【摘要】：輪狀病毒(Rotavirus,RV)是引起五歲以下嬰幼兒腹瀉的主要病原之一,全球每年感染人數(shù)近1.1億,病死數(shù)約為50萬。至今,仍沒有治療輪狀病毒感染的有效藥物。疫苗接種是預(yù)防輪狀病毒感染的有效手段。探究輪狀病毒動物模型的構(gòu)建,不僅有助于評價輪狀病毒疫苗的保護性,也有助于研究輪狀病毒導(dǎo)致腹瀉的機制。本研究的目的旨在探究Balb/c乳鼠作為不同種屬型別的輪狀病毒動物模型的可靠性,在此基礎(chǔ)上,評價RV滅活疫苗在小鼠模型中的保護作用。方法使用具有致病性的人源輪狀病毒ZTR-68(G1[P8])株和實驗室參考強毒株SA11(G3[2])分別感染Balb/c乳鼠(4d)。實驗動物分為6組,ZTR-68與SA11各三個組,感染劑量為:ZTR-68高劑量組9X 106PFU/只,中劑量組6×106PFU/只及低劑量組3 ×106PFU/只;SA11高劑量組1×106PFU/只,中劑量組1×105PFU/只,低劑量組1×104PFU/只。經(jīng)灌胃途徑,依次感染。對照組灌胃同等劑量的PBS緩沖液。攻毒感染后1～7天對乳鼠進行各項指標(biāo)的觀察、收集、檢測,以綜合分析法評價動物模型的科學(xué)性和可靠性。在此基礎(chǔ)上,使用ZTR-68毒株制備的滅活疫苗免疫動物后,觀察檢測評價疫苗的保護性效果。疫苗免疫動物分為160EU(酶標(biāo)單位)、320EU和640EU三個劑量,經(jīng)腹腔免疫2針,間隔2周。免疫后的成年鼠進行交配,待分娩后分別檢測母鼠與乳鼠體內(nèi)抗RV特異性抗體。對乳鼠用ZTR-68和SA11毒株攻毒進行保護性試驗評價。結(jié)果:ZTR-68及SA11高、中劑量組均可以導(dǎo)致乳鼠發(fā)生明顯腹瀉及排 的毒,乳鼠攻毒24h后腸道即可見明顯病變,于攻毒48h和72h后,乳鼠腹瀉持續(xù)加重,腸道病變進一步加重。免疫疫苗組乳鼠,經(jīng)灌胃攻毒后,腹瀉發(fā)生延遲、腹瀉程度降低,乳鼠糞便排毒量減少,腸道病變明顯減輕。結(jié)論人源性RV ZTR-68毒株及猴源RV SA11株均可以用于Balb/c乳鼠動物模型的構(gòu)建。ZTR-68株制備的滅活疫苗免疫母鼠后產(chǎn)生的抗體可良好的傳遞給子代乳鼠,傳遞于乳鼠的抗體不僅能夠保護疫苗親本株的攻擊,也能保護SA11毒株的攻擊,提示RV滅活疫苗誘導(dǎo)的抗體具有交叉保護作用。
【圖文】：

邐中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院／北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院碩士研宄生學(xué)位論文邐逡逑引言逡逑人輪狀病毒（Ｈｕｍａｎ邋Ｒｏｔａｖｉｒｕｓ，邋ＨＲＶ）自上世紀(jì)７０年代發(fā)現(xiàn)以來，至今仍是逡逑造成嬰幼兒腹瀉最主要的病原體之一［１］。每年全球感染輪狀病毒的人數(shù)約為１．邋１億，逡逑其中近２００萬患者需要住院治療，病死人數(shù)約６０萬，還包括２４００萬門診病例［２］。逡逑發(fā)病及病死主要發(fā)生在低收入、經(jīng)濟欠發(fā)達(dá)、衛(wèi)生條件欠好的國家，但感染率在發(fā)逡逑達(dá)國家與發(fā)展中國家沒有明顯差異［３］。輪狀病毒屬于呼腸孤病毒科，是一種雙鏈ＲＮＡ逡逑病毒，病毒顆粒直徑大約為７0？ｉ，呈二十面體結(jié)構(gòu)，由３層衣殼蛋白構(gòu)成［４］。輪狀逡逑病毒分為８種，以英文字母編號為Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ與Ｈ，其中Ａ種最為常見，逡逑占感染輪狀病毒腹瀉病例的９０％以上［５］。ＲＶ基因組由１１節(jié)段的雙鏈ＲＮＡ組成，編碼逡逑６個結(jié)構(gòu)蛋白（ＶＰＫ邋ＶＰ２、ＶＰ３、ＶＰ４、ＶＰ６和ＶＰ７）和６個非結(jié)構(gòu)蛋白（ＮＳＰ１、ＮＳＰ２、逡逑ＮＳＰ３、ＮＳＰ４、ＮＳＰ５邋和邋ＮＳＰ６）（圖邋１）邋［６］。逡逑Ｖｉｒｉｏｎ邐Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ邋ｐｒｏｔｅｉｒｔｓ邐Ｇｅｎｏｍｅ邋Ｎｏｎｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ逡逑

圖２．邋ＮＳＰ４引起腹瀉作用機理圖示［１６］．逡逑病毒感染造成的疾病流行和診治造成的經(jīng)濟壓力己成為世界大生問題［１７］。由于目前沒有針對輪狀病毒感染的特效藥物，接種疫感染的有效手段Ｍ。早在２００９年，世界衛(wèi)生組織就倡議全球所疫苗納入國家免疫規(guī)劃中，以減少每年輪狀病毒的感染及病死數(shù)［１用的輪狀病毒疫苗均為口服減毒活疫苗（表１），包括Ｒｏｔａｒｉｘ？邋（Ｇｅｄ？邋（Ｇ１邋？Ｇ４，邋Ｐ［８］型）［２°］。自邋２００６邋年以來，兩種活減毒邋ＲＶ邋疫苗（Ｒｏｔａ
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R392

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