【摘要】：目的：探討骨形態(tài)發(fā)生蛋白-4對大鼠原位肝干細(xì)胞,即肝卵圓細(xì)胞HOC的增殖及分化的影響。 方法：采用重組因子BMP4及重組腺病毒BMP4作用于大鼠HOC,以BMP-4拮抗劑重組因子Noggin及重組腺病毒BMP4-shRNA阻斷BMP-4的作用以便實驗對照,另外還設(shè)有空腺病毒組及未處理組作為試驗對照。在實驗不同時間點,通過四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法檢測BMP-4對HOC增殖的影響,透射電鏡下觀察細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)特征,RT-PCR檢測各試驗組中不同HOC可能分化后細(xì)胞表型特異性分子標(biāo)志物的mRNA表達(dá)情況,以過碘酸雪夫反應(yīng)(PAS)檢測細(xì)胞的糖原的合成與儲積情況,并通過吲哚氰綠(ICG)攝取排泌試驗檢測細(xì)胞的代謝功能。 結(jié)果：細(xì)胞增殖實驗顯示,在不同作用時間點,BMP-4干預(yù)組的細(xì)胞吸光值均高于抑制劑處理組和空白對照組。透射電鏡下可觀察到BMP-4干預(yù)后的HOC具有分化良好的上皮細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)特征。RT-PCR顯示BMP-4誘導(dǎo)HOC分化后,肝細(xì)胞特異性分子標(biāo)志物的mRNA得到顯著表達(dá)。PAS與ICG檢測顯示經(jīng)BMP-4誘導(dǎo)分化的HOC具備正常肝細(xì)胞的糖原合成與吲哚氰綠攝取及代謝功能。 結(jié)論：BMP-4可促進(jìn)大鼠肝干細(xì)胞HOC的增殖,并誘導(dǎo)其向肝細(xì)胞表型定向分化,且經(jīng)BMP-4誘導(dǎo)分化的HOC具備正常肝細(xì)胞的糖原合成與吲哚氰綠攝取及代謝功能。
【圖文】：

部分:肝卵圓細(xì)

用透射電鏡觀察其超微結(jié)構(gòu)，圖2顯示:圖(b)重組因子BMP4組、圖(e)B人4P4腺病毒組干預(yù)誘導(dǎo)后的細(xì)胞胞漿極為豐富，核漿比例較小，，胞漿中可見大量的線粒體、溶酶體、高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、糖原顆粒以及囊泡結(jié)構(gòu);細(xì)胞表面可見微絨毛;相鄰細(xì)胞間連接形成好，連接復(fù)合體形成，可見緊密連接與縫隙連接;這些均是分化良好的上皮細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)特征，表明該細(xì)胞向上皮細(xì)胞分化的趨勢。而圖(a)陰性對照組、圖(c)未干預(yù)組、圖(d)空腺病毒組、圖(f)BMP4一shRNA腺病毒組則胞漿不豐富，細(xì)胞器相對少，胞核比例相對大，細(xì)胞間連接形成差，表明細(xì)胞分化程度低。通過對比研究，充分表明BMP一4可誘導(dǎo)肝卵圓細(xì)胞向上皮細(xì)胞分化。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R329

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