【摘要】：類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種常見(jiàn)的以全身多關(guān)節(jié)慢性滑膜炎癥為主要表現(xiàn)的自身免疫性疾病，常伴有關(guān)節(jié)軟骨損傷和骨破壞，致殘率高。為深入研究RA的發(fā)病機(jī)制及開(kāi)發(fā)治療藥物，自身免疫性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型是必不可少的工具。佐劑誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎（adjuvant induced arthritis，AIA）是目前常用的關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型，其發(fā)病機(jī)制與病理改變類似于人類RA。 弗氏完全佐劑（complete Freund’s adjuvant，CFA）常用于AIA模型的誘導(dǎo)，其中卡介苗（Bacille Calmette Guerin，BCG）來(lái)源的結(jié)核分枝桿菌熱休克蛋白65（heat-shock protein65，HSP65）可通過(guò)分子模擬參與人類RA和AIA的發(fā)病過(guò)程。基于此，本研究采用BCG HSP65代替CFA中的BCG成分，與IFA乳化混合，配制HSP65-IFA乳化液，用于誘導(dǎo)大鼠關(guān)節(jié)炎的研究。我們發(fā)現(xiàn)，HSP65-IFA可誘導(dǎo)大鼠產(chǎn)生類似于CFA誘導(dǎo)的AIA病變，表現(xiàn)出足爪腫脹、踝關(guān)節(jié)滑膜增生、血管翳形成和軟骨侵蝕。此模型優(yōu)于AIA之處在于有抗雙鏈DNA抗體的產(chǎn)生，說(shuō)明HSP65-IFA誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎是一種自身免疫性疾病。我們進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，HSP65的劑量對(duì)HSP65-IFA誘導(dǎo)的大鼠關(guān)節(jié)炎有顯著影響，劑量太高或太低均不利于其誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎發(fā)生。 鑒于我們所使用的HSP65蛋白是由大腸桿菌系統(tǒng)表達(dá)的重組蛋白，其中含有6×his-tag標(biāo)簽，還可能含有殘余的大腸桿菌LPS，為排除這兩個(gè)因素在HSP65-IFA誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎中的作用，我們選擇同樣為大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)所表達(dá)且?guī)в?×his-tag標(biāo)簽的蛋白VP1，和非大腸桿菌系統(tǒng)表達(dá)、不帶有6×his-tag標(biāo)簽的卵白蛋白（ovalbumin，OVA）作為無(wú)關(guān)蛋白參照，分別與IFA乳化混和后觀察其是否能誘導(dǎo)大鼠關(guān)節(jié)炎的發(fā)生。我們發(fā)現(xiàn)，，VP1和OVA并不能像HSP65那樣有效地誘導(dǎo)大鼠發(fā)生自身免疫性關(guān)節(jié)炎，因此HSP65-IFA對(duì)大鼠關(guān)節(jié)炎的誘導(dǎo)作用與HSP65蛋白的性質(zhì)有關(guān)，而與其殘留的LPS和6×his-tag標(biāo)簽無(wú)關(guān)。 隨后，我們將抑制性O(shè)DN SAT05f應(yīng)用于治療HSP65-IFA或CFA誘導(dǎo)的大鼠關(guān)節(jié)炎，發(fā)現(xiàn)SAT05f能減輕HSP65-IFA誘導(dǎo)的大鼠足腫脹、踝關(guān)節(jié)病理改變和抗dsDNA抗體的產(chǎn)生，而對(duì)CFA誘導(dǎo)的大鼠關(guān)節(jié)炎沒(méi)有治療作用。 綜上所述，HSP65-IFA可用于誘導(dǎo)大鼠自身免疫性關(guān)節(jié)炎模型，SAT05f具有治療RA的潛在應(yīng)用價(jià)值。
【圖文】：

SP65-IFA 誘導(dǎo)大鼠自身免疫性關(guān)節(jié)炎模型大鼠性別選擇CFA 可誘導(dǎo)經(jīng)典的佐劑性關(guān)節(jié)炎模型，但不同性別的 Wistar 大鼠對(duì)其節(jié)炎反應(yīng)不同。因此，為了得到發(fā)病率穩(wěn)定且病變程度一致的關(guān)節(jié)炎分別觀察了 CFA 對(duì)雌性和雄性大鼠關(guān)節(jié)炎的誘導(dǎo)作用。首先選取體50 g 的雌性和雄性 Wistar 大鼠各兩只，將其左后足足底用 75%乙醇掌皮內(nèi)注射 CFA 100 μl/只，注射后按壓數(shù)十秒防止 CFA 逆流溢出。造密切觀察模型鼠后足及踝關(guān)節(jié)紅腫情況和行走姿態(tài)。我們發(fā)現(xiàn)雄性大鼠鼠注射側(cè)足爪紅腫更為明顯（Fig. 1），步態(tài)蹣跚，行走時(shí)注射側(cè)后足不地。結(jié)果說(shuō)明，雄性 Wistar 大鼠對(duì) CFA 誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎更易感，因此后用雄性大鼠建立佐劑性關(guān)節(jié)炎模型。

圖 2. HSP65-IFA 引起大鼠足爪腫脹Fig 2. HSP65-IFA induced paw swelling in rats.Male Wistar rats were injected with HSP65-IFA, CFA, IFA, HSP65 (5μg/rat)and saline, respectively. (A) Representative gross appearance. The paws of rat injectedwith saline (left) and HSP65-IFA (right) were photographed on day 1, showing thesevere swelling on the injected side of ankle joint in HSP65-IFA treat rat. (B) Pawvolumes of arthritic rats. After induction, the paw volumes of the rats were measuredevery other day. Injected side: left; un-injected: right. Data are given as the mean ofeach group (n=4). *P<0.01 and **P<0.001 vs. saline, #P=0.029 vs. CFA.1.2.2 HSP65-IFA 誘導(dǎo)大鼠踝關(guān)節(jié)病理改變?cè)谟^察到 HSP65-IFA 能誘導(dǎo)大鼠足爪腫脹之后，為了檢測(cè)其能否誘導(dǎo)大鼠踝關(guān)節(jié)發(fā)生類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病理改變，我們?cè)谠炷：蟮?30 天處死模型大鼠，分離
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R392.11

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2574798