【摘要】：目的：檢測(cè)腫瘤細(xì)胞上清液對(duì)成纖維細(xì)胞的激活的最佳濃度及最佳濃度的條件培養(yǎng)液激活成纖維細(xì)胞后血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF-A）的表達(dá)的變化規(guī)律。 方法：用MTT法和流式細(xì)胞凋亡術(shù)測(cè)定成纖維細(xì)胞在不同濃度條件培養(yǎng)液中的生長(zhǎng)變化與凋亡率。用RT-PCR， Western blot，免疫組化檢測(cè)成纖維細(xì)胞的α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）與VEGF-A的表達(dá)。 結(jié)果：MTT法發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞上清液與2×DMEM:F12比例為1:1時(shí)，對(duì)成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)有明顯的促進(jìn)作用，其生長(zhǎng)速度快于其它濃度（P＜0.05）。流式細(xì)胞凋亡術(shù)檢測(cè)表明隨著腫瘤細(xì)胞上清液濃度的提高，成纖維細(xì)胞的凋亡率也上升，1:1的凋亡率與1.5:1時(shí)有差異（P＜0.05）。腫瘤細(xì)胞上清液組成的條件培養(yǎng)基能促進(jìn)成纖維細(xì)胞α-SMA與VEGF-A穩(wěn)定的表達(dá)，二者在培養(yǎng)后第1天都開始表達(dá)，，第3天表達(dá)量達(dá)到峰值，第三天以后表達(dá)穩(wěn)定。 結(jié)論：當(dāng)腫瘤細(xì)胞上清液與2×DMEM:F12比例為1:1時(shí)，能有效促進(jìn)成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)并促使成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞穩(wěn)定的轉(zhuǎn)化。腫瘤細(xì)胞上清液能夠有效穩(wěn)定的激活成纖維細(xì)胞為肌成纖維細(xì)胞，成纖維細(xì)胞的激活程度影響VEGF-A的表達(dá)，二者均具有最佳的激活時(shí)間點(diǎn)，并且最佳時(shí)間點(diǎn)相一致，最佳激活點(diǎn)的成纖維細(xì)胞有望成為一種可用于移植的促進(jìn)血管重建的細(xì)胞。
【圖文】：

圖 1.1 不同濃度腫瘤細(xì)胞上清液培養(yǎng)成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)趨勢(shì)#同一時(shí)間不同濃度條件培養(yǎng)液培養(yǎng)成纖維細(xì)胞 P<0.05，*同一培養(yǎng)液相鄰時(shí)間點(diǎn)成纖維細(xì)胞 P<0.05Fig 1.1 Growth of Fibroblasts cultured by the different concentration of the su#indicated the group was compared with fibroblasts cultured by the differentthe supernatant under the same time,P<0.05.*indicated the group was compared with fibroblasts cultured by the same mdifferent time.,P<0.05.2.2 流式細(xì)胞儀檢測(cè)成纖維細(xì)胞的凋亡隨著腫瘤細(xì)胞上清液濃度的不斷提高，成纖維細(xì)胞的凋亡率也隨與 1:1 濃度的條件培養(yǎng)液培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞的凋亡率比較無差異（P濃度的條件培養(yǎng)液培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞的凋亡率與無血清的 DMEN:F的成纖維細(xì)胞的凋亡率比較無差異（P=0.221）。其余各組間均（P<0.05）見圖 1.2。

圖 1.2 腫瘤細(xì)胞上清液對(duì)成纖維細(xì)胞凋亡的影響a)代表各組生長(zhǎng)于高峰期的成纖維細(xì)胞 Annexin V-FITC/PI 雙染的流式檢測(cè)結(jié)果（性；A2：Annexin V-FITC、PI 陽性；A3：Annexin V-FITC、PI 陰性；A4：Ann陽性）。b)代表各組總體凋亡率的數(shù)據(jù)分析。數(shù)據(jù)代表均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差。1 為普通培成纖維細(xì)胞，2~5 為腫瘤細(xì)胞上清液與 2×DMEM:F12 比例分別為 0.5:1、1:1、1成的條件培養(yǎng)液培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞，6 為完全腫瘤細(xì)胞上清液培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞。凋亡率與 1 比較 P<0.05；#代表各組凋亡率與 2 或 3 比較 P<0.05。Fig 1.2 Effect of tumor cells supernatant on fibroblasts apoptosisa) :Fibroblasts dyed with Annexin V-FITC/PI(A1:PI positive;A2:PI and Annepositive; A3: PI and Annexin V-FITC negative; A4: Annexin V-FITC positive). b)data in A4. Lane 1 was apoptosis rate of the fibroblasts cultured by the normal m2~5 were apoptosis rate of the fibroblasts cultured by the different concentrsupernatant, the respectively concentration was 0.5:1, 1:1, 1.5:1, 2:1. Lane 6 was apof the fibroblasts cultured by the complete supernatant. Values represent m*indicated the group was compared with 1,P<0.05;#indicated the group was comor 3,P<0.05.2.3 RT-PCR檢測(cè)α-SMA與TGF-β1的表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R329.21

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 劉愛軍;靳俊峰;;人皮膚成纖維細(xì)胞的高效分離培養(yǎng)及鑒定[J];廣東醫(yī)學(xué);2008年12期

本文編號(hào)：2554958