發(fā)布時間：2017-03-19 03:09

  本文關鍵詞：應用兩種生物模式探討抗VEGF單克隆抗體BD0801的抗血管生成作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：應用兩種生物模式探討人源化抗VEGF單克隆抗體BD0801單藥或聯(lián)合細胞毒藥物的抗血管生成作用,并初步探討其機制。方法：1、BD0801單藥實驗：斑馬魚實驗：采用24hpf(hours post fertilization, hpf,受精后小時)健康血管熒光轉基因斑馬魚胚胎實驗動物模型,脫去外膜后隨機分組：BD0801低濃度組,BD0801中濃度組,BD0801高濃度組；貝伐珠單抗(Bev)低濃度組,Bev中濃度組,Bev高濃度組；魚水對照組(陰性對照組)。加入藥物與胚胎共同孵育48小時后在熒光顯微鏡下觀察背部節(jié)間血管(intersegmental vessels, ISV)生成數目,采用實時定量RT-PCR檢測各組胚胎VEGF mRNA的相對表達量。雞胚尿囊膜(CAM)實驗：采用九日齡雞胚作為實驗對象,隨機分為七組：BD0801低濃度組,BD0801中濃度組,BD0801高濃度組；貝伐珠單抗(Bev)低濃度組,Bev中濃度組,Bev高濃度組；生理鹽水對照組(陰性對照組)。暴露CAM后植入甲基纖維素碟,加入各組藥物,72小時后觀察血管生長情況,計算緊鄰甲基纖維素碟旁一個視野內的血管數目,并進行比較。2、BD0801聯(lián)合細胞毒藥物實驗：斑馬魚實驗：在單藥實驗取得陽性結果的基礎上,采用24hpf健康血管熒光轉基因斑馬魚胚胎作為實驗動物模型,脫去外膜后隨機分組：BD0801單藥處理組和BD0801聯(lián)合OXA處理組、BD0801聯(lián)合5-FU處理組；Bev單藥處理組(陽性對照組)和Bev聯(lián)合OXA處理組(陽性對照組)、Bev聯(lián)合5-FU處理組(陽性對照組)、OXA和5-FU單藥處理組(陽性對照組)、魚水對照組(陰性對照組)。加入藥物與胚胎共同孵育48小時后在熒光顯微鏡下觀察背部節(jié)間血管(intersegmental vessels, ISV)生成數目,采用實時定量RT-PCR檢測各組胚胎VEGF mRNA的相對表達量。雞胚尿囊膜(CAM)實驗：采用九日齡雞胚作為實驗對象,隨機分為七組BD0801單藥處理組和BD0801聯(lián)合OXA處理組、BD0801聯(lián)合5-FU處理組；Bev單藥處理組(陽性對照組)和Bev聯(lián)合OXA處理組(陽性對照組)、Bev聯(lián)合5-FU處理組(陽性對照組)、OXA和5-FU單藥處理組(陽性對照組)。暴露CAM后植入甲基纖維素碟,加入各組藥物,72小時后觀察血管生長情況,計算緊鄰甲基纖維素碟旁一個視野內的血管數目,并進行比較。結果：BD0801單藥實驗：1、與陰性對照組相比,BD0801能夠有效抑制斑馬魚胚胎ISV生成(P0.05),與陽性藥物Bev相比,BD0801抑制作用更強,抑制作用與藥物濃度呈正相關。RT-PCR檢測結果顯示：BD0801可以下調斑馬魚胚胎組織VEGF mRNA的水平(P0.05),與陽性對照組相比,下調作用更強,且與藥物濃度呈正相關。2、與陰性對照組相比,BD0801具有抑制CAM血管生長的作用(P0.05),與陽性藥物Bev相比,抑制作用更強,抑制作用與藥物濃度呈正相關。BD0801聯(lián)合細胞毒藥物實驗：1、與陰性對照組相比,BD0801單藥、Bev單藥、OXA單藥、5-FU單藥及各聯(lián)合用藥組能夠有效抑制斑馬魚胚胎ISV生成(P0.05),與單藥組相比,聯(lián)合用藥組抑制作用更強(P0.05)。且與Bev聯(lián)合用藥相比,BD0801聯(lián)合用藥對血管抑制程度更強(P0.05)。RT-PCR檢測結果顯示：BD0801單藥、Bev單藥、OXA單藥、5-FU單藥及各聯(lián)合用藥組VEGF基因mRNA的表達被下調,聯(lián)合用藥組的下調程度強于單藥組,且與Bev聯(lián)合用藥組相比,BD0801聯(lián)合用藥組VEGF基因mRNA的表達量更低。2、與陰性對照組相比,BD0801單藥、Bev單藥、OXA單藥、5-FU單藥及各聯(lián)合用藥組具有抑制CAM血管生長的作用(P0.05),與單藥組相比,聯(lián)合用藥組抑制作用更強(P0.05)。與Bev聯(lián)合用藥相比,BD0801聯(lián)合用藥抑制血管的作用更強(P0.05)。結論：BD0801能夠有效抑制斑馬魚及CAM模型的血管生成,且作用強于Bev,其作用機制可能與下調組織細胞VEGF mRNA的水平有關；BD0801聯(lián)合5-FU/OXA可協(xié)同抑制斑馬魚及CAM模型血管生成,其作用機制可能與協(xié)同下調組織細胞VEGF mRNA的水平有關。本研究提示,BD0801單藥或聯(lián)合5-FU/OXA可能通過靶向VEGF而有效抑制斑馬魚及CAM模型血管生成,值得進一步深入研究其臨床應用價值。
【關鍵詞】：BD0801 VEGF 斑馬魚 雞胚尿囊膜
【學位授予單位】：東南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R392
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 縮略詞表12-13
• 前言13-15
• 第一章 文獻綜述 索拉非尼聯(lián)合化療治療晚期肝細胞癌的臨床研究進展15-21
• 第二章 實驗材料21-24
• 2.1 動物21
• 2.2 主要試劑21-22
• 2.3 主要儀器22
• 2.4 主要試劑r>制22-24
• 第三章 BD0801單藥抗血管生成作用的研究24-32
• 3.1 實驗方法24-27
• 3.2 實驗結果27-32
• 第四章 BD0801聯(lián)合細胞毒藥物抗血管生成作用的研究32-41
• 4.1 實驗方法32-36
• 4.2 實驗結果36-41
• 第五章 討論41-44
• 第六章 結論44-45
• 參考文獻45-49
• 致謝49-50
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表論文50-51
• 個人簡介51

【相似文獻】

中國期刊全文數據庫 前10條

1 薛宏亮;張乃元;袁占鵬;;斑馬魚在神經毒理學研究中的應用[J];公共衛(wèi)生與預防醫(yī)學;2014年02期

2 ;學科前瞻[J];當代醫(yī)學;2003年12期

3 張立鳳;鐘濤;桂永浩;;外源性視黃酸對斑馬魚心血管系統(tǒng)發(fā)育的影響[J];中國實驗動物學報;2006年02期

4 楊寒朔;湯明海;鄧洪新;楊金亮;;納升超高效液相色譜-飛行時間質譜檢測斑馬魚胚胎中小分子多肽的初步研究[J];四川大學學報(醫(yī)學版);2007年06期

5 徐娟;吳南翔;;斑馬魚在環(huán)境內分泌干擾物篩選和檢測中的應用[J];國外醫(yī)學(衛(wèi)生學分冊);2009年04期

6 胡瑋;程露陽;宋韞韜;夏鴻飛;孫大光;李鵬;李丹;陸彩玲;馬旭;;硫代硫酸鈉干擾斑馬魚胚胎發(fā)育并致畸[J];中國生物化學與分子生物學報;2009年09期

7 何秋霞;劉可春;楚杰;王思鋒;韓利文;王希敏;;斑馬魚作為模式生物在心血管疾病研究中的應用[J];生命的化學;2009年05期

8 孫淑娜;桂永浩;蔣t，

本文編號：255443