【摘要】：目的:為了研究人類精子表面是否存在乳鐵蛋白的受體(LfR)及其在精子表面的定位和生物學(xué)特性。 方法:設(shè)計(jì)合成LfR的特異性引物,從睪丸cDNA文庫中用聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(PCR)擴(kuò)增該蛋白受體的基因產(chǎn)物,體外用EscherichiacoliBL21 (DE3)載體表達(dá)重組LfR的重組蛋白質(zhì);收集正常人的精液,用非連續(xù)密度梯度法把精子從精液中分離,提取精子表面蛋白質(zhì),用免疫印跡法檢測精子表面是否存在天然LfR;用Lf和LfR重組蛋白進(jìn)行Far-western印跡法證實(shí)兩者相互作;用免疫共沉淀和放射自顯影分析Lf和LfR的結(jié)合以及用免疫熒光來定位LfR在精子表面的位置。 結(jié)果:人類睪丸文庫含有LfR的基因,重組LfR蛋白Mr 34,000Da。人類精子天然LfR蛋白Mr136,000Da。人類精子表面存在LfR,該受體以四倍體分子形式靠GPI連接在精子膜表面的頭部和中段。體外研究證實(shí),Lf與LfR競爭性地相結(jié)合。 結(jié)論:在精子表面,Lf與LfR相結(jié)合,LfR可能在介導(dǎo)Lf的功能方面發(fā)揮重要作用。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R346

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