圖 1：圖片來自（Yasir N. Jassam, Saef Izzy, Michael Whalen etal.Neuroimmunology of Traumatic BrainInjury: Time for a Paradigm Shift[J]. Neuron. 2017 Sep 13;95(6):1246-1265.）。1.1 對象和方法1.1.1 實驗動物6-8 周齡雄性 C57BL/6 小鼠（20-23g）購于北京市維通利華實驗動物技術(shù)有限公司。本研究的實驗方案經(jīng)天津醫(yī)科大學總醫(yī)院動物倫理委員會（中國天津）批準。 所有 C57BL/6 小鼠生活的動物室內(nèi)環(huán)境為：溫度控制在（20±2°C）；濕度控制在（55±5％）；保證動物房內(nèi)要有較亮的工作光線和較暗的生活光線調(diào)節(jié)（晝夜 12h）；保證小鼠自由的獲取食物和水；保障該環(huán)境設(shè)施符合動物居住的基本要求。小鼠適應新的環(huán)境一周左右的時間后，，再進行相關(guān)實驗，以排除環(huán)境變化對實驗數(shù)據(jù)的影響。1.1.2 實驗儀器和設(shè)備控制性皮層撞擊儀 （圖 1.1） 美 國 Custom Design &Fabrication 公司

天津醫(yī)科大學碩士學位論文 一、阿托伐他汀對創(chuàng)傷性腦損傷小鼠急性期免疫反應的影響TRIZOL 試劑 美國 Invitrogen 公司cDNA 合成試劑盒 美國 Invitrogen 公司4',6-二脒基-2-苯基吲哚（dapi） 美國 Invitrogen 公司
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R651.15;R-332

【共引文獻】

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本文編號：2608771