【摘要】：目的：研究體外長期培養(yǎng)hUC-MSCs的TLRs基因表達與抗氧化能力變化特點，為探討長期培養(yǎng)過程對hUC-MSCs的增殖、分化、遷移及參與損傷修復、免疫調節(jié)等功能變化的影響提供實驗資料。 方法：無菌收集剖宮產(chǎn)新生兒臍帶，膠原酶Ⅱ消化法，貼壁選擇法分離純化，傳代培養(yǎng)hUC-MSCs；對第3、28代hUC-MSCs進行流式分析，脂肪和成骨細胞誘導鑒定；用ORAC法測定不同代hUC-MSCs抗氧化能力水平；RT-PCR檢測第3、28代hUC-MSCs上TLR1~10mRNA表達情況；qRT-PCR分析不同代hUC-MSCs的TLR9mRNA表達差異。 結果：第3代與第28代hUC-MSCs細胞表型基本一致：CD_(29)~+/CD_(44)~+/CD_(105)~+/CD_(31)~-/CD_(34)~-/CD_(40)~-/CD_(45)~-/CD_(106)~-/HLA-DR~-；第3代與第28代細胞均可誘導分化為成骨、脂肪細胞；ORAC法測定hUC-MSCs抗氧化能力值，在第8代時最高為4.97μmol Trolox/ml，第28代較第8代降低了29.3%，差異有統(tǒng)計學意義（P0.01）；RT-PCR結果顯示第3代hUC-MSCs細胞中TLR1~10均有表達，其中TLR1、2、3、6、9高表達，TLR4、5、7、8、10低表達，第28代與第3代hUC-MSCs比較，TLR1、2、3、4、6、9表達減弱，TLR5、7、8、10未檢測表達；qRT-PCR結果顯示隨代數(shù)的增加，TLR9mRNA的表達量會逐漸降低，第18、23、28代細胞分別與第3代相比，表達量降低了89.5%、95.2%、89%，差異有顯著統(tǒng)計學意義（P0.01）。 結論：體外長期培養(yǎng)后hUC-MSCs的細胞表型基本不變，仍可誘導分化為成骨、脂肪細胞，說明其仍保持基本的干細胞生物學特性；hUC-MSCs抗氧化能力在第8代時最高，此后隨代數(shù)的遞增而逐漸減弱；隨著培養(yǎng)代數(shù)的增加，TLR1~10mRNA表達逐漸減弱或消失；TLR9的mRNA表達量隨代數(shù)的增加而降低，，提示長期培養(yǎng)過程可能會影響hUC-MSCs的增殖、分化、遷移、免疫調節(jié)能力。TLRs基因表達隨培養(yǎng)傳代發(fā)生改變是否意味著其相關功能發(fā)生變化有待進一步探討。
【圖文】：

A. hUC-MSCs at 24h incubation B. hUC-MSCs at 48h incubationA. hUC-MSCs at 3d incubation D. hUC-MSCs at 7d incubation圖1-1 原代培養(yǎng)hUC-MSCs顯微形態(tài)（×100）Figure 1 Themorphology of hUC-MSCs primary culture in vitro（×100）

A. Primary cells B. Passage3C. Passage23 D. Passage28圖1-2 不同代人臍帶間充質干細胞形態(tài)（×100）Figure1-2 Morphology of human umbilical cord mesenchymal stemcells at different passages （×100）1.3.3 hUC-MSCs細胞表型鑒定流式細胞檢測顯示體外培養(yǎng)第3、28代hUC-MSCs的細胞表型均為：
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R363

【參考文獻】

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本文編號：2568259