【摘要】：寨卡病毒(ZIKA virus,ZIKV)是有包膜的單股正鏈RNA病毒,屬黃病毒科黃病毒屬蚊媒病毒的一種。ZIKV感染易導(dǎo)致格林巴利綜合征和新生兒先天小頭畸形。由于缺乏理想的動(dòng)物感染模型,ZIKV感染的病毒學(xué)特征、感染誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答特征以及致病機(jī)制的研究還不夠深入。本研究觀察分析了亞洲流行株ZIKV/H/PF/2013在細(xì)胞系中的增殖特征。采用足墊接種病毒的方式進(jìn)一步觀察分析了該毒株在小鼠體內(nèi)的增殖及其誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答特征。一,在體外細(xì)胞系統(tǒng)進(jìn)行了病毒的擴(kuò)增并了解其增殖特征。利用C6/36細(xì)胞系擴(kuò)增病毒,其滴度可達(dá)5×10~7-10~8 PFU/ml。病毒生長(zhǎng)曲線顯示ZIKV在BHK-21和A549兩種細(xì)胞系中均于感染后的12小時(shí)至48小時(shí)呈直線型增殖,病毒產(chǎn)量在48小時(shí)達(dá)高峰,隨后呈緩慢下降趨勢(shì)。針對(duì)病毒基因組設(shè)計(jì)了4種特異性siRNA,并利用A549細(xì)胞系檢測(cè)其抗病毒活性。與對(duì)照組相比,4種siRNA均具有一定的抗病毒活性,其中3#siRNA的抗病毒活性最強(qiáng),在6.25 nM濃度下對(duì)病毒的抑制率達(dá)到60%。二,以野生型C57BL/6和AG6小鼠為研究對(duì)象,通過(guò)足墊接種病毒的方式檢測(cè)了動(dòng)物體重變化、存活率、組織嗜性、組織病理等指標(biāo),系統(tǒng)評(píng)價(jià)了病毒在感染局部和遠(yuǎn)端組織的增殖特征。結(jié)果顯示ZIKV不能在野生型小鼠建立系統(tǒng)感染,但可對(duì)AG6小鼠形成致死性感染;ZIKV具有廣泛的組織嗜性(能感染小鼠腦、心、肝、脾、肺、腎等多種器官和組織);病毒感染能夠引起顯著的組織病理變化。三,利用熒光流式細(xì)胞術(shù)分析了小鼠足墊(接種原位)、乆窩淋巴結(jié)(引流淋巴結(jié))、外周血和脾臟中各免疫細(xì)胞亞群病毒包膜蛋白(ZIKV-E)的表達(dá)以及在上述組織/器官中的組成和活化情況。結(jié)果表明:ZIKV感染的AG6小鼠體內(nèi)包括中性粒細(xì)胞在內(nèi)多種免疫細(xì)胞亞群呈ZIKV-E蛋白陽(yáng)性;ZIKV感染誘導(dǎo)了中性粒細(xì)胞的募集;ZIKV促進(jìn)外周血中DC以及外周血和脾臟中CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的活化而抑制引流淋巴結(jié)中DC的活化。綜上所述,本論文深入了解了ZIKV在小鼠體內(nèi)的增殖特征,首次發(fā)現(xiàn)包括中性粒細(xì)胞在內(nèi)的多種免疫細(xì)胞亞群呈ZIKV-E蛋白陽(yáng)性以及中性粒細(xì)胞的大量浸潤(rùn),該結(jié)果提示ZIKV存在體內(nèi)感染多種免疫細(xì)胞亞群的可能。本研究對(duì)進(jìn)一步了解ZIKV在體內(nèi)的傳播特征及致病機(jī)制具有重要參考價(jià)值。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)科學(xué)院大學(xué)(中國(guó)科學(xué)院武漢病毒研究所)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R373

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本文編號(hào)：2606061