【摘要】：目的 觀察在溶血性磷脂酰膽堿(Lysophosphatidylcholine,LPC)誘導下,二苯乙烯苷(2,3,5,4′-Tetrahydroxysilbene-2 -O-β-D-glucopyranoside TSG)對血管內(nèi)皮細胞(Vein Endothelial Cell,VEC)損傷的保護作用,并對其作用機制進行的研究。 方法 培養(yǎng)人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cell,HUVEC)株,經(jīng)傳代,于第3-4代用于實驗。隨機將細胞分為:空白對照;模型組;實驗組。首先將LPC以10ug/ml作用于HUVEC,并與細胞一起孵育24小時誘導內(nèi)皮細胞損傷,建立細胞損傷的模型;將TSG以10.0; 1.0; 0.1μmol/l預先作用于HUVEC 1小時后,再給予10μg/ml的LPC作用于HUVEC共同孵育24小時,建立實驗組;同時,設立不加藥物的空白對照組。然后,收集細胞上清液測定其丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)和非對稱性二甲基精氨酸(ADMA)含量;收集細胞,測定其中的活性氧(ROS)水平、細胞的凋亡率和存活率。用硝酸還原酶法檢測細胞上清液中的NO的濃度;用硫代巴比妥法檢測細胞上清液中MDA的含量;生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測細胞上清液中ADMA含量;熒光顯微鏡觀察細胞內(nèi)ROS水平、Annexin V-FITC/PI熒光雙染色法流式細胞儀測定其細胞的凋亡率、MTT法檢測細胞的存活率。 結果 1.與空白對照組比較結果顯示,用LPC(10μg/ml)作用于HUVEC24小時后,觀測到細胞培養(yǎng)上清液中MDA含量(P0.05),ADMA含量(P0.05)及細胞內(nèi)ROS水平(P0.05)都顯著性增加,而細胞培養(yǎng)上清液中NO含量明顯降低(P0.05),細胞的凋亡有所增加(P0.05),致使細胞的存活率降低(P0.05)。 2.與LPC損傷組比較中,可以看到,以10.0, 1.0, 0.1 umol/1濃度的TSG作用HUVEC 1小時后,再予以終濃度為10μg/ml的LPC作用HUVEC一起孵育24小時后,顯示:其均能使細胞培養(yǎng)上清液中MDA含量(P0.05)、ADMA含量(P0.05)及細胞內(nèi)ROS水平(P0.05)顯著性降低,而細胞上清液中的NO含量顯著性升高(P0.05),出現(xiàn)了細胞的凋亡率降低(P0.05)和細胞的存活率(P0.05)顯著性升高的現(xiàn)象。 結論 1.二苯乙烯苷能夠抑制血管內(nèi)皮細胞的凋亡,而對LPC誘導的血管內(nèi)皮細胞損傷有保護作用。 2.二苯乙烯苷對LPC誘導血管內(nèi)皮細胞損傷的保護作用與其抗氧化、升高NO濃度、降低ADMA水平有關。
【學位授予單位】：泰山醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R363

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