【摘要】：GAD67-GFP基因敲入小鼠作為模式實驗動物被廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學實驗中,尤其是在探測GAD67靈敏性方面優(yōu)勢尤為突出,因此GAD67-GFP基因敲入小鼠經(jīng)常被用于GAD67相關(guān)神經(jīng)元——γ氨基丁酸(GABA)能神經(jīng)元的相關(guān)研究中。GABA是一種重要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì),已有研究在嗅球各細胞層中均有GABA的分布。為了更精確的研究GABA在嗅球中的分布我們引入了GAD67-GFP基因敲入小鼠作為實驗動物模型。一氧化氮(NO)也是一種重要的神經(jīng)遞質(zhì)。已有研究表明在嗅皮質(zhì)區(qū),NO與GABA存在著共定位,而且二者在激活NMDA受體通路中存在著協(xié)同作用。然而在嗅球中還缺乏相關(guān)方面的研究。 本實驗首先通過對動物基因組進行PCR擴增,對小鼠進行基因型鑒定。取經(jīng)基因型鑒定為陽性GAD67-GFP基因敲入小鼠嗅球做冰凍切片。尼氏染色(Nissl staining)顯示嗅球各細胞層排布分層。GAD67-GFP與DAPI雙染探查嗅球中各細胞層中GAD67陽性神經(jīng)元的分布比例。免疫熒光雙標實驗,探查GAD67-GFP與一氧化氮合酶(bNOS)在嗅球各細胞層的分布及共存情況。 基因組PCR基因型鑒定表明陽性GAD67-GFP基因敲入小鼠基因組中含有GFP片段即瓊脂糖凝膠電泳中出現(xiàn)750bp條帶。Nissl染色結(jié)果清楚地顯示嗅球共有三個細胞層即由表及里依次為：球旁細胞曾(GL)、僧帽細胞層(MCL)、顆粒細胞層(GCL). GAD67-GFP與DAPI雙染結(jié)果顯示GAD67-GFP在嗅球各細胞層的分布比例分別為：42.98±0.92%(GL)、23.64±0.84%(MCL)、77.75±0.84%(GCL)。GAD67-GFP與bNOS免疫熒光雙標實驗結(jié)果顯示：bNOS主要分布于GL與MCL,而在GCL未見有沒有分布。GAD67與bNOS僅在嗅小球?qū)优加泄泊妗?br/> 【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R322

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