【摘要】：研究背景與目的糖尿病(DM)是繼惡性腫瘤、心腦血管疾病后的第三大非傳染性疾病，目前在人群中的發(fā)病率呈逐年上升趨勢，嚴(yán)重危害著人們的健康與生命。PKB是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，以往的研究表明，它參與機體調(diào)節(jié)糖、脂代謝，促進(jìn)細(xì)胞生存，抑制細(xì)胞凋亡等過程。本論文擬采用高糖高脂和聯(lián)合注射STZ的方法建立版納微型豬糖尿病模型，在此基礎(chǔ)上，觀察肝臟、腎臟、骨骼肌等組織病變與細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變。研究PKBmRNA在肝臟、腎臟、骨骼肌等組織中的表達(dá)，PKB與p-PKB~(Ser473)蛋白在這些組織中的表達(dá)，探討PKB在糖代謝紊亂與胰島素抵抗中的作用，為PKB在糖尿病發(fā)生、發(fā)展中的作用機制提供參考依據(jù)。 方法8只雄性版納微型豬按體重隨機區(qū)組設(shè)計分為2組：正常對照組，喂基礎(chǔ)豬飼料(control diet， CD)；高糖高脂組，喂高糖高脂飼料(high-sucrose/high-fat diet，HSFD，包含10%的豬油，37%的蔗糖，53%的基礎(chǔ)豬飼料),其中高糖高脂組喂養(yǎng)一周后腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)，劑量為50mg/Kg，第7個月末，靜脈注射STZ，劑量為50mg/Kg，連續(xù)注射3次(每天一次)，整個建模時間持續(xù)12個月。每個月末采集空腹血樣，檢測葡萄糖(fasting plasma glucose，F(xiàn)PG)、胰島素(fasting plasma insulin，F(xiàn)INS)、總膽固醇(total cholesterol，TC)、甘油三酯(triglyceride，TG)。建模期最后一個月末，進(jìn)行靜脈糖耐量試驗(IVGTT)和胰島素敏感性實驗，計算糖耐量指數(shù)和胰島素敏感性指數(shù)。建模結(jié)束后處死動物，觀察胰腺、肝臟、腎臟、骨骼肌等組織的大體形態(tài)，HE染色觀察胰腺、肝臟、腎臟、骨骼肌等組織的顯微結(jié)構(gòu)，透射電鏡觀察胰腺、肝臟、腎臟等細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)。實時熒光定量PCR檢測肝臟、腎臟、骨骼肌等組織的PKB mRNA表達(dá)，免疫組織化學(xué)檢測PKB和p-PKB~(Ser473)在肝臟、腎臟、骨骼肌等組織中的定位及相對表達(dá)量，western blot檢測PKB和p-PKB~(Ser473)在胰腺、肝臟、腎臟、骨骼肌等組織中的表達(dá)，TUNEL法檢測腎臟組織細(xì)胞凋亡的情況。 結(jié)果高糖高脂喂養(yǎng)和聯(lián)合注射STZ成功建立版納微型豬糖尿病模型，同時伴隨有胰腺、肝臟、腎臟、骨骼肌、脂肪等組織病變。肝臟和腎臟組織的PKBmRNA的表達(dá)量相對升高，骨骼肌組織PKB mRNA相對降低；在這些病變組織中總的PKB蛋白水平HSFD組略高于CD組，兩組比較不具有顯著性意義(P0.05)；而p-PKB~(Ser473)蛋白表達(dá)水平HSFD組明顯低于CD組，兩組比較差異具有顯著性意義(P0.05)。 結(jié)論高糖高脂喂養(yǎng)和聯(lián)合注射STZ成功建立版納微型豬糖尿病模型。在版納微型豬糖尿病模型中，PKBmRNA在肝臟組織和腎臟組織表達(dá)顯著上調(diào)，在骨骼肌組織表達(dá)顯著下調(diào)。總PKB蛋白的表達(dá)兩組未見顯著性差異，p-PKB~(Ser473)表達(dá)顯著下調(diào)。
【圖文】：

1.1 版納微型豬糖尿病模型糖代謝紊亂如圖 1 所示，在基礎(chǔ)狀態(tài) (0 個月) 時，HSFD 組空腹血糖值為 4.62±0.1mmol/L，CD 組空腹血糖值為 4.6±0.17 mmol/L，兩組比較差異不具有顯著性意義(P>0.05)。從喂養(yǎng)高糖高脂飼料和第一次注射 STZ 開始，第 1 到第 4 個月，HSFD組空腹血糖值與 CD 組空腹血糖值比較，差異不具有顯著性意義 (P>0.05)。第 和第 7 個月，HSFD 組的空腹血糖值有升高的趨勢，與 CD 組空腹血糖值比較，差異具有顯著性意義 (P<0.05)，但不穩(wěn)定，第 6 個月時，兩組空腹血糖值比較，差異不具有顯著性意義 (P>0.05)。到第 7 個月末，第二次注射 STZ，第 8 個月時，HSFD 組空腹血糖值驟然升高為 19.28±2.24mmol/L，CD 組空腹血糖值為 4.75±0.2mmol/L，兩組比較，差異具有顯著性意義 (P<0.01)。從第 9 個月到 12 個月，HSFD 組血糖值緩慢上升，與 CD 組血糖值比較，差異均具有顯著性意義(P<0.01)建模期最后一個月血糖水平已達(dá)到 16.85±2.47 mmol/L，說明高糖高脂喂養(yǎng)和聯(lián)合注射 STZ 已誘導(dǎo)版納微型豬為高血糖。

顯著性意義 (P<0.01)。從第 5 個月到第 7 個月，HSFD 組血清胰島素值呈現(xiàn)上的趨勢，分別是 CD 組血清胰島素值的 1.18 倍，1.91 倍，1.47 倍。且第 6 個月HSFD 組空腹血清胰島素值顯著高于 CD 組血清胰島素值 (P<0.01)。第 7 個月末第二次注射 STZ。第 8 個月時，HSFD 組血清胰島素值下降，為 3.83±0.3mmol/LCD 組血清胰島素值為 8.43±0.48mmol/L，兩組比較，差異具有顯著性意義(P<0.01)。且從第 8 個月到 12 個月，HSFD 組血清胰島素值一直處于低水平的穩(wěn)狀態(tài)，，與 CD 組血清胰島素值比較，差異均具有顯著性意義 (P<0.01)，最后個月末 HSFD 組胰島素值達(dá)到 3.81±0.39 U/L，說明高糖高脂喂養(yǎng)和聯(lián)合注射 ST的方法使版納微型豬的胰島素水平缺陷。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R587.1;R-332

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