【摘要】：目的:觀察氧化苦參堿(oxymatrine,OMT)對人臍靜脈平滑肌細胞(humans umbilical vein smooth muscle cells,HUSMCs)鈣化的影響及其可能機制。方法:以β-甘油磷酸鹽誘導(dǎo)HUSMCs鈣化,實驗分為對照組、鈣化組、單純OMT組、OMT干預(yù)高、中、低劑量組。采用Von Kossa染色鑒定細胞鈣化,比色法檢測細胞鈣含量,磷酸苯二鈉法測定ALP活性,放射免疫法測定骨鈣素(OC)含量,ELISA檢測細胞培養(yǎng)液中TGF-β1和細胞內(nèi)psmad2/3,smad2/3的含量變化,Western blot法檢測細胞內(nèi)Cbfα1蛋白的表達。結(jié)果:鈣化組與對照組相比平滑肌細胞內(nèi)可見大量黑色顆粒聚集,鈣含量,ALP活性,OC,TGF-β1,smad2/3磷酸化和Cbfα1蛋白的含量均明顯增加;OMT干預(yù)后鈣化指標均下降,TGF-β1,smad2/3磷酸化和Cbfα1蛋白表達量亦明顯減少,且高劑量OMT組效應(yīng)強于中、低劑量組。結(jié)論:OMT可有效抑制β-甘油磷酸鹽誘導(dǎo)的HUSMCs鈣化,且OMT降低TGF-β1,smad2/3磷酸化和Cbfα1蛋白表達可能是OMT抑制HUSMCs鈣化的機制之一。
【圖文】：

HUSMCs 呈梭形及典型的“峰谷”狀生長，α-actin 鑒定平滑肌細胞陽性率 ＞ 98%，胞漿內(nèi)呈現(xiàn)棕黃色絲狀物證實為 HUSMCs( 圖 1) 。A. 原代 HUSMCs 培養(yǎng)第 6 天( × 40) ; B. HUSMCs 呈“峰谷樣”生長( ×100) ; C. HUSMCs 鑒定( 免疫組化 DAB，×200) 。圖 1 原代血管平滑肌細胞培養(yǎng)及鑒定Fig. 1 The culture of HUSMCs and the cells identification2. 3 HUSMCs 傳代 吸取 1 mL 0. 25% 胰酶入培養(yǎng)瓶中，靜置消化 2 min，倒置顯微鏡下觀察見細胞間隙增寬，細胞邊緣清晰即可終止消化，，將培養(yǎng)瓶中胰酶倒掉，加入含 10%胎牛血清、100 U·mL－ 1青霉素和鏈霉素的 DMEM/F12培養(yǎng)液中和胰酶，并輕輕吹打瓶壁，吹打成細胞懸液。實驗用 3 ～5 代細胞。2. 4 分組 接種細胞分為 6 組: 對照組( CON 組)單純 DMEM/F12培養(yǎng)基( 含 3% 胎牛血清) 培養(yǎng); 鈣化組( CAL 組) 在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入 12 mmol·L－ 1的 β-甘油磷酸鹽; 單純 OMT 組( 培養(yǎng)基中含 1 ×10－ 4mol·L－ 1的 OMT) ; 鈣化 + OMT 組: 在鈣化培養(yǎng)液中分別加入1 ×10－ 2

百分比升高了 42. 03% ( P ＜ 0. 05) ; OMT 低、中、高劑量組與 CAL 組比較，其陽性細胞百分比分別下降了 49. 66%，49. 72，66. 6%( P ＜0. 05，圖 3) 。A. CON 組; B. CAL 組; C. 單純 OMT 組; D. OMT-L 組; E. OMT-M 組;F. OMT-H 組( 圖 4 同) 。圖 2 OMT 干 預(yù) 后 各 組 HUSMCs Von Kossa 染 色 結(jié) 果( ×100)Fig. 2 The Von Kossa staining analysis showing the morphologyof HUSMCs after culturing in calcification medium containing 12mmol·L－ 1β-GP and OMT( × 100)3. 2 鈣含量變化 與 CON 組相比，CAL 組鈣離子含量增加271. 32%( P ＜0. 01) 。OMT 組鈣離子含量較CON 組升高了 38. 12% ，差異不顯著。OMT 高、中、低劑量組與 CAL 組相比鈣離子含量分別下降了42. 03% ，48. 13% ( 分別 P ＜ 0. 01) ，13. 29% ( 表 1) 。與 CON 組比較1)P ＜ 0. 05; 與 CAL 組比較2)P ＜ 0. 01。圖 3 不同濃度 OMT 干預(yù) HUSMCs 后鈣化細胞百分比變化Fig. 3 The percentages of calcific cells from the Von Kossastaining表 1 HUSMCs 鈣含量及 ALP 活性變化( xs

本文編號：2570008