【摘要】：目的觀察大鼠雪旺細(xì)胞系RSC96細(xì)胞條件培養(yǎng)液(RSC96-CM)對(duì)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞(OPCs)增殖的影響,探討其作用機(jī)制。方法應(yīng)用免疫粘附法從胚胎15d的SD大鼠脊髓分離OPCs,應(yīng)用Brd U摻入實(shí)驗(yàn)檢測(cè)OPCs的增殖,應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)PDGF-AA和bFGF在RSC96細(xì)胞的表達(dá),應(yīng)用ELISA技術(shù)檢測(cè)RSC96-CM中PDGF-AA和bFGF蛋白的濃度,以特異性抑制劑阻斷觀察PDGF-AA和bFGF在RSC96-CM誘導(dǎo)OPCs增殖中的作用,以特異性抑制劑觀察ERK和JNK信號(hào)途徑在RSC96-CM誘導(dǎo)OPCs增殖中的作用。結(jié)果不同濃度的RSC96-CM培養(yǎng)的OPCs,其BrdU+細(xì)胞的比例與對(duì)照組相比均顯著增加(P0.05),其中,在含50%RSC96-CM的培養(yǎng)液中培養(yǎng)的OPCs的BrdU+細(xì)胞的比例達(dá)高峰。RT-PCR證實(shí)RSC96細(xì)胞顯著表達(dá)PDGF-AA和bFGF的mRNAs,ELISA結(jié)果發(fā)現(xiàn),RSC96-CM中PDGF-AA和bFGF的蛋白濃度分別是我們前期報(bào)道的B104CM中PDGF-AA和bFGF的蛋白水平的0.87倍和0.92倍。PDGFR的特異性抑制劑AG1295和bFGFR特異性抑制劑PD173074均顯著降低RSC96-CM誘導(dǎo)的OPCs增殖;此外,Erk1/2特異性抑制劑U0126和JNK特異性抑制SP600125的預(yù)孵也顯著降低RSC96-CM誘導(dǎo)的BrdU+OPCs的比例(P0.01)。結(jié)論 RSC96-CM顯著誘導(dǎo)OPCs的增殖,其通過RSC96分泌的PDGF-AA和bFGF激活Erk1/2和JNK信號(hào)途徑而發(fā)揮作用;RSC96-CM也可以作為OPCs常規(guī)培養(yǎng)的擴(kuò)增劑。
【圖文】：

牡鞍著ǘ確直鶇?到20.42±3.88ng/mL和11.94±2.85ng/mL，分別是我們前期報(bào)道的B104CM中PDGF-AA和bFGF的蛋白水平的0.87倍和0.92倍（圖3B）。2.4PDGF-AA和bFGF是介導(dǎo)RSC96-CM誘導(dǎo)的OPCs增殖的關(guān)鍵因子為鑒定是否PDGF-AA和bFGF是介導(dǎo)RSC96-CM誘導(dǎo)的OPCs增殖的關(guān)鍵因子，我們觀察了PDGFR信號(hào)的特異性抑制劑AG1295和bFGFR特異性抑制劑PD173074能否阻斷或降低RSC96-CM誘導(dǎo)的OPCs增殖。結(jié)果表明，AG1295和PD173074均顯著降低RSC96-CM誘導(dǎo)的OPCs增殖，，BrdU+細(xì)胞的比例從89.05±5.76%（圖4B）分別減低到40.59±4.29%（圖圖1OPCs的形態(tài)學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定Fig.1MorphologicalandimmunocytochemicalcharacteristicsofOPCs.A:Phase-contrastphotomicrographofOPCsculturedingrowthmedium;B:CellsthatwereimmunopositiveforA2B5(green);C：CellsthatwereimmunopositiveforNG2(Red);D:WhenculturedinFBS-freedifferentiationmediumfor5days,OPCsdifferentiatedintoRip-positiveoligodendrocytes(green);E:Whenculturedindifferentiationmediumcontaining10%FBSfor5days,OPCsdifferentiatedintoGFAP-positivetypeIIastrocytes(green);CellsinB-EwerecounterstainedwithHoechst33342(blue).Scalebar=25μm.A2B5RipGFAPABCNG2DE10%RSC96-CM30%RSC96-CM50%RSC96-CM100%RSC96-CMCtrl1009080706050403020100%(A2B5+BrdU+)/A2B5+celsCtrl100%RSC96-CM30%RSC96-CM50%RSC96-CM10%RSC96-CMA2B5/BrdU*********圖2RSC96-CM誘導(dǎo)OPCs的增殖Fig.2RSC96-CMpromotestheproliferationofculturedOPCsinvitro.A-E:Brdu-positiveOPCswh

RSC96-CM誘導(dǎo)OPCs的增殖Fig.2RSC96-CMpromotestheproliferationofculturedOPCsinvitro.A-E:Brdu-positiveOPCswhenthecellswereculturedfor3daysincontrol(A),10%(B),30%(C),50%(D)and100%(E)
【作者單位】： 蚌埠醫(yī)學(xué)院組織學(xué)與胚胎學(xué)教研室;蚌埠醫(yī)學(xué)院組織移植安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81471277) 安徽省高等學(xué)校自然科學(xué)研究重點(diǎn)項(xiàng)目(KJ2016A869,KJ2017A232) 安徽省高等學(xué)校自然科學(xué)研究一般項(xiàng)目(KJ2015B049by)~~
【分類號(hào)】：R329.2

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本文編號(hào)：2528782