【摘要】：流行性感冒簡稱流感,是由流感病毒引起的急性呼吸道傳染性疾病。流感發(fā)病快,傳染性強,發(fā)病率高。目前防止流感最有效的手段依舊是接種流感疫苗。在流感爆發(fā)期間,適當(dāng)及時的疫苗接種可明顯減少流感發(fā)病率和死亡率。但由于當(dāng)前流感疫苗生產(chǎn)工藝的限制,一旦大流行流感爆發(fā),不可能在短時間內(nèi)向接種人群提供足量的疫苗。在流感疫苗中使用佐劑不僅可以增強疫苗抗原免疫原性,還可以降低抗原用量。特別在應(yīng)對大流行流感時,使用佐劑節(jié)約抗原用量進而使更多的人群在爆發(fā)期間能夠及時接種疫苗顯得尤為重要。 乳劑作為疫苗佐劑已經(jīng)具有一定的應(yīng)用,納米乳劑是粒徑小于100nm的乳劑,是由水相、油相、表面活性劑和助表面活性劑形成的穩(wěn)定體系。其中連續(xù)相為油相、分散相為水相的納米乳劑為W/O型。本研究選用實驗室已有配方中安全性和質(zhì)量比最優(yōu)化體系組合,即表面活性劑(TW-80)、助表面活性劑(1,2-丙二醇)油相(IPM)體系。采用水相滴定法,將流感疫苗水溶液作為納米乳劑成分中的水相,制備成W/O型納米乳劑流感疫苗,考察了W/O型納米乳劑的佐劑效應(yīng)。 我國中草藥資源豐富,眾多研究已經(jīng)證明很多中草藥具有調(diào)節(jié)機體免疫力、增強免疫反應(yīng)的功能。中草藥是一種值得開發(fā)和利用的優(yōu)勢資源,有希望開發(fā)成為一類新型疫苗佐劑。本研究對天冬提取物及其他幾種中草藥提取物的免疫佐劑效果做了進一步研究。并且在實驗室前期初步實驗證明天冬提取物具有免疫佐劑效應(yīng)基礎(chǔ)上,應(yīng)用二次回歸正交旋轉(zhuǎn)組合方法以天冬提取物及流感疫苗HA含量作為2個關(guān)鍵因素設(shè)計分組,將HI效價作為響應(yīng)值,使用SAS V9.1軟件進行數(shù)據(jù)分析,對天冬提取物及疫苗劑量組合進行研究與優(yōu)化,并得出最佳響應(yīng)值對應(yīng)的二者劑量。 將以上制備的不同佐劑型流感疫苗與H3N2流感滅活疫苗共同肌肉免疫小鼠,以滅活疫苗的單獨免疫組、滅活疫苗與氫氧化鋁共同免疫組、生理鹽水免疫組作為對照組,于Od、21d進行免疫,取尾血收集血清,測定HI抗體效價檢測及IgG抗體及亞類含量檢測。并以HI效價作為響應(yīng)值,使用SAS V9.1軟件進行數(shù)據(jù)分析,對天冬提取物及疫苗劑量組合進行研究,并得出最佳響應(yīng)值對應(yīng)的二者劑量。并對納米乳劑組、天冬提取物組及對照組小鼠處死前2周進行第3次免疫,實驗結(jié)束時進行解剖,取脾臟做淋巴細胞在體外的細胞增殖反應(yīng)。并取納米乳劑組小鼠心、肝、肺、腎、腦做了病理切片研究；對初次進行佐劑效果研究的中草藥組別的小鼠增長體重進行了檢測,初步考察對小鼠機體的安全性。 研究顯示,納米乳劑及部分中草藥提取物都不同程度的顯示出較好的佐劑效果；納米乳劑組小鼠主要臟器檢查未見明顯異常,初次佐劑效果研究實驗組小鼠體重增長不受影響；并得出天冬提取物佐劑流感疫苗優(yōu)化劑量HA含量為4.345μg、天冬提取物含量為0.1mg時,能夠獲得最高響應(yīng)值HI效價為5092。
【圖文】：

1注射劑理化性質(zhì)檢測I30]1.1外觀制備的納米乳劑型流感疫苗注射劑外觀呈白色透明，流動性較好，見圖1。1.2形態(tài)觀察將納米乳劑佐劑疫苗，取少量滴在覆有支持膜的銅網(wǎng)上，靜置 10min，自然揮干，透射電鏡下二者均呈圓球形，見圖2。圖1納米乳劑疫苗外觀觀察圖2納米乳劑疫苗電鏡下形態(tài)觀察3粒度分析采用馬爾文激光粒度分析儀進行粒度分析，納米乳劑疫苗粒度在34nm左右，粒度分布均較為集中，與透射電鏡觀察結(jié)果基本一致，檢測結(jié)果分別見圖3。Z確ve份ge(陽川:傀了32PeakDialn.(nm)34.75%Intens心 1OD燦成h(nm) 2.578

1.2形態(tài)觀察將納米乳劑佐劑疫苗，取少量滴在覆有支持膜的銅網(wǎng)上，靜置 10min，自然揮干，透射電鏡下二者均呈圓球形，，見圖2。圖1納米乳劑疫苗外觀觀察圖2納米乳劑疫苗電鏡下形態(tài)觀察3粒度分析采用馬爾文激光粒度分析儀進行粒度分析，納米乳劑疫苗粒度在34nm左右，粒度分布均較為集中，與透射電鏡觀察結(jié)果基本一致，檢測結(jié)果分別見圖3。Z確ve份ge(陽川:傀了32PeakDialn.(nm)34.75%Intens心 1OD燦成h(nm) 2.578
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R392

【參考文獻】

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本文編號：2555077