【摘要】：目的 探討早產(chǎn)SD大鼠臍帶沃頓膠質(zhì)組織分離大鼠臍帶間質(zhì)干細(xì)胞的可能性,研究其生物學(xué)特征及體外誘導(dǎo)分化潛能,為下一步進(jìn)行同種異體移植進(jìn)行細(xì)胞生物療法奠定基礎(chǔ)。 方法 通過將SD大鼠按雄:雌=1:2人工合籠獲得孕19天大鼠,在無菌環(huán)境下通過剖宮產(chǎn)獲得新生大鼠,機(jī)械分離大鼠臍帶組織剔除血管組織獲得沃頓膠質(zhì)組織,采用組織塊直接貼壁法在含10%FBS的DMEM/F12培養(yǎng)基中培養(yǎng)臍帶組織獲得大鼠臍帶沃頓膠質(zhì)細(xì)胞,并進(jìn)行傳代、凍存和復(fù)蘇;對(duì)培養(yǎng)所得大鼠臍帶沃頓膠質(zhì)細(xì)胞采用直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行生長曲線繪制;通過細(xì)胞免疫組化檢測(cè)大鼠臍帶間質(zhì)干細(xì)胞(rUCMSCs)中Brdu陽性表達(dá);取3代rUCMSCs分別添加成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基和成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)分化潛能鑒定;取3代rUCMSCs采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞周期、細(xì)胞表面標(biāo)記鑒定。 結(jié)果 大鼠臍帶沃頓膠質(zhì)組織可在體外培養(yǎng)出梭形成纖維樣貼壁生長細(xì)胞;大鼠臍帶沃頓膠質(zhì)細(xì)胞可在體外快速增殖;Brdu可在48小時(shí)內(nèi)高效摻入大鼠臍帶沃頓膠質(zhì)細(xì)胞呈陽性表達(dá);大鼠臍帶沃頓膠質(zhì)細(xì)胞可在體外誘導(dǎo)體系中向成脂、成骨分化;大鼠臍帶沃頓膠質(zhì)細(xì)胞92.14%處于G0-G1期,陽性表達(dá)間質(zhì)干細(xì)胞表面抗原CD29、CD44和CD90,而不表達(dá)造血干細(xì)胞標(biāo)記CD34和CD45。 結(jié)論 SD大鼠臍帶沃頓組織中可培養(yǎng)出大鼠臍帶沃頓膠質(zhì)細(xì)胞,該細(xì)胞在形態(tài)學(xué)、生長增殖特點(diǎn)、誘導(dǎo)分化潛能和細(xì)胞表面抗原表達(dá)方面具有間質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)特征,符合臍帶間質(zhì)干細(xì)胞的鑒定標(biāo)準(zhǔn),是一類多能干細(xì)胞,有望用于細(xì)胞生物治療、組織工程等研究。
【圖文】：

織塊周圍出現(xiàn)少量細(xì)胞生長，部分呈長梭形貼壁生長，部分細(xì)胞成多角形貼壁生長，隨時(shí)間增加細(xì)胞逐漸增多、密集而漸漸呈放射狀排列，至第 4 天時(shí)可見細(xì)胞排列密集(圖 1)，在高倍鏡下可見細(xì)胞以梭形為主，部分成多角形(圖 2)。而至第 6 天時(shí)可見組織塊周圍細(xì)胞成漩渦狀緊密排列，部分細(xì)胞融合，在遠(yuǎn)離組織塊周圍的細(xì)胞排列相對(duì)稀疏，部分可見成多角形、星形或三角形，且大小不一(圖3)。經(jīng)胰酶消化后的 rUCMSCs 呈圓形,胞體較大,胞質(zhì)透明，首次傳代后 24 h 內(nèi)完全貼壁伸展,至第 3 天時(shí)即可見細(xì)胞緊貼于培養(yǎng)瓶壁，部分呈成梭形纖維樣生長，且逐漸形成漩渦狀排列(圖 4)。第 2 代細(xì)胞在傳代 24 小時(shí)后即開始快速生長(圖 5)。細(xì)胞傳至第 3、4 代時(shí)，穩(wěn)定快速生長，細(xì)胞形態(tài)、大小與原代細(xì)胞無明顯變化(圖 6，圖 7)。

織塊周圍出現(xiàn)少量細(xì)胞生長，部分呈長梭形貼壁生長，部分細(xì)胞成多角形貼壁生長，隨時(shí)間增加細(xì)胞逐漸增多、密集而漸漸呈放射狀排列，至第 4 天時(shí)可見細(xì)胞排列密集(圖 1)，在高倍鏡下可見細(xì)胞以梭形為主，部分成多角形(圖 2)。而至第 6 天時(shí)可見組織塊周圍細(xì)胞成漩渦狀緊密排列，部分細(xì)胞融合，在遠(yuǎn)離組織塊周圍的細(xì)胞排列相對(duì)稀疏，部分可見成多角形、星形或三角形，且大小不一(圖3)。經(jīng)胰酶消化后的 rUCMSCs 呈圓形,胞體較大,胞質(zhì)透明，首次傳代后 24 h 內(nèi)完全貼壁伸展,至第 3 天時(shí)即可見細(xì)胞緊貼于培養(yǎng)瓶壁，，部分呈成梭形纖維樣生長，且逐漸形成漩渦狀排列(圖 4)。第 2 代細(xì)胞在傳代 24 小時(shí)后即開始快速生長(圖 5)。細(xì)胞傳至第 3、4 代時(shí)，穩(wěn)定快速生長，細(xì)胞形態(tài)、大小與原代細(xì)胞無明顯變化(圖 6，圖 7)。
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R329

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