【摘要】：目的 根據(jù)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)分化位點(diǎn)特異性,應(yīng)用小鼠骨膜提取物來誘導(dǎo)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化,觀察其誘導(dǎo)分化的情況。 方法 將小鼠顱骨骨膜提取物與小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外共培養(yǎng),誘導(dǎo)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向類成骨細(xì)胞分化。實(shí)驗(yàn)分為對照組(單純BMSCs)和實(shí)驗(yàn)組(骨膜提取物誘導(dǎo)分化的細(xì)胞),應(yīng)用倒置顯微鏡觀察誘導(dǎo)后細(xì)胞形態(tài)的變化;應(yīng)用堿性磷酸酶(ALP)染色法檢測誘導(dǎo)分化后細(xì)胞的成骨活性;應(yīng)用免疫印跡技術(shù)檢測BMP-2蛋白的表達(dá)情況;應(yīng)用RT-PCR方法檢測BMP-2、Ⅰ型膠原、骨鈣素基因的表達(dá)情況。 結(jié)果 形態(tài)學(xué)觀察顯示,BMSC細(xì)胞呈梭形,骨膜誘導(dǎo)分化后變成三角形、多角形、立方形;ALP活性結(jié)果顯示,誘導(dǎo)分化后ALP活性遠(yuǎn)高于BMSC細(xì)胞,約為其六倍,兩者差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);蛋白印跡結(jié)果顯示,BMSC細(xì)胞組不表達(dá)BMP-2蛋白,經(jīng)骨膜提取物誘導(dǎo)分化后BMP-2蛋白表達(dá)增高,兩組差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);RT-PCR結(jié)果表明,小鼠BMSC細(xì)胞不表達(dá)BMP-2、Ⅰ型膠原、骨鈣素基因。經(jīng)骨膜提取物誘導(dǎo)分化后可以檢測到BMP-2(708bp)、Ⅰ型膠原(222bp)、骨鈣素(219bp)基因的表達(dá)。β-actin為內(nèi)參。 結(jié)論 骨膜提取物可以誘導(dǎo)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為類成骨細(xì)胞,分化的細(xì)胞具有成骨細(xì)胞的特性,此方法簡單易行,并且分化效果很好,為骨組織工程提供一種新的類成骨細(xì)胞培養(yǎng)方法。
【圖文】：

膠電泳觀察 PCR 產(chǎn)物后，短波紫外燈下觀察擴(kuò)增產(chǎn)物照相。學(xué)分析均用 SPSS16.0 軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料示，兩組間比較采用 t 檢驗(yàn)，，以 P<0.05 為差異有統(tǒng)結(jié) 果觀察鏡觀察，原代小鼠 BMSC 細(xì)胞約 10-14d 長滿培養(yǎng) 3d 后開始增殖，形態(tài)多呈長梭形（圖 1A）；而經(jīng)過胞形態(tài)發(fā)生明顯的改變，呈三角形、多角形和立方AGCAAGAGATGG ATCTCCTTCTGCATCCTGTCG

1 B 倒置顯微鏡下經(jīng)骨膜提取物誘導(dǎo)后的細(xì)胞(×1提取物誘導(dǎo)的細(xì)胞貼壁生長，形態(tài)發(fā)生明顯變化，多呈三性檢查質(zhì)干細(xì)胞的 ALP 活性很低，OD405/OD550 值為 0導(dǎo)后 ALP 活性顯著升高，OD405/OD550 值為 0.60.01）。結(jié)果見表 2，圖 2。堿性磷酸酶（ALP）染色檢測兩組細(xì)胞 OD405/550別 ALP t 值 組 0.11±0.01 組 0.62±0.0518.936
【學(xué)位授予單位】：遼寧醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2587497