本文關(guān)鍵詞：成纖維細胞生長因子9在肌萎縮側(cè)索硬化癥細胞模型中的保護作用及機制探討，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:肌萎縮側(cè)索硬化(Amyotrophic lateral sclerosis,ALS),是一種以選擇性侵害腦和脊髓運動神經(jīng)元為特征的慢性致死性神經(jīng)變性疾病,臨床表現(xiàn)為肌萎縮,肌強直,無力等,最終導(dǎo)致呼吸衰竭而死亡。雖然臨床病程長短各異,但多在診斷后的3-5年死亡。ALS的發(fā)病機制主要涉及氧化應(yīng)激、谷氨酸興奮毒性、蛋白質(zhì)異常聚積、線粒體功能異常、基因突變、神經(jīng)營養(yǎng)因子的缺乏以及細胞凋亡等。最近,在ALS和伴有泛素陽性包涵體的額顳葉癡呆病人[frontotemporal lobar dementia with ubiquitin-positive inclusions,(FTLD-U)]的腦中發(fā)現(xiàn)了含TDP-43的泛素化的包涵體,TDP-43在神經(jīng)變性疾病中受到越來越多的人的關(guān)注。TDP-43是由1號染色體上的TARDBP基因編碼的普遍存在的核蛋白,具有414個氨基酸,相對分子質(zhì)量為43000。它的作用包括:特異性前RNA的剪切、轉(zhuǎn)錄,信使RNA的穩(wěn)定性以及小RNA的生物發(fā)生等。至今,已發(fā)現(xiàn)40多種TDP-43的顯性突變基因存在于散發(fā)和遺傳性的ALS病人中,TDP-43的發(fā)現(xiàn)為我們研究ALS和FTLD-U的發(fā)病機制開拓了新的視野。TDP-25是病理性TDP-43異常泛素化產(chǎn)生的C-末端片段,混雜在胞漿的不可溶性聚集體中,并通過獲得性毒性損傷神經(jīng)元,誘導(dǎo)細胞死亡,在疾病病理過程中發(fā)揮著重要作用。成纖維細胞生長因子9(fibroblast growth factor 9,FGF9)是成纖維細胞生長因子家族中的一員,在機體各組織中廣泛分布,具有促細胞增殖、分化、生長和存活的作用,在個體胚胎發(fā)育和成年后的多種生物學(xué)過程中發(fā)揮重要作用。其在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中強大的促增殖和細胞保護作用受到越來越多的關(guān)注。大量研究表明FGF9具有促進多種神經(jīng)細胞生殖、存活,調(diào)節(jié)胞內(nèi)抗氧化損傷防御系統(tǒng)、降低氧化損傷時神經(jīng)元的死亡,上調(diào)乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶活性,營養(yǎng)細胞等多種作用。已有研究發(fā)現(xiàn)FGF9存在于運動神經(jīng)元中,并對運動神經(jīng)元有營養(yǎng)保護作用,但是在ALS疾病中的療效卻鮮有報道。本實驗以穩(wěn)定轉(zhuǎn)染TDP-25的NSC-34細胞系作為ALS細胞模型,研究FGF9對細胞的影響及可能涉及的機制,從而探討FGF9是否對TDP-25誘導(dǎo)的細胞毒性有保護作用。方法:本研究中使用穩(wěn)定轉(zhuǎn)染TDP-25的NSC-34細胞系作為ALS細胞模型。首先通過western免疫印跡技術(shù)檢測穩(wěn)定轉(zhuǎn)染TDP-25的NSC-34細胞內(nèi)TDP-25質(zhì)粒的表達情況;用不同濃度的FGF9處理該細胞24 h后,通過CCK-8試劑盒檢測其對細胞活力的影響,用LDH試劑盒檢測其對細胞損傷的作用;選用適合濃度干預(yù)細胞后,用western免疫印跡技術(shù)檢測抗氧化酶HO-1、GSS及凋亡蛋白caspase-3的水平。結(jié)果:1 TDP-25致病質(zhì)粒在穩(wěn)定轉(zhuǎn)染TDP-25的NSC-34細胞和正常NSC-34細胞中的表達情況在穩(wěn)定轉(zhuǎn)染TDP-25的NSC-34細胞中檢測到TDP-25質(zhì)粒的表達,其表達水平約為內(nèi)源性TDP-43表達水平的2倍(2.615±0.1796 VS 1.252±0.04943)。正常NSC-34細胞中檢測到內(nèi)源性TDP-43的表達水平與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染TDP-25的NSC-34細胞系中相近,沒有統(tǒng)計學(xué)差異(1.25±0.05 VS 1.16±0.14),但卻沒有檢測到TDP-25的表達。2 FGF9對穩(wěn)定轉(zhuǎn)染TDP-25的NSC-34細胞細胞活力的影響應(yīng)用不同濃度(0-200μM)的FGF9處理穩(wěn)定轉(zhuǎn)染TDP-25的NSC-34細胞24 h后,在0-1μΜ和10-200μΜ的FGF9對于細胞活力沒有明顯區(qū)別,在2-5μM之間的FGF9依據(jù)藥物濃度逐漸增大,細胞活力逐漸增加(114±2.54 VS 100±0.91,p0.05;122.3±2.79 VS 100±0.91,p㩳0.05)。3 FGF9對穩(wěn)定轉(zhuǎn)染TDP-25的NSC-34細胞損傷釋放LDH水平的影響應(yīng)用不同濃度(0-200μM)的FGF9處理穩(wěn)定轉(zhuǎn)染TDP-25的NSC-34細胞24 h后,在0-1μΜ和10-200μΜ的FGF9對于細胞向外釋放LDH水平?jīng)]有明顯區(qū)別,在2-5μM之間的FGF9依據(jù)藥物濃度逐漸增大,LDH水平逐漸降低(269.4±18.7 VS 357.2±8.59,p0.05;210.9±34.54 VS 357.2±8.59,p0.05)。4 FGF9對穩(wěn)定轉(zhuǎn)染TDP-25的NSC-34細胞內(nèi)HO-1和GSS蛋白水平的影響應(yīng)用不同濃度(2、5μM)的FGF9處理穩(wěn)定轉(zhuǎn)染TDP-25的NSC-34細胞24 h后,免疫蛋白印跡檢測結(jié)果表明,與未處理組相比,FGF9處理組細胞內(nèi)HO-1蛋白的表達水平明顯減低,且5μM FGF9處理組中細胞內(nèi)HO-1蛋白水平明顯低于2μM處理組(1.25±0.09 VS 1.95±0.45,p0.05;0.62±0.04 VS 1.95±0.45,p0.05);GSS蛋白水平在不同F(xiàn)GF9濃度作用下均明顯高于未處理組,但2μM FGF9處理組與5μM處理組細胞內(nèi)GSS蛋白水平未發(fā)現(xiàn)顯著差異(0.75±0.21 VS 0.41±0.14,p0.05;0.92±0.06VS 0.41±0.14,p0.05)。5 FGF9對穩(wěn)定轉(zhuǎn)染TDP-25的NSC-34細胞內(nèi)caspase-3和c-caspase-3蛋白的影響應(yīng)用不同濃度(2、5μM)的FGF9處理穩(wěn)定轉(zhuǎn)染TDP-25的NSC-34細胞24 h后,western檢測結(jié)果表明,與未處理組相比,FGF9處理組細胞內(nèi)caspase-3蛋白的表達水平明顯增加,但2μM FGF9處理組與5μM處理組細胞內(nèi)caspase-3蛋白水平未發(fā)現(xiàn)顯著差異(1.46±0.12 VS 1.17±0.02,P0.05;1.64±0.11 VS 1.17±0.02,P0.05);c-caspase-3蛋白水平在不同F(xiàn)GF9濃度作用下均明顯低于未處理組,但2μM FGF9處理組與5μM處理組細胞內(nèi)c-caspase-3蛋白水平未發(fā)現(xiàn)顯著差異(0.77±0.01 VS 0.91±0.06,p0.05;0.70±0.03 VS 0.91±0.06,p0.05)。結(jié)論:1低劑量的FGF9可以明顯增加穩(wěn)定轉(zhuǎn)染TDP-25的NSC-34細胞的細胞活力,促進細胞增殖。2低劑量的FGF9可以明顯降低穩(wěn)定轉(zhuǎn)染TDP-25的NSC-34細胞的細胞內(nèi)LDH水平,對細胞有保護作用。3低劑量的FGF9可能是通過降低細胞內(nèi)氧化應(yīng)激水平,抑制細胞凋亡來發(fā)揮對穩(wěn)定轉(zhuǎn)染TDP-25的NSC-34細胞的保護作用的。
【關(guān)鍵詞】：FGF9 ALS DP-25 氧化應(yīng)激 凋亡 HO-1 caspase-3
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R744.8;R-332
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫11-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-22
• 結(jié)果22-25
• 附圖25-29
• 附表29-32
• 討論32-34
• 結(jié)論34
• 參考文獻34-40
• 綜述 成纖維細胞生長因子9在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的研究進展40-50
• 參考文獻44-50
• 致謝50-51
• 個人簡歷51

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 陳曉怡;吳曉林;顧鳴敏;陸順元;王鑄鋼;;TFGF9轉(zhuǎn)基因小鼠的功能及組織表達譜的研究[J];診斷學(xué)理論與實踐;2009年05期

  本文關(guān)鍵詞：成纖維細胞生長因子9在肌萎縮側(cè)索硬化癥細胞模型中的保護作用及機制探討，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：259551