本文關鍵詞：改良的帶血管髂骨移植動物模型建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：移植是治療終末期器官衰竭和局部組織嚴重損傷的理想方法。然而術后宿主的排斥反應卻不可避免。隨著環(huán)孢素A等跨時代的免疫抑制劑的出現(xiàn),移植迎來嶄新的機遇。但是,由免疫抑制劑帶來的副作用仍嚴重影響患者的生存質(zhì)量。因此,如何減少或撤除免疫抑制劑是現(xiàn)階段的重要目標。目前臨床上主要嘗試應用骨髓移植(bone marrow transplantation,BMT)進行免疫耐受的誘導。而從復合組織同種異體移植(composite tissue allotransplantation,CTA)中衍生出來進行帶血管骨髓移植(vascularized bone marrow transplantation,VBMT),則是一種獨特的骨髓移植方式,其中的骨髓細胞、骨和骨髓基質(zhì)微環(huán)境一同被移植到了宿主中。相比于單純的骨髓細胞輸注,它可以持續(xù)產(chǎn)生供者骨髓細胞,此外,VBMT可避免清髓處理,少有發(fā)生移植物抗宿主病(graft versus host disease,GVHD)。目前的研究表明,VBMT具有建立嵌合現(xiàn)象,并誘導免疫耐受的潛能。而絕大多數(shù)VBMT的動物模型主要以股骨為主,但從臨床轉(zhuǎn)化的角度考慮,髂骨作為帶血管骨髓移植,更有可能應用到臨床上,因此改良并建立一種更可行的帶血管髂骨移植的動物模型,具有更明顯的使用價值。目的:(1)探索一種相對簡單、穩(wěn)定的大鼠帶血管髂骨移植手術方式,為其建立嵌合現(xiàn)象、誘導免疫耐受的研究建立可靠的動物模型。(2)檢測帶血管髂骨移植術后是否能建立嵌合現(xiàn)象,移植區(qū)進行Micro-CT掃描和三維重建,判斷移植髂骨骨密度變化。(3)動態(tài)監(jiān)測外周血CD4+/CD8+T細胞的比值變化和血清白細胞介素-2(interleukin-2,IL-2)水平變化,和正常大鼠比較,判斷產(chǎn)生嵌合狀態(tài)的大鼠術后免疫狀態(tài)。方法:(1)雄性Sprague Dawley(SD)大鼠為供者,雌性SD大鼠為受者,進行改良手術,即剝離供者臀大肌,將供者的髂骨連帶肌肉及皮瓣移植至受者的腹股溝區(qū),將供者的髂總動脈和髂腰靜脈分別與受者的股動靜脈吻合。實驗分三組:正常大鼠組;改良手術組;舊術式組,即不剝離肌肉,將供者的腹主動脈與受者股動脈吻合。術后給予環(huán)孢素A。(2)雄性SD大鼠為供者,雌性SD大鼠為受者,進行改良手術,術后給予環(huán)孢素A。實驗分三組:陽性組,即雄性大鼠組;陰性組,即雌性大鼠組;實驗組,即進行改良手術。術后第28天取血,提取血液RNA,反轉(zhuǎn)為cDNA,應用聚合酶連反應(polymerase chain reaction,PCR)檢測雄性大鼠SRY基因。進行移植區(qū)域Micro-CT掃描并三維重建;(3)應用流式細胞儀,動態(tài)監(jiān)測大鼠術后CD4+/CD8+T細胞的比值變化;通過酶聯(lián)免疫吸附實驗(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)動態(tài)監(jiān)測血清IL-2水平變化。結(jié)果:(1)成功建立一種可行的改良的帶血管髂骨移植手術,動脈吻合時間24.7±2.3 min,靜脈吻合時間33.0±1.6 min,缺血時間102.7.±3.5 min。(2)應用PCR技術,成功在接受雄性大鼠髂骨移植的雌性大鼠外周血中,檢測出SRY基因;Micro-CT掃描后三維重建結(jié)果顯示,移植髂骨骨密度降低。(3)動態(tài)監(jiān)測外周血CD4+/CD8+T細胞的比值,和血清IL-2水平,發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生嵌合狀態(tài)的大鼠與正常大鼠相比,并無明顯差異。結(jié)論:(1)通過剝離供者臀大肌,改變動脈吻合對象,可以建立相對簡單、穩(wěn)定的帶血管髂骨移植動物模型。(2)大鼠移植髂骨骨密度降低。(3)通過免疫抑制劑的干預,使得術后大鼠免疫狀態(tài)良好,并在無排斥反應發(fā)生的基礎上,通過改良的帶血管髂骨移植手術,建立了嵌合現(xiàn)象。
【關鍵詞】：帶血管髂骨移植 嵌合 動物模型
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R-332;R617
【目錄】：

• 縮略語表6-8
• 中文摘要8-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-14
• 文獻回顧14-26
• 第一部分 帶血管髂骨移植動物模型建立26-40
• 1.材料26-28
• 1.1 實驗動物及飼養(yǎng)條件26
• 1.2 實驗試劑和藥品26
• 1.3 實驗材料和設備26-27
• 1.4 液體配制27-28
• 2.實驗方法28-35
• 2.1 實驗分組28
• 2.2 帶血管髂骨移植模型建立28-34
• 2.3 術后處理34
• 2.4 術后臨床監(jiān)測34-35
• 2.5 術后病理學檢測35
• 2.6 統(tǒng)計學分析35
• 3.結(jié)果35-37
• 3.1 手術一般情況35-36
• 3.2 移植髂骨病理學檢測36-37
• 4.討論37-40
• 第二部分 術后嵌合現(xiàn)象檢測及移植髂骨影像檢測40-51
• 1.材料40-42
• 1.1 實驗動物及飼養(yǎng)40
• 1.2 實驗材料40
• 1.3 實驗設備和儀器40-41
• 1.4 實驗試劑和藥品41
• 1.5 液體配制41-42
• 2.實驗方法42-45
• 2.1 實驗分組42
• 2.2 手術步驟和術后用藥42-43
• 2.3 術后臨床監(jiān)測43
• 2.4 大鼠外周血嵌合狀態(tài)檢測43-45
• 2.5 產(chǎn)生嵌合現(xiàn)象大鼠移植部位Micro-CT掃描45
• 2.6 病理學檢測45
• 3.結(jié)果45-48
• 3.1 術后一般情況45-46
• 3.2 PCR檢測結(jié)果46-47
• 3.3 產(chǎn)生嵌合現(xiàn)象大鼠移植部位Micro-CT掃描結(jié)果47
• 3.4 移植髂骨病理檢測結(jié)果47-48
• 4.討論48-51
• 第三部分 術后CD4~+/CD8~+T細胞比值和IL-2 水平變化51-59
• 1.材料51-52
• 1.1 實驗動物及飼養(yǎng)條件51
• 1.2 實驗材料51
• 1.3 實驗設備和儀器51
• 1.4 實驗試劑和藥品51-52
• 2.實驗方法52-54
• 2.1 實驗分組52
• 2.2 手術步驟和術后用藥52
• 2.3 大鼠外周血CD4~+/CD8~+T細胞比值監(jiān)測52-53
• 2.4 ELISA檢測IL-2 水平53-54
• 2.5 統(tǒng)計學分析54
• 3.結(jié)果54-57
• 3.1 大鼠外周血CD4~+/CD8~+T細胞比值監(jiān)測54-56
• 3.2 血清IL-2 監(jiān)測變化56-57
• 4.討論57-59
• 小結(jié)59-60
• 參考文獻60-68
• 個人簡歷和研究成果68-69
• 致謝69

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本文編號：258970