【摘要】：目的：研究體外長(zhǎng)期培養(yǎng)hUC-MSCs的TLRs基因表達(dá)與抗氧化能力變化特點(diǎn)，為探討長(zhǎng)期培養(yǎng)過(guò)程對(duì)hUC-MSCs的增殖、分化、遷移及參與損傷修復(fù)、免疫調(diào)節(jié)等功能變化的影響提供實(shí)驗(yàn)資料。 方法：無(wú)菌收集剖宮產(chǎn)新生兒臍帶，膠原酶Ⅱ消化法，貼壁選擇法分離純化，傳代培養(yǎng)hUC-MSCs；對(duì)第3、28代hUC-MSCs進(jìn)行流式分析，脂肪和成骨細(xì)胞誘導(dǎo)鑒定；用ORAC法測(cè)定不同代hUC-MSCs抗氧化能力水平；RT-PCR檢測(cè)第3、28代hUC-MSCs上TLR1~10mRNA表達(dá)情況；qRT-PCR分析不同代hUC-MSCs的TLR9mRNA表達(dá)差異。 結(jié)果：第3代與第28代hUC-MSCs細(xì)胞表型基本一致：CD_(29)~+/CD_(44)~+/CD_(105)~+/CD_(31)~-/CD_(34)~-/CD_(40)~-/CD_(45)~-/CD_(106)~-/HLA-DR~-；第3代與第28代細(xì)胞均可誘導(dǎo)分化為成骨、脂肪細(xì)胞；ORAC法測(cè)定hUC-MSCs抗氧化能力值，在第8代時(shí)最高為4.97μmol Trolox/ml，第28代較第8代降低了29.3%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01）；RT-PCR結(jié)果顯示第3代hUC-MSCs細(xì)胞中TLR1~10均有表達(dá)，其中TLR1、2、3、6、9高表達(dá)，TLR4、5、7、8、10低表達(dá)，第28代與第3代hUC-MSCs比較，TLR1、2、3、4、6、9表達(dá)減弱，TLR5、7、8、10未檢測(cè)表達(dá)；qRT-PCR結(jié)果顯示隨代數(shù)的增加，TLR9mRNA的表達(dá)量會(huì)逐漸降低，第18、23、28代細(xì)胞分別與第3代相比，表達(dá)量降低了89.5%、95.2%、89%，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01）。 結(jié)論：體外長(zhǎng)期培養(yǎng)后hUC-MSCs的細(xì)胞表型基本不變，仍可誘導(dǎo)分化為成骨、脂肪細(xì)胞，說(shuō)明其仍保持基本的干細(xì)胞生物學(xué)特性；hUC-MSCs抗氧化能力在第8代時(shí)最高，此后隨代數(shù)的遞增而逐漸減弱；隨著培養(yǎng)代數(shù)的增加，TLR1~10mRNA表達(dá)逐漸減弱或消失；TLR9的mRNA表達(dá)量隨代數(shù)的增加而降低，，提示長(zhǎng)期培養(yǎng)過(guò)程可能會(huì)影響hUC-MSCs的增殖、分化、遷移、免疫調(diào)節(jié)能力。TLRs基因表達(dá)隨培養(yǎng)傳代發(fā)生改變是否意味著其相關(guān)功能發(fā)生變化有待進(jìn)一步探討。
【圖文】：

A. hUC-MSCs at 24h incubation B. hUC-MSCs at 48h incubationA. hUC-MSCs at 3d incubation D. hUC-MSCs at 7d incubation圖1-1 原代培養(yǎng)hUC-MSCs顯微形態(tài)（×100）Figure 1 Themorphology of hUC-MSCs primary culture in vitro（×100）

A. Primary cells B. Passage3C. Passage23 D. Passage28圖1-2 不同代人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)（×100）Figure1-2 Morphology of human umbilical cord mesenchymal stemcells at different passages （×100）1.3.3 hUC-MSCs細(xì)胞表型鑒定流式細(xì)胞檢測(cè)顯示體外培養(yǎng)第3、28代hUC-MSCs的細(xì)胞表型均為：
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R363

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2568259