【摘要】：目的采用斑馬魚模型探究補骨脂提取物對肝臟的毒性作用。方法根據(jù)斑馬魚幼魚在不同濃度的補骨脂水提物和醇提物中的存活數(shù)和死亡數(shù),計算出幼魚死亡率初步評估補骨脂水提物和醇提物的毒性大小。藥浴后的斑馬魚幼魚進行組織勻漿,通過生化儀測定谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT),谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和乳酸脫氫酶(LDH)的酶活。斑馬魚成魚給藥24h后冰浴處死,進行HE染色觀察肝臟病理變化。采用qPCR和Western Blot法檢測成魚肝臟中固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c(SREBP-1c),脂肪酸合成酶(FAS),乙酰輔酶A羧化酶(ACC1)以及微粒體甘油三脂轉(zhuǎn)移蛋白(MTP)的mRNA表達和蛋白表達。結(jié)果與正常組相比,補骨脂藥浴組的斑馬魚幼魚在2dpf時出現(xiàn)死亡。并且補骨脂對幼魚的毒性具有一定的濃度依賴性。相同濃度下,醇提`物的毒性大于水提物。HE染色結(jié)果可觀察到補骨脂醇提和水提給藥組的成魚中肝臟發(fā)生脂變,同時給藥組的斑馬魚幼魚勻漿組織液中ALT,AST和LDH含量明顯高于空白組。通過qPCR實驗發(fā)現(xiàn),補骨脂水提物和醇提物給藥組的斑馬魚肝臟中SREBP-1c,FAS,ACC1的表達升高,MTP的表達降低。Western Blot檢測結(jié)果與qPCR結(jié)果一致。結(jié)論濃度為300μg/mL和600μg/mL的補骨脂水提物和濃度為40μg/mL和80μg/mL的補骨脂醇提物藥浴給藥48h會導(dǎo)致斑馬魚的肝臟產(chǎn)生病變,甚至死亡,且機制可能與肝脂變有關(guān)。
【圖文】：

量和內(nèi)參照ＧＡＰＤＨ的比值作為相對表達量。３結(jié)果３．１水提液和醇提液對斑馬魚幼魚死亡率的影響結(jié)果表明，斑馬魚的死亡率與補骨脂的給藥濃度存在一定的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)不管是水提物還是醇提物，隨著給藥濃度的提高，斑馬魚幼魚的死亡率呈現(xiàn)上升趨勢。４０μｇ／ｍＬ的醇提物和２００μｇ／ｍＬ的水提物對斑馬魚幼魚的影響較小，８０μｇ／ｍＬ的醇提物和６００μｇ／ｍＬ的水提物培養(yǎng)的斑馬魚幼魚在４ｄｐｆ時發(fā)生明顯的死亡。不同天數(shù)的斑馬魚幼魚死亡率如圖１所示。圖１不同濃度補骨脂醇提液（ａ）和水提液（ｂ）對斑馬魚死亡率的影響３．２水提液和醇提液對斑馬魚幼魚生化指標的影響水提物和醇提物給藥后，斑馬魚幼魚體內(nèi)ＡＬＴ、ＡＳＴ和ＬＤＨ含量與對照組相比顯著升高（Ｐ＜０．０５），如表２所示。ＡＬＴ和ＡＳＴ主要分布在肝細胞內(nèi)。當肝細胞受到損傷時，肝細胞的完整性被破壞，轉(zhuǎn)氨酶沒釋放入血。從而引起血漿內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶的濃度升高，因此轉(zhuǎn)氨酶的升高是肝細胞受損傷的一個特征。ＬＤＨ是體內(nèi)能量代謝過程中一個比較重要的酶，當肝細胞受到損傷時，細胞膜受到損害，ＬＤＨ的漏出率就會升高［６－７］�！玻叮祬呛�，等：基于斑馬魚模型研究補骨脂肝損傷效應(yīng)及作用機制初探—第３期

量和內(nèi)參照ＧＡＰＤＨ的比值作為相對表達量。３結(jié)果３．１水提液和醇提液對斑馬魚幼魚死亡率的影響結(jié)果表明，斑馬魚的死亡率與補骨脂的給藥濃度存在一定的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)不管是水提物還是醇提物，隨著給藥濃度的提高，斑馬魚幼魚的死亡率呈現(xiàn)上升趨勢。４０μｇ／ｍＬ的醇提物和２００μｇ／ｍＬ的水提物對斑馬魚幼魚的影響較小，８０μｇ／ｍＬ的醇提物和６００μｇ／ｍＬ的水提物培養(yǎng)的斑馬魚幼魚在４ｄｐｆ時發(fā)生明顯的死亡。不同天數(shù)的斑馬魚幼魚死亡率如圖１所示。圖１不同濃度補骨脂醇提液（ａ）和水提液（ｂ）對斑馬魚死亡率的影響３．２水提液和醇提液對斑馬魚幼魚生化指標的影響水提物和醇提物給藥后，斑馬魚幼魚體內(nèi)ＡＬＴ、ＡＳＴ和ＬＤＨ含量與對照組相比顯著升高（Ｐ＜０．０５），如表２所示。ＡＬＴ和ＡＳＴ主要分布在肝細胞內(nèi)。當肝細胞受到損傷時，肝細胞的完整性被破壞，轉(zhuǎn)氨酶沒釋放入血。從而引起血漿內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶的濃度升高，因此轉(zhuǎn)氨酶的升高是肝細胞受損傷的一個特征。ＬＤＨ是體內(nèi)能量代謝過程中一個比較重要的酶，當肝細胞受到損傷時，細胞膜受到損害，ＬＤＨ的漏出率就會升高［６－７］�！玻叮祬呛�，，等：基于斑馬魚模型研究補骨脂肝損傷效應(yīng)及作用機制初探—第３期
【作者單位】： 安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院;江蘇省中醫(yī)藥研究院國家中醫(yī)藥管理局中藥釋藥系統(tǒng)重點研究室;
【基金】：國家中醫(yī)藥管理局公益性行業(yè)科研專項(201507004-10)
【分類號】：R285.5;R-332

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本文編號：2533767