【摘要】：目的觀察大鼠雪旺細胞系RSC96細胞條件培養(yǎng)液(RSC96-CM)對少突膠質前體細胞(OPCs)增殖的影響,探討其作用機制。方法應用免疫粘附法從胚胎15d的SD大鼠脊髓分離OPCs,應用Brd U摻入實驗檢測OPCs的增殖,應用RT-PCR技術檢測PDGF-AA和bFGF在RSC96細胞的表達,應用ELISA技術檢測RSC96-CM中PDGF-AA和bFGF蛋白的濃度,以特異性抑制劑阻斷觀察PDGF-AA和bFGF在RSC96-CM誘導OPCs增殖中的作用,以特異性抑制劑觀察ERK和JNK信號途徑在RSC96-CM誘導OPCs增殖中的作用。結果不同濃度的RSC96-CM培養(yǎng)的OPCs,其BrdU+細胞的比例與對照組相比均顯著增加(P0.05),其中,在含50%RSC96-CM的培養(yǎng)液中培養(yǎng)的OPCs的BrdU+細胞的比例達高峰。RT-PCR證實RSC96細胞顯著表達PDGF-AA和bFGF的mRNAs,ELISA結果發(fā)現(xiàn),RSC96-CM中PDGF-AA和bFGF的蛋白濃度分別是我們前期報道的B104CM中PDGF-AA和bFGF的蛋白水平的0.87倍和0.92倍。PDGFR的特異性抑制劑AG1295和bFGFR特異性抑制劑PD173074均顯著降低RSC96-CM誘導的OPCs增殖;此外,Erk1/2特異性抑制劑U0126和JNK特異性抑制SP600125的預孵也顯著降低RSC96-CM誘導的BrdU+OPCs的比例(P0.01)。結論 RSC96-CM顯著誘導OPCs的增殖,其通過RSC96分泌的PDGF-AA和bFGF激活Erk1/2和JNK信號途徑而發(fā)揮作用;RSC96-CM也可以作為OPCs常規(guī)培養(yǎng)的擴增劑。
【圖文】：

牡鞍著ǘ確直鶇?到20.42±3.88ng/mL和11.94±2.85ng/mL，分別是我們前期報道的B104CM中PDGF-AA和bFGF的蛋白水平的0.87倍和0.92倍（圖3B）。2.4PDGF-AA和bFGF是介導RSC96-CM誘導的OPCs增殖的關鍵因子為鑒定是否PDGF-AA和bFGF是介導RSC96-CM誘導的OPCs增殖的關鍵因子，我們觀察了PDGFR信號的特異性抑制劑AG1295和bFGFR特異性抑制劑PD173074能否阻斷或降低RSC96-CM誘導的OPCs增殖。結果表明，AG1295和PD173074均顯著降低RSC96-CM誘導的OPCs增殖，，BrdU+細胞的比例從89.05±5.76%（圖4B）分別減低到40.59±4.29%（圖圖1OPCs的形態(tài)學和免疫細胞化學鑒定Fig.1MorphologicalandimmunocytochemicalcharacteristicsofOPCs.A:Phase-contrastphotomicrographofOPCsculturedingrowthmedium;B:CellsthatwereimmunopositiveforA2B5(green);C：CellsthatwereimmunopositiveforNG2(Red);D:WhenculturedinFBS-freedifferentiationmediumfor5days,OPCsdifferentiatedintoRip-positiveoligodendrocytes(green);E:Whenculturedindifferentiationmediumcontaining10%FBSfor5days,OPCsdifferentiatedintoGFAP-positivetypeIIastrocytes(green);CellsinB-EwerecounterstainedwithHoechst33342(blue).Scalebar=25μm.A2B5RipGFAPABCNG2DE10%RSC96-CM30%RSC96-CM50%RSC96-CM100%RSC96-CMCtrl1009080706050403020100%(A2B5+BrdU+)/A2B5+celsCtrl100%RSC96-CM30%RSC96-CM50%RSC96-CM10%RSC96-CMA2B5/BrdU*********圖2RSC96-CM誘導OPCs的增殖Fig.2RSC96-CMpromotestheproliferationofculturedOPCsinvitro.A-E:Brdu-positiveOPCswh

RSC96-CM誘導OPCs的增殖Fig.2RSC96-CMpromotestheproliferationofculturedOPCsinvitro.A-E:Brdu-positiveOPCswhenthecellswereculturedfor3daysincontrol(A),10%(B),30%(C),50%(D)and100%(E)
【作者單位】： 蚌埠醫(yī)學院組織學與胚胎學教研室;蚌埠醫(yī)學院組織移植安徽省重點實驗室;蚌埠醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院檢驗科;
【基金】：國家自然科學基金(81471277) 安徽省高等學校自然科學研究重點項目(KJ2016A869,KJ2017A232) 安徽省高等學校自然科學研究一般項目(KJ2015B049by)~~
【分類號】：R329.2

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