【摘要】：i TRAQTM是2004年美國應用生物系統(tǒng)公司(Applied Biosystems Incorporation,ABI)最新推出的一種多肽體外標記試劑,該技術可對復雜樣本、細胞器、細胞裂解液等樣本進行相對和絕對定量研究,具有較好的定量效果、較高的重復性,并且彌補了DIGE及ICAT的不足,正迅速被廣大學者所接受。主要從i TRAQ實驗原理、實驗流程、i TRAQ與其他定量蛋白質組學方法的比較等3個方面進行簡要總結。
【圖文】：

殺�。垛g詿針?質譜檢測的時候，同重元素標記肽段部分裂解，標記蛋白則被分解為報告部分、平衡部分和氨基酸部分。報告部分在MS/MS圖上表現(xiàn)為診斷離子(diagnosticions)質荷比在114～117或113～121之間。串聯(lián)質譜檢測的診斷離子量的比值，代表了不同iTＲAQ試劑標記的不同樣品之間的同一蛋白質量的變化。iTＲAQ優(yōu)點是能夠標記沒有CyDye染料標記位點的肽段，iTＲAQ唯一的缺點是樣品需要先用胰酶(tryptic)消化裂解。這樣可能在樣品處理時會出現(xiàn)誤差。因此，保證iTＲAQ前期樣品處理條件的一致性很重要，見圖1、插頁Ⅲ圖2。圖14種同位素標簽的iTＲAQ試劑結構及機理示意圖2iTＲAQ實驗流程實驗流程主要是:樣本還原、變性、半胱氨酸封閉;胰蛋白酶消化蛋白;消化蛋白的iTＲAQ試劑標記;標記蛋白的混合;LC－MS/MS質譜檢測及分析［4］。利用還原劑［磷酸3(2－氯乙基)酯，tris－(2－carboxyethyl)phosphine，TCEP］對樣本蛋白質還原并用半胱氨酸封閉劑封閉，加入胰蛋白酶消化蛋白后用iTＲAQ試劑標記，充分標記后的蛋白質樣品用強陽離子交換色譜柱純化;用QSTAＲ屮XL及QTＲAP屮質譜儀檢測后用ProQUANT軟件分析。也可用4700蛋白質分析系統(tǒng)檢測后用GPSExplorerTM3．0軟件分析。分析結果可直接從Celera識別系統(tǒng)獲得蛋白質功能、生物學特性及其他生物信息，也可以與相關的基因數(shù)據(jù)庫連接。最近Shadforth等開發(fā)了i－Tracker軟件，，可以通過noncentroided串聯(lián)質譜峰列表中提取離子峰報告率，并可以很容易與Mascot及Sequest蛋白質鑒定工具連接［5］。3iTＲAQ多重化學標記串聯(lián)質譜技術與其他定量蛋白質組學方法的比較［6］3．1雙向凝膠電泳(2－DE)雖然蛋白組學概念僅近幾年出現(xiàn)，但其雙向凝膠電泳技術可以追溯到1975年。2－DE技術由O’Farre

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