【摘要】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)是骨髓內(nèi)除造血干細(xì)胞外另一種多分化干細(xì)胞,因其具有向骨、脂肪、肌腱、神經(jīng)細(xì)胞分化等多向分化能力,并且具有低免疫原性等特點(diǎn),是近年的研究熱點(diǎn)。傳統(tǒng)培養(yǎng)方法是培養(yǎng)2-3天后棄掉未貼壁細(xì)胞,繼續(xù)培養(yǎng)得到高粘附的BMSCs。上世紀(jì)90年代Clarke等在發(fā)現(xiàn)長期骨髓培養(yǎng)體系中發(fā)現(xiàn)存在非粘附貼壁并可形成集落的細(xì)胞,且細(xì)胞形態(tài)及表型特征與粘附MSCs相似,他們認(rèn)為骨髓中可能存在著比MSCs更原始的基質(zhì)干細(xì)胞。隨后相繼有許多研究也發(fā)現(xiàn)骨髓中非粘附干細(xì)胞的存在,Scutt A等發(fā)現(xiàn)前列腺素E2、forskolin及雙丁酰環(huán)磷腺苷可誘導(dǎo)NA-MSCs向MSCs的轉(zhuǎn)化,并且NA-MSCs在造血重建中起著一定作用。Zhang ZL等將正常基因來源的NA-MSCs輸入受致死劑量輻照的VDR基因敲除的小鼠時(shí)發(fā)現(xiàn)輸入NA-MSCs的小鼠血象很快恢復(fù)并可以存活,并且VDR基因在不同的組織中都有表達(dá),表明NA-MSCs具有很強(qiáng)的組織修復(fù)能力。近兩年來Fricke S等利用轉(zhuǎn)基因小鼠模型研究發(fā)現(xiàn)NA-MSCs移植較單純骨髓移植具有更迅速的造血修復(fù)能力;他們又對(duì)NA-BMSCs的基本性質(zhì)做了初步研究,認(rèn)為小鼠NA-MSCs可能是一個(gè)能夠表達(dá)多種基質(zhì)細(xì)胞表型并能夠促進(jìn)造血重建的混合的細(xì)胞群體,其成纖維細(xì)胞集落能力較MSCs弱,但仍能形成CFU-F,基因表達(dá)分析顯示NA-BMSCs包含基質(zhì)、間充質(zhì)、內(nèi)皮細(xì)胞及單核細(xì)胞表達(dá),但類骨質(zhì)、淋巴系、紅細(xì)胞系及造血干細(xì)胞系表達(dá)量較低,將其移植入亞劑量致死量的小鼠后其組織病理結(jié)果分析顯示其促進(jìn)造血及器官組織修復(fù)能力遠(yuǎn)遠(yuǎn)較間充質(zhì)干細(xì)胞強(qiáng)。 鑒于此,我們?cè)谝陨涎芯康幕A(chǔ)上,著重研究了胎源性非粘附骨髓基質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)及其基本性質(zhì),并研究其細(xì)胞因子的表達(dá)情況,并將其與普通方法培養(yǎng)的間充質(zhì)干細(xì)胞做一比較,以更好的研究非粘附基質(zhì)細(xì)胞的特性。 目的:探討胎源性非粘附骨髓基質(zhì)細(xì)胞(non-adherent bone marrow stromal cell,NA-BMSCs)的分離及基本特性。方法:采用反復(fù)貼壁分離的方法培養(yǎng)胎源性NA-BMSCs,每24h取懸浮細(xì)胞分瓶培養(yǎng),共4次;采用MTT法測定第1、3、5代(P1,3,5)細(xì)胞的生長曲線,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期和表面標(biāo)志;并取P1細(xì)胞行體外造血集落培養(yǎng),P3細(xì)胞成骨和成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)。結(jié)果:經(jīng)反復(fù)貼壁分離4次后所獲細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)7天后即可得到原代NA-BMSCs。NA-BMSCs細(xì)胞形態(tài)不均勻,高表達(dá)整合素及內(nèi)皮細(xì)胞表面標(biāo)記(均95%以上),中等量表達(dá)CD106(69%),同時(shí)也表達(dá)造血細(xì)胞標(biāo)記CD34;體外具多向分化能力,可分化為成骨細(xì)胞及造血細(xì)胞,但成脂分化能力較弱。結(jié)論:經(jīng)反復(fù)轉(zhuǎn)移培養(yǎng)可以培養(yǎng)出胎源性NA-BMSCs,此類細(xì)胞可能是造血細(xì)胞及間充質(zhì)干細(xì)胞的共同祖細(xì)胞。 目的:探討胎源性非粘附骨髓基質(zhì)細(xì)胞(NA-BMSCs)造血相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)情況。方法:采用熒光定量RT-PCR的方法檢測胎源性NA-BMSCs第1代細(xì)胞因子TPO、EPO、G-CSF、GM-CSF、IL-3、IL-6、IL-11、SCF、FLT-3ligand mRNA的表達(dá)情況并與常規(guī)培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)做一比較。結(jié)果:與MSCs相似,NA-BMSCs表達(dá)G-CSF、GM-CSF、IL-6、IL-11、SCF、FLT-3ligand及TPO,且NA-BMSCs SCF及TPO的表達(dá)量明顯高于MSCs,但NA-BMSCs不表達(dá)EPO及IL-3。結(jié)論:NA-BMSCs細(xì)胞因子的表達(dá)與常規(guī)培養(yǎng)的MSCs表達(dá)的造血相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)相當(dāng),但其干細(xì)胞因子表達(dá)更多,可能NA-BMSCs較MSCs更為原始有關(guān)。
【圖文】：

NA-BMSCs 在成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)三經(jīng)油紅 O 染色可染為紅色，，表明其具；與眾不同的是NA-BMSCs在體外造 rhIL-3 激發(fā)后可形成造血細(xì)胞集落增殖分化能力。 third passage of NA-BMSCs in Wright ' s s1 NA-MSCs 傳到第 3 代后瑞士染色。（×1

數(shù)為靜止期細(xì)胞 細(xì)胞周期分析提示傳代次數(shù)增多，部分細(xì)胞進(jìn)入增殖表明其多數(shù)處于靜止?fàn)顟B(tài)，可能更為體外生長提示，接種后的潛伏期約為，詳見圖 7。FCM 測 P10 NA-BMS多向分化潛能 體外誘導(dǎo)分化顯示 高折光礦物質(zhì)形成，經(jīng) Von Kossa 染 NA-BMSCs 在成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)三經(jīng)油紅 O 染色可染為紅色，表明其具；與眾不同的是NA-BMSCs在體外造 rhIL-3 激發(fā)后可形成造血細(xì)胞集落增殖分化能力。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R329

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本文編號(hào)：2537277