【摘要】：目的 確定適合兔肌源性干細胞(muscle-derived stem cells, MDSCs),生長的透明質酸凝膠濃度;建立兔關節(jié)軟骨細胞分離、培養(yǎng)的新方法;以軟骨細胞為誘導因素,于透明質酸凝膠中“誘導肌源性干細胞分化為軟骨樣細胞”,并對誘導后細胞進行鑒定;探討肌源性干細胞與軟骨細胞,混和培養(yǎng)體外成軟骨的可行性。 方法 分離培養(yǎng)、擴增傳代兔MDSCs及關節(jié)軟骨細胞,二者按一定比例混和,6×1010/L密度接種于5%濃度的透明質酸凝膠為共培養(yǎng)組,以相同密度的單純MDSCs和單純軟骨細胞作為陰性與陽性對照。倒置相差顯微鏡下觀察,10d后行甲苯胺藍染色和Ⅱ型膠原免疫細胞化學檢測,RT-PCR檢測Ⅱ型膠原和aggrecan的mRNA表達。 結果 MDSCs于各不同濃度的透明質酸凝膠中生長狀態(tài)均良好;兔關節(jié)軟骨經(jīng)混合酶消化后,可獲得純度較高,活力較強的軟骨細胞,經(jīng)免疫組化及甲苯胺藍染色呈陽性結果。軟骨細胞于透明質酸凝膠中誘導肌源性干細胞,5d后鏡下見共培養(yǎng)組MDSCs形態(tài)由梭形向多邊多角形轉化,10d后細胞甲苯胺藍染色和Ⅱ型膠原免疫組織化學檢測與陽性對照組相同,RT-PCR檢測Ⅱ型膠原和aggrecan mRNA呈陽性表達。陰性對照組在體外培養(yǎng)過程中未分化為軟骨細胞. 結論 MDSCs在不同濃度的透明質酸凝膠中生長狀態(tài)未發(fā)生變化;利用混合酶消化法可以獲得純度較高,活力較強的軟骨細胞,軟骨細胞通過體外的單層培養(yǎng)進行擴增時,四代以后的細胞失去軟骨細胞的表型,不適合應用于其它相關實驗;軟骨細胞培養(yǎng)液可誘導透明質酸凝膠中的肌源性干細胞向軟骨細胞轉化,具有很好的臨床應用潛能。
【圖文】：

Table 1 The rate of MDSCs differentiation（%）(x—±s,n=10)ps 3d 6d 10ive controlve controlpced group1.3±0.43186.4±0.18627.7±2.549*2.7±0.53289.58±1.54752.3±5.142*3.1±094.57±77.1±8注：與對照組相比：* P＜0.05RT-PCR細胞經(jīng) RT-PCR 擴增后，，共同培養(yǎng)組和陽性對照組可見Ⅱ型膠原和 ag達，說明經(jīng)誘導的細胞中表達Ⅱ型膠原和 aggrecan 的 mRNA，而陰未見表達(圖 11)。

細胞質Desmin染色陽性
【學位授予單位】：遼寧醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R329

【參考文獻】

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7 何R

本文編號：2568322