【摘要】：目的:構(gòu)建miRNA的慢病毒表達載體,使其在原代培養(yǎng)的大鼠胚胎大腦皮層神經(jīng)細(xì)胞中穩(wěn)定表達。方法:將該干擾片段構(gòu)建入慢病毒載體(pL KD-Ubc-eG FP-U6-shRNA)的U6啟動子下游,該載體可以實現(xiàn)在干擾小片段RNA的同時表達綠色熒光蛋白EGFP基因,便于觀察載體工作狀態(tài)。通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)的大鼠胚胎大腦皮層神經(jīng)細(xì)胞,觀察轉(zhuǎn)染的原代培養(yǎng)的大鼠胚胎大腦皮層神經(jīng)細(xì)胞的形態(tài)及表達情況。結(jié)果:針對篩選的miRNA構(gòu)建的慢病毒載體,經(jīng)過DNA測序結(jié)果和瓊脂糖凝膠電泳鑒定成功構(gòu)建了篩選的miRNA的慢病毒表達載體,重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)的大鼠胚胎大腦皮層神經(jīng)細(xì)胞,經(jīng)24 h后在熒光倒置顯微鏡下可以觀察到部分細(xì)胞帶有綠色熒光,篩選的miRNA構(gòu)建的慢病毒載體在原代培養(yǎng)的大鼠胚胎大腦皮層神經(jīng)細(xì)胞中穩(wěn)定表達。結(jié)論:篩選的miRNA的慢病毒表達載體構(gòu)建成功,并穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染到原代培養(yǎng)的大鼠胚胎大腦皮層神經(jīng)細(xì)胞中,為miRNA對神經(jīng)細(xì)胞存活功能的研究提供了平臺。
【作者單位】： 新疆醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;新疆醫(yī)科大學(xué)中心實驗室;新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81460359)
【分類號】：R321

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本文編號：2531559