【摘要】：神經(jīng)病理性痛（慢性）的產(chǎn)生機制一直是神經(jīng)科學研究面臨的一個挑戰(zhàn)。臨床上，通過單純抑制痛信號傳遞系統(tǒng)神經(jīng)元的興奮性，來治療慢性痛的藥物，療效差、副作用嚴重。這提示，痛感受器的感受功能和痛信號的傳遞功能發(fā)生了異常改變，但引起這種異常改變的因素和機制還不清楚。近年來，慢性痛研究的一個重要進展清楚地表明，神經(jīng)炎癥反應(yīng)是慢性痛產(chǎn)生和持續(xù)的重要因素。 外周神經(jīng)損傷、炎癥或脫髓鞘等病變引起神經(jīng)炎癥反應(yīng)，形成慢性痛，進而產(chǎn)生了許多促炎性細胞因子。趨化因子及其受體的表達在慢性疼痛的病理生理機制中起重要作用，其中，背根神經(jīng)節(jié)（dorsal root ganglia, DRG）神經(jīng)元上調(diào)表達的趨化因子單核細胞趨化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1, MCP-1or CCL2)，對外周痛感受器的感受功能具有增強作用，，因而被認為是一種新的致痛因子。然而，文獻報道和我們最近的工作都提示，CCL2對痛信號調(diào)節(jié)的主要作用點可能在脊髓水平。這可能是炎性疼痛長時間維持、反復(fù)發(fā)作的重要原因。 因此，本課題在以往研究的基礎(chǔ)上，通過研究CCL2對外周痛覺傳入纖維中樞末端與脊髓后角膠狀質(zhì)層(substantia gelatinosa, SG)神經(jīng)元之間興奮性和抑制性突觸傳遞的直接調(diào)節(jié)作用、調(diào)節(jié)機制，以及CCL2對這兩類突觸傳遞的影響在慢性痛維持中的作用進行深入的研究，明確DRG神經(jīng)元上調(diào)表達的CCL2能否作為神經(jīng)調(diào)質(zhì)對來自外周傳入的痛信號在脊髓的傳遞起放大作用，從而成為慢性痛中樞敏感化機制的因素之一。我們的研究不僅為神經(jīng)炎癥反應(yīng)是慢性痛發(fā)生和持續(xù)的重要機制的理論提供新的科學依據(jù)，也為在脊髓水平干擾CCL2/CCR2信號系統(tǒng)功能、尋找治療慢性痛的新途徑奠定基礎(chǔ)。 本課題主要工作包括： 一、CCL2在脊髓水平對CCD大鼠疼痛行為的易化作用 1．行為學實驗研究結(jié)果表明，鞘內(nèi)注射CCL2可增強CCD大鼠機械痛覺過敏反應(yīng)，鞘內(nèi)注射CCR2阻斷劑可以很大程度逆轉(zhuǎn)CCD大鼠機械痛覺過敏反應(yīng)。 二、CCL2增強CCD大鼠痛覺過敏反應(yīng)的形態(tài)學依據(jù) 1．免疫組織化學的方法顯示，CCD大鼠DRG神經(jīng)元上CCL2表達升高,并與痛覺神經(jīng)元標記物IB4共表達，脊髓后角CCL2及CCR2表達也均顯著升高。 2．Western blot技術(shù)研究結(jié)果表明，CCD大鼠脊髓后角CCR2蛋白表達增加。 三、CCL2對CCD大鼠脊髓后角痛信號傳遞的調(diào)節(jié)及其機制 1.脊髓片全細胞膜片鉗記錄結(jié)果表明，CCD大鼠較正常大鼠脊髓后角膠狀質(zhì)層神經(jīng)元自發(fā)興奮性突觸后電流（spontaneous EPSCs）的頻率明顯升高。 2.脊髓片全細胞膜片鉗記錄結(jié)果表明，CCD大鼠鞘內(nèi)注射CCR2特異性阻斷劑INCB3344可以減弱脊髓后角膠狀質(zhì)層神經(jīng)元間sEPSCs的頻率，對sEPSCs的幅度沒有顯著影響。 3.脊髓片全細胞膜片鉗記錄結(jié)果表明，CCR2阻斷劑INCB3344可以減弱CCD大鼠脊髓后角興奮性突觸傳遞。 4.脊髓片全細胞膜片鉗記錄結(jié)果表明，CCL2能增強CCD大鼠脊髓后角膠狀質(zhì)層神經(jīng)元自發(fā)興奮性突觸后電流（spontaneous EPSCs）并減弱自發(fā)抑制性突觸后電流(spontaneous IPSCs),進一步研究發(fā)現(xiàn)，CCL2的這一作用是通過增強AMPA和NMDA電流并抑制GABA電流實現(xiàn)的。 5.脊髓片全細胞膜片鉗記錄結(jié)果表明，CCL2可以增強CCD大鼠脊髓SG神經(jīng)元興奮性。 綜上所述，我們通過研究CCL2/CCR2信號系統(tǒng)對CCD大鼠脊髓后角膠狀質(zhì)層神經(jīng)元痛覺信號傳導(dǎo)的調(diào)節(jié)作用、調(diào)節(jié)機制，表明在慢性疼痛中，CCL2/CCR2信號系統(tǒng)通過增強CCD大鼠脊髓膠狀質(zhì)層神經(jīng)元興奮性突觸傳遞，減弱抑制性突觸傳遞，增強脊髓后角膠狀質(zhì)層神經(jīng)元興奮性，并可直接誘導(dǎo)產(chǎn)生疼痛行為，對來自外周傳入的痛信號在脊髓的傳遞起放大作用，從而成為慢性痛中樞敏感化機制的因素之一，在脊髓水平對慢性疼痛的長時間維持有一定的調(diào)節(jié)作用。
【圖文】：

型電熱毯上，避免大鼠因麻醉后體溫下降死亡。大鼠恢復(fù)知覺后送回動物房飼養(yǎng)。術(shù)后每天測量模型大鼠機械行為反應(yīng)。假手術(shù)組：手術(shù)方法相同但不留置鋼柱(圖 1)。圖1 背根神經(jīng)節(jié)壓迫模型示意Fig1. CCD model of pain

置共對每個克數(shù)的反應(yīng)率。使用 數(shù)，換算為毫牛（mN）表示的數(shù)CD 手術(shù)前前兩天，每天測一次大鼠鼠的機械痛閾，觀察其閾值有無下降過敏，模型建立成功。CD 5 天大鼠機械痛閾影響的實驗鼠鞘內(nèi)注射相同濃度、體積的 CCL4、6、8、24、48、72 小時為時間 CCR2 阻斷劑 INCB3344 對 CCD度的 CCR2 阻斷劑 INCB3344 后，，用上述測試方法以 0.25、0.5、1測量大鼠機械痛閾的變化。
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R363

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 萬業(yè)宏,王玉英,戴飛,胡三覺;可視膜片鉗法記錄初級傳入纖維介導(dǎo)的脊髓背角神經(jīng)元突觸后電流(英文)[J];生理學報;2004年04期

2 Robert H.LaMotte;;Hyperexcitable neurons and altered non-neuronal cells in the compressed spinal ganglion[J];生理學報;2008年05期

本文編號：2549341