發(fā)布時(shí)間：2017-03-19 10:02

  本文關(guān)鍵詞：線粒體DNA缺失對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞焦亡的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景及目的:線粒體DNA缺失細(xì)胞(rho0細(xì)胞)是指細(xì)胞內(nèi)不含有線粒體DNA,同時(shí)喪失線粒體功能,無(wú)法進(jìn)行氧化呼吸而僅依靠糖酵解供能存活的一類細(xì)胞。目前rho0細(xì)胞的培養(yǎng)方法主要有溴化乙錠誘導(dǎo)法和質(zhì)粒轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)。通過(guò)制備rho0細(xì)胞,可以對(duì)線粒體的一些重要功能,如ROS的產(chǎn)生,氧化磷酸化,ATP產(chǎn)生,電子鏈的傳遞等進(jìn)行研究。細(xì)胞焦亡的發(fā)現(xiàn)來(lái)自早期研究胞內(nèi)寄生菌對(duì)巨噬細(xì)胞作用機(jī)制。這種caspase-1依賴的細(xì)胞死亡方式不是單核巨噬細(xì)胞系所特有的,在樹(shù)突狀細(xì)胞及其他細(xì)胞中均有細(xì)胞焦亡的相關(guān)報(bào)導(dǎo)。各種刺激因素均能夠誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生焦亡,這其中不僅包括病原微生物的病原相關(guān)分子模式(PAMP),還包括來(lái)自機(jī)體自身的損傷相關(guān)分子模式(DAMP)。近期文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo),動(dòng)脈粥樣硬化組織樣本的免疫組化顯示,活化的caspase-1在晚期粥樣斑塊中大量表達(dá),同時(shí)與巨噬細(xì)胞存在共定位關(guān)系。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,ox-LDL可以通過(guò)激活caspase-1分子誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞膜溶解性死亡,并伴隨有大量IL-1β和IL-18等細(xì)胞因子的釋放�；蚯贸龑�(shí)驗(yàn)進(jìn)一步提示,CD36分子及NLRP3炎癥體亦參與在此過(guò)程中。線粒體功能失�？梢杂绊懠�(xì)胞對(duì)凋亡途徑的調(diào)控,在線粒體DNA缺失的多種細(xì)胞系中,都表現(xiàn)出對(duì)凋亡的抵抗性。但是線粒體及線粒體DNA缺失在ox-LDL誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞焦亡中的作用及發(fā)生機(jī)制,目前尚不清楚。本研究擬通過(guò)制備線粒體DNA缺失的巨噬細(xì)胞,進(jìn)一步探討線粒體在ox-LDL誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞焦亡中的作用及機(jī)制,為深入研究線粒體在炎癥體活化調(diào)控及其在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展中的作用打下基礎(chǔ)并提供新的思路。方法:采用含溴化乙錠的培養(yǎng)基連續(xù)培養(yǎng)J774A.1巨噬細(xì)胞90d后,采用倒置相差顯微鏡,觀察J774A.1 rho0細(xì)胞形態(tài);使用CCK8法檢測(cè)細(xì)胞在營(yíng)養(yǎng)缺陷培養(yǎng)基中增殖能力;用PCR擴(kuò)增法觀察線粒體編碼的細(xì)胞色素C氧化酶1(cytochrome c oxidase 1,Mt COI)DNA水平與細(xì)胞核編碼的18S核糖體RNA(18S r RNA)的DNA之比;采用SYBR Green染色法,觀察J774A.1 rho0細(xì)胞胞內(nèi)核酸;采用油紅O染色觀察ox-LDL處理后的巨噬細(xì)胞內(nèi)脂滴的聚集情況;采用COD-PAP法檢測(cè)ox-LDL處理后的巨噬細(xì)胞內(nèi)總膽固醇水平;采用AO/EB染色及LDH釋放實(shí)驗(yàn)觀察ox-LDL對(duì)細(xì)胞膜完整性的影響;Western blot檢測(cè)caspase-1及IL-1β的表達(dá);采用DCFH-DA染色,在流式細(xì)胞儀上檢測(cè)ox-LDL處理前后的J774A.1 rho0細(xì)胞和J774A.1細(xì)胞的胞內(nèi)ROS產(chǎn)生;采用Mitotracker Green,Mitotracker Deep Red及DAPI染色,通過(guò)激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)ox-LDL處理前后的J774A.1 rho0細(xì)胞和J774A.1細(xì)胞的線粒體膜電位變化。結(jié)果:倒置相差顯微鏡觀察結(jié)果表明,J774A.1 rho0細(xì)胞與J774A.1細(xì)胞相比具有明顯形態(tài)學(xué)差異;CCK8法檢測(cè)結(jié)果表明在不含丙酮酸及尿嘧啶的DMEM培養(yǎng)基中連續(xù)培養(yǎng),J774A.1 rho0細(xì)胞的增殖受到明顯抑制;溴化乙錠可抑制線粒體DNA的復(fù)制,PCR結(jié)果顯示J774A.1 rho0細(xì)胞線粒體編碼的Mt COI DNA水平與細(xì)胞核編碼的18S r RNA的DNA比值遠(yuǎn)小于J774A.1細(xì)胞;SYBR Green染色結(jié)果進(jìn)一步表明J774A.1 rho0細(xì)胞胞質(zhì)的核酸量明顯少于J774A.1細(xì)胞;油紅O染色及COD-PAP法檢測(cè)結(jié)果表明線粒體DNA缺失不影響J774A.1 rho0細(xì)胞對(duì)ox-LDL的攝取及膽固醇在細(xì)胞內(nèi)的聚集;在50、100μg/ml ox-LDL分別處理J774A.1 rho0細(xì)胞及J774A.1細(xì)胞24 h后,J774A.1 rho0細(xì)胞組LDH釋放分別為(27.48±3.61)%,(40.94±3.92)%,明顯低于J774A.1細(xì)胞組(42.76±6.81)%,(67.3±8.05)%;AO/EB染色的結(jié)果顯示,在50、100μg/ml ox-LDL作用24 h后,視野中橘紅色信號(hào)所占比例J774A.1 rho0細(xì)胞組分別為(23±5.72)%,(28±11.78)%,明顯低于J774A.1細(xì)胞組(45±19.03)%,(81±13.83)%;Western blot檢測(cè)結(jié)果表明ox-LDL誘導(dǎo)J774A.1 rho0細(xì)胞caspase-1及IL-1β的表達(dá)水平明顯小于J774A.1細(xì)胞;應(yīng)用DCFH-D染色,流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示J774A.1 rho0細(xì)胞經(jīng)過(guò)ox-LDL處理后,ROS生成為(58.7±0.84)%小于J774A.1細(xì)胞(91.6±0.61)%;激光共聚焦顯微鏡結(jié)果表明J774A.1 rho0細(xì)胞能夠抵抗ox-LDL誘導(dǎo)的線粒體膜電位的下降。結(jié)論:1.線粒體DNA缺失的J774A.1細(xì)胞可以減少ox-LDL誘導(dǎo)的caspase-1及IL-1β蛋白水平表達(dá),細(xì)胞LDH釋放,表明線粒體DNA缺失能夠抵抗ox-LDL誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞焦亡。2.線粒體DNA缺失的J774A.1細(xì)胞并不影響巨噬細(xì)胞攝取ox-LDL及胞內(nèi)膽固醇的聚集。3.進(jìn)一步驗(yàn)證線粒體DNA缺失能夠抵抗ox-LDL誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞焦亡的機(jī)制:線粒體DNA缺失可以導(dǎo)致細(xì)胞呼吸鏈被破壞,進(jìn)而減少ROS的產(chǎn)生,從而抵抗ox-LDL誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞焦亡。同時(shí)J774A.1 rho0細(xì)胞能夠抵抗ox-LDL誘導(dǎo)的線粒體膜電位的下降。
【關(guān)鍵詞】：巨噬細(xì)胞 rho0 細(xì)胞 焦亡 ox-LDL ROS
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 中英文縮略詞表5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 引言14-16
• 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及流程16-17
• 實(shí)驗(yàn)材料17-23
• 實(shí)驗(yàn)方法23-30
• 結(jié)果30-43
• 討論43-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-50
• 附錄50-51
• 致謝51-52
• 綜述52-66
• 參考文獻(xiàn)62-66

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 ;豚鼠巨噬細(xì)胞經(jīng)P_(204)處理后的抗石英細(xì)胞毒作用[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)參考資料(衛(wèi)生學(xué)分冊(cè));1976年04期

2 鄧俠進(jìn);;巨噬細(xì)胞的抗癌作用[J];遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1979年02期

3 陸天才;;疾病對(duì)肺巨噬細(xì)胞的影響[J];煤礦醫(yī)學(xué);1982年01期

4 郭瑞清;祝彼得;;一種分離巨噬細(xì)胞的簡(jiǎn)單方法[J];濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1990年02期

5 謝志堅(jiān);巨噬細(xì)胞異質(zhì)性[J];醫(yī)學(xué)綜述;2001年06期

6 饒艷;運(yùn)動(dòng)及神經(jīng)內(nèi)分泌對(duì)巨噬細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)[J];體育與科學(xué);2002年05期

7 朱金元;;吸煙對(duì)肺巨噬細(xì)胞的影響[J];浙江醫(yī)學(xué)教育;2003年01期

8 張俊峰;過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體與單核/巨噬細(xì)胞系[J];醫(yī)學(xué)綜述;2004年03期

9 韋錦學(xué);顧軍;;巨噬細(xì)胞的激活誘導(dǎo)死亡[J];生命科學(xué);2006年02期

10 李曉曦;郭寧;曹雪濤;;腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移的研究現(xiàn)狀[J];中國(guó)腫瘤生物治療雜志;2008年01期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 史玉玲;王又明;豐美福;;巨噬細(xì)胞激活作用的研究[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第五次會(huì)議論文摘要匯編[C];1992年

2 吳國(guó)明;周輝;;巨噬細(xì)胞和創(chuàng)傷纖維化[A];2009年浙江省骨科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

3 李奇;王海杰;;透明質(zhì)酸對(duì)于淋巴結(jié)巨噬細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的影響[A];解剖學(xué)雜志——中國(guó)解剖學(xué)會(huì)2002年年會(huì)文摘匯編[C];2002年

4 劉革修;歐大明;劉軍花;黃紅林;廖端芳;;丙丁酚在體外能抑制巨噬細(xì)胞脂質(zhì)氧化介導(dǎo)的低密度脂蛋白氧化并調(diào)節(jié)氧化巨噬細(xì)胞的分泌功能[A];面向21世紀(jì)的科技進(jìn)步與社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展（下冊(cè)）[C];1999年

5 葉金善;楊麗霞;郭瑞威;;環(huán)氧化酶-2/前列腺素E_2在血管緊張素Ⅱ刺激巨噬細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子中的作用[A];第十三次全國(guó)心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2011年

6 秦帥;陳希;孔德明;;構(gòu)建由綠色熒光標(biāo)記巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)系[A];貴州省中西醫(yī)結(jié)合內(nèi)分泌代謝學(xué)術(shù)會(huì)論文匯編[C];2012年

7 武劍華;徐惠綿;;腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在胃癌中的相關(guān)研究[A];第9屆全國(guó)胃癌學(xué)術(shù)會(huì)議暨第二屆陽(yáng)光長(zhǎng)城腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2014年

8 何軍;;血凝素樣氧化型低密度脂蛋白受體升高巨噬細(xì)胞內(nèi)膽固醇水平[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第11次心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2009年

9 宋盛;周非凡;邢達(dá);;PDT誘導(dǎo)的凋亡細(xì)胞對(duì)巨噬細(xì)胞NO合成的影響[A];第七屆全國(guó)光生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2010年

10 張磊;朱建華;黃元偉;姚航平;;血管緊張素Ⅱ?qū)奘杉?xì)胞(THP-1重細(xì)胞)凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體表達(dá)的影響[A];浙江省免疫學(xué)會(huì)第五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2004年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 通訊員 李靜 記者 胡德榮;惡性腫瘤巨噬細(xì)胞未必皆“惡人”[N];健康報(bào);2014年

2 蘭克;以嘗試用巨噬細(xì)胞治癱瘓[N];科技日?qǐng)?bào);2000年

3 薛佳;免疫系統(tǒng)——人體的“衛(wèi)士”[N];保健時(shí)報(bào);2009年

4 記者 胡德榮;鐵泵蛋白“維穩(wěn)”鐵代謝作用首次闡明[N];健康報(bào);2011年

5 侯嘉 何新鄉(xiāng);硒的神奇功能[N];中國(guó)食品質(zhì)量報(bào);2003年

6 唐穎 倪兵 陳代杰;巨噬細(xì)胞泡沫化抑制劑研究快步進(jìn)行[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

7 劉元江;新發(fā)現(xiàn)解釋腫瘤為何易成“漏網(wǎng)之魚(yú)”[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2007年

8 本報(bào)記者 侯嘉 通訊員 何新鄉(xiāng);今天你補(bǔ)硒了嗎[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

9 左志剛;升血小板藥使用注意[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2007年

10 記者 許琦敏;“鐵泵”蛋白幫助回收鐵元素[N];文匯報(bào);2011年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 周赤燕;巨噬細(xì)胞MsrA對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的干預(yù)研究[D];武漢大學(xué);2013年

2 章桂忠;TIPE2蛋白調(diào)控細(xì)胞增殖和炎癥的機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

3 張瑜;DKK1抑制巨噬細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積及其相關(guān)分子機(jī)制[D];山東大學(xué);2015年

4 孟濤;異丙酚對(duì)心臟收縮功能的抑制作用及其對(duì)巨噬細(xì)胞分泌功能調(diào)節(jié)的機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

5 周興;基于酵母微囊構(gòu)建新型口服巨噬細(xì)胞靶向遞送系統(tǒng)的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

6 蔣興偉;Tim-3對(duì)巨噬細(xì)胞極化的調(diào)控機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2015年

7 劉伯玉;清道夫受體A介導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬鉤端螺旋體研究[D];上海交通大學(xué);2013年

8 楊紹俊;miRNA-155介導(dǎo)ESAT-6誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制及其在結(jié)核診斷中的作用[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

9 翟光耀;單核/巨噬細(xì)胞Ly6C~(low)亞群在心肌梗死后瘢痕形成期的抗炎特性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

10 韓露;TRB3介導(dǎo)的脂肪組織巨噬細(xì)胞極化與糖尿病冠狀動(dòng)脈病變關(guān)系的研究[D];山東大學(xué);2015年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 馬春梅;AP0E~(-/-)小鼠TLR9介導(dǎo)巨噬細(xì)胞極化效應(yīng)對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化作用的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 張譯丹;鹽皮質(zhì)激素受體拮抗劑調(diào)控巨噬細(xì)胞表型對(duì)實(shí)驗(yàn)性矽肺的作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 盧文冉;HCV core蛋白作用的巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清對(duì)肝細(xì)胞生物學(xué)性狀的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 李文建;載脂蛋白E影響巨噬細(xì)胞因子表達(dá)及分型的機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

5 曹爽;高糖對(duì)巨噬細(xì)胞TLR4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)節(jié)作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

6 寧程程;腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在子宮內(nèi)膜癌雌激素敏感性中的作用及機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

7 高龍;PLD4在腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞抑制結(jié)腸癌增殖中的作用研究[D];成都醫(yī)學(xué)院;2015年

8 任虹;感染期子宮頸癌U14細(xì)胞荷瘤小鼠抑制巨噬細(xì)胞CCL5分泌的機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

9 李美玲;雙酚A對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞極化影響的體外研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

10 劉瓊;黃芪多糖影響巨噬細(xì)胞向脂肪細(xì)胞趨化的作用及機(jī)制研究[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2015年

  本文關(guān)鍵詞：線粒體DNA缺失對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞焦亡的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號(hào)：255863