【摘要】：第一部分NTHi體外生物膜的形成 【目的】探討不可分型流感嗜血桿菌（Nontypeablehaemophilusinfluenzae,NTHi）生物膜（Biofilm,BF）體外的形成，為研究NTHiBF相關(guān)感染發(fā)生機(jī)制奠定基礎(chǔ)。 【方法】以NTHi標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC49247為BF建立對象，銅綠假單胞菌（Pseudomonasaeruginosa，PA）BF陽性菌株ATCC27853為陽性質(zhì)控，兩菌分別培養(yǎng)2、3、4、7天后，分別采用結(jié)晶紫法、平板計數(shù)法觀察兩者BF的生長狀態(tài)，并在第4天采用掃描電鏡（Scanningelectronmicroscope,SEM）觀察生物膜的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。 【結(jié)果】結(jié)晶紫法BF的吸光度NTHi前4天由0.0591±0.0013升至0.269±0.0028vs.PA0.0634±0.0016升至0.332±0.0028，隨后下降，至第7天NTHiBF吸光度降至0.1135±0.0021vs.PA0.1265±0.0050�？瞻讓φ諡�0.0365±0.0028平板計數(shù)法NTHi前4天BF內(nèi)活菌數(shù)由(0.530±0.028)×10~7cfu/ml升至(2.275±0.0212)×10~7cfu/ml，至第7天降至(1.036±0.0198)×10~7cfu/ml。PA相應(yīng)時間點(diǎn)的活菌數(shù)由(0.55±0.014)×10~7cfu/ml至(3.705±0.021)×10~7cfu/ml，第7天降至（1.405±0.035）×10~7cfu/ml，各時間點(diǎn)之間,結(jié)晶紫法細(xì)菌與空白對照之間有統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05）。除第4天（P0.05）外，其余天數(shù)兩菌之間無統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05）。SEM第4天結(jié)果顯示細(xì)菌能形成典型的BF。 【結(jié)論】NTHi體外可形成BF。結(jié)晶紫法、平板計數(shù)法和掃描電鏡可用于BF常規(guī)檢測。 第二部分兒童NTHi感染常見疾病與體外生物膜的關(guān)系 【目的】探討兒童NTHi感染常見疾病體外生物膜的差異性，為明確BF在不同疾病中發(fā)揮的作用奠定基礎(chǔ)。 【方法】選取臨床鼻竇炎、中耳炎、肺炎和支氣管炎四種疾病，呼吸道分離的80株不可分型流感嗜血桿菌以及標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC49247為研究對象，連續(xù)培養(yǎng)5天時間，結(jié)晶紫法檢測吸光度的大小，第2天的BF結(jié)果經(jīng)掃描電鏡觀察確認(rèn)。 【結(jié)果】臨床菌株結(jié)晶紫法BF平均吸光度第一天為0.3056±0.021838，第2天最高為0.5516±0.04653，至第5天BF大部分解聚，吸光度為0.2554±0.02229，而標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC49247第一天吸光度僅為0.0305±0.0007，至第4天才達(dá)峰值，吸光度為0.255±0.0339，第5天開始解聚，吸光度為0.1945±0.0057。各疾病組之間第2天BF吸光度分別為中耳炎0.67477±0.064936，肺炎0.62190±0.057424，支氣管炎0.44705±0.015081，鼻竇炎0.43817±0.017277，第5天BF吸光度為：中耳炎0.32559±0.031621，肺炎0.27371±0.024501，支氣管炎0.22098±0.013289，鼻竇炎0.17689±0.028316。各疾病組比較，除支氣管炎和鼻竇炎之間無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05)以外，其余各組之間、各時間點(diǎn)之間吸光度均有統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05） 【結(jié)論】不同感染疾病BF有差異。其中，BF在中耳炎發(fā)揮功能最大，肺炎次之，鼻竇炎支氣管炎最弱。 第三部分NTHi感染致炎蛋白E與生物膜的關(guān)系 【目的】探討不可分型流感嗜血桿菌感染促炎蛋白E（ProteinE，PE）與體外BF形成的關(guān)系，為BF的干預(yù)形成奠定基礎(chǔ)。 【方法】從300個鼻竇炎和中耳炎中兒童患者中分離NTHi共59株，其中鼻竇炎36株，中耳炎23株。采血進(jìn)行白細(xì)胞計數(shù)評估炎癥狀況。設(shè)置2天、3天、4天、5天共4個時間點(diǎn)，提取樣本BF和浮游狀態(tài)的總RNA，RT-PCR方法觀察pe以及l(fā)uxSmRNA的表達(dá)。 【結(jié)果】NTHi的pemRNA與WBC具有相關(guān)性(P0.05，r=0.5253），當(dāng)細(xì)菌轉(zhuǎn)錄表達(dá)pemRNA時，，luxSmRNA為陰性，BF不形成；當(dāng)pemRNA轉(zhuǎn)錄消失后，luxSmRNA為陽性，BF形成。 【結(jié)論】致炎蛋白E可影響B(tài)F的形成。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R378.41

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2565126