天堂国产午夜亚洲专区-少妇人妻综合久久蜜臀-国产成人户外露出视频在线-国产91传媒一区二区三区

重組Gax腺病毒對(duì)IGF-1干預(yù)大鼠脂肪細(xì)胞通道蛋白FAK,PYK2的影響

發(fā)布時(shí)間:2019-08-07 14:30
【摘要】:研究目的 脂肪組織不僅是儲(chǔ)能組織,脂肪細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子,與糖尿病,高血壓,動(dòng)脈粥樣硬化,炎癥反應(yīng)密切相關(guān),促進(jìn)心血管疾病的發(fā)生和發(fā)展。胰島素樣生長(zhǎng)因子-1(IGF-1)具有類胰島素樣作用,是生長(zhǎng)因子促進(jìn)因子,影響多種細(xì)胞的增殖,生長(zhǎng)及分化。同樣,IGF-1調(diào)控脂肪細(xì)胞的行為,影響脂肪細(xì)胞的細(xì)胞周期,在脂肪細(xì)胞增殖中作為必須的因子調(diào)控細(xì)胞周期G1期至S期。黏著斑激酶(FAK)調(diào)節(jié)多種細(xì)胞的生物學(xué)行為,與其家族成員一起作為細(xì)胞多條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的樞紐發(fā)揮重要作用。尤其是它們中的PYK2是調(diào)節(jié)細(xì)胞活性的中心。IGF-Ⅰ能加快細(xì)胞移動(dòng)、FAK磷酸化,并能激活PYK2調(diào)節(jié)細(xì)胞間的黏附。Gax基因具有抑制細(xì)胞遷移,增殖及促進(jìn)細(xì)胞凋亡作用。Gax可干預(yù)細(xì)胞的周期,使有絲分裂的細(xì)胞停止于G1期,這與IGF-1作用相反。但目前關(guān)于Gax能否抑制IGF-1干預(yù)的脂肪細(xì)胞通道蛋白FAK, PYK2尚未有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)旨在對(duì)其進(jìn)行闡述。 研究方法 1.將目的基因GAX從原始質(zhì)粒上切下,與腺病毒載體重組,獲得重組腺病毒質(zhì)粒,鑒定正確后,純化擴(kuò)增腺病毒。 2.細(xì)胞培養(yǎng)用3-4代3T3-L1前脂肪細(xì)胞培養(yǎng),直到接觸抑制后2天后用地塞米松,IBMX及胰島素等培養(yǎng)脂肪細(xì)胞,11天左右脂肪細(xì)胞出現(xiàn)大量脂滴。用油紅O染色鑒定90%以上脂肪細(xì)胞出現(xiàn)脂滴,符合實(shí)驗(yàn)要求。 3.實(shí)驗(yàn)分組 (1)按是否含Gax病毒分組:用含Gax的腺病毒轉(zhuǎn)染脂肪細(xì)胞,分為空白對(duì)照組,Ad-GFP組,Ad-Gax組,干預(yù)時(shí)間為48h。 (2)按IGF-1的干預(yù)及Gax腺病毒的轉(zhuǎn)染分組:分為空白對(duì)照組,Ad-GFP組,Ad-Gax組,IGF-1+Ad-Gax組,Ad-GFP+IGF-1組,各組干預(yù)時(shí)間均為48h。 4.蛋白免疫印記技術(shù)按是否含Gax病毒分組,觀察48h后脂肪細(xì)胞Gax的蛋白表達(dá)情況。按IGF-1和Gax轉(zhuǎn)染分組,觀察各組48h后脂肪細(xì)胞FAK, PYK2的蛋白表達(dá)情況。 5.實(shí)時(shí)定量多聚酶鏈反應(yīng)檢測(cè)IGF-1及Gax干預(yù)48h后脂肪細(xì)胞FAK, PYK2的mRNA相對(duì)表達(dá)。 結(jié)果 1.經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳鑒定證實(shí)Gax基因成功插入到目的載體上,獲得重組腺病毒。 2.脂肪細(xì)胞鑒定:用第3-4代3T3-L1前體脂肪細(xì)胞接觸抑制2天后誘導(dǎo)分化,第5天左右出現(xiàn)脂滴,第11天左右90%脂肪細(xì)胞出現(xiàn)脂滴,經(jīng)油紅O染色證實(shí)為脂肪細(xì)胞,用于實(shí)驗(yàn)。 3.病毒轉(zhuǎn)染:重組Gax腺病毒轉(zhuǎn)染脂肪細(xì)胞,48h后行倒置熒光顯微鏡觀察,90%脂肪細(xì)胞出現(xiàn)綠色熒光。 4.蛋白表達(dá):病毒轉(zhuǎn)染脂肪細(xì)胞48h后,Ad-Gax組與空白對(duì)照組,Ad-GFP組相比較,Gax蛋白表達(dá)明顯上調(diào)(p0.01),Ad-GFP與空白對(duì)照組比較差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。IGF-1及病毒干預(yù)脂肪細(xì)胞48h后,Ad-GFP+IGF-1組FAK, PYK2較空白對(duì)照組,Ad-GFP組,Ad-Gax組,Ad-Gax+IGF-1組比較蛋白表達(dá)水平顯著增加(p0.01), Ad-Gax組與Ad-Gax+IGF-1組FAK, PYK2較空白對(duì)照組,Ad-GFP組,Ad-GFP+IGF-1組比較蛋白表達(dá)水平顯著減少(p0.01),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Ad-GFP組較空白對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。 5. mRNA表達(dá):IGF-1及腺病毒干預(yù)脂肪細(xì)胞48h后,Ad-GFP+IGF-1組FAK, PYK2的mnRNA相對(duì)表達(dá)較空白對(duì)照組,Ad-GFP組, Ad-Gax組,Ad-Gax+IGF-1組顯著增加(p0.01),Ad-Gax組與Ad-Gax+IGF-1組FAK, PYK2的mRNA相對(duì)表達(dá)較空白對(duì)照組,Ad-GFP組,Ad-GFP+IGF-1組比較顯著減少(p0.01),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Ad-GFP組較空白對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。 結(jié)論 1.大鼠Gax基因能有效轉(zhuǎn)染脂肪細(xì)胞,并且在脂肪細(xì)胞中表達(dá)。 2.Gax能有效抑制IGF-1對(duì)脂肪細(xì)胞的干預(yù)作用。 3.IGF-1能激活FAK, PYK2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路轉(zhuǎn)導(dǎo),刺激FAK, PYK2的mRNA及蛋白表達(dá),而Gax能有效對(duì)抗IGF-1的刺激作用,抑制FAK, PYK2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。
【學(xué)位授予單位】:山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2012
【分類號(hào)】:R363

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王耿,何國(guó)祥,冉擘力,張萍,景濤,陳渝;腺病毒介導(dǎo)gax基因轉(zhuǎn)染對(duì)血管平滑肌細(xì)胞遷移的影響[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2005年14期

2 孫運(yùn)祥,任麗君,郭玉嵩,田長(zhǎng)富;人IL-2復(fù)制缺陷型重組腺病毒的構(gòu)建和鑒定[J];實(shí)用腫瘤學(xué)雜志;2005年04期

3 陳靜韻,丁煥文,王捷,楊汝德;用于骨移植的hCbfa1重組腺病毒載體的構(gòu)建[J];華南理工大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2005年08期

4 廖洪映;熊利華;陳波;張惠忠;華平;殷香保;祝曙光;傅玉如;;重組bcl-xL腺病毒對(duì)心肌細(xì)胞凋亡的影響[J];中山大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2005年04期

5 吳紅兵;田聆;文艷君;劉玉梅;闞兵;杜小波;徐健蓉;魏于全;;表達(dá)人CD40配體的重組腺病毒載體的構(gòu)建[J];華西口腔醫(yī)學(xué)雜志;2005年06期

6 吳燕峰;王鵬;唐勇;黃霖;楊睿;史玉朋;賀曉玉;沈慧勇;;復(fù)制缺陷型重組腺病毒Adeno-X-腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的構(gòu)建與鑒定[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2006年05期

7 張毅;楊占宇;朱瑾;楊世忠;李曉武;董家鴻;;連環(huán)蛋白P120基因重組腺病毒載體的構(gòu)建及表達(dá)[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2006年17期

8 呂金星;嚴(yán)春寅;侯建全;浦金賢;平季根;溫端改;;人血紅素氧合酶-1重組腺病毒的構(gòu)建與鑒定[J];江蘇醫(yī)藥;2006年11期

9 邵紫韞;劉志鋒;彭毅;徐佳;鄧鵬;姜勇;;IP-10重組腺病毒載體的構(gòu)建及其病毒制備[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2006年11期

10 楊靜悅;曹大勇;劉文超;賈軍;斯小明;騰增輝;楊文濤;;腺病毒介導(dǎo)的HBsAg基因修飾樹突狀細(xì)胞瘤苗的制備[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2006年12期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 王晉慧;姚明忠;顧錦法;孫蘭英;郎明非;劉菁;劉新垣;;腫瘤靶向性腺病毒載體的構(gòu)建[A];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)第八屆會(huì)員代表大會(huì)暨全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2001年

2 劉旭;田長(zhǎng)富;;癌基因治療中的腺病毒載體的開發(fā)和應(yīng)用(綜述Ⅱ)[A];慶祝黑龍江省免疫學(xué)會(huì)成立十周年(1993—2003)論文集[C];2003年

3 凌昌全;李紹祥;張晨;張亞妮;;攜蜂毒素基因腺病毒載體的構(gòu)建及體外抑瘤實(shí)驗(yàn)研究[A];第九屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合腫瘤學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2002年

4 馬立新;馬琪;徐松;;新型、簡(jiǎn)捷、有效的方法構(gòu)建基于腺病毒載體系統(tǒng)的cDNA表達(dá)文庫[A];中國(guó)蛋白質(zhì)組學(xué)首屆學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2003年

5 王桂蘭;魯繼榮;成煥吉;馬青山;張?jiān)品?;高滴度含有目的基因IL-4RA的逆轉(zhuǎn)錄病毒的包裝和濃縮[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十四次全國(guó)兒科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

6 吳運(yùn)譜;張曉華;喬傳玲;;腺病毒載體流感疫苗研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會(huì)第三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

7 劉金娟;馬翔;;小鼠HSP27基因腺病毒表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定[A];第四屆長(zhǎng)三角婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)論壇暨浙江省2009年婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

8 劉瀟聰;陳耀凱;;腺病毒體外介導(dǎo)CTLA4-Ig在L02細(xì)胞中的表達(dá)及其生物學(xué)活性[A];全國(guó)第3屆中西醫(yī)結(jié)合傳染病學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)傳染病專業(yè)委員會(huì)第2屆委員會(huì)議論文匯編[C];2010年

9 張春燕;李方和;龔勁松;陳妍;;抗腺病毒載體單克隆抗體的制備及其初步鑒定[A];中國(guó)免疫學(xué)會(huì)第五屆全國(guó)代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2006年

10 張子陽;袁春玉;楊亦彬;;人促血管生成素1腺病毒載體的構(gòu)建[A];貴州省醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)分會(huì)2008年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 扈江偉;腺病毒介導(dǎo)hTRX修飾的間充質(zhì)干細(xì)胞在小鼠急性放射損傷中的修復(fù)作用研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2012年

2 張燕玲;腦源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子前體ProBDNF在大鼠后足切割痛的作用及可能機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2012年

3 吳成君;Ad35腺病毒載體構(gòu)建及病毒蛋白免疫原性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2009年

4 于彬;六鄰體嵌合型重組5型腺病毒載體逃避預(yù)存免疫的研究[D];吉林大學(xué);2012年

5 席啟林;維生素D受體調(diào)控尿鈣重吸收的分子機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2010年

6 徐尤年;血管生成素1腺病毒載體的構(gòu)建及其對(duì)內(nèi)毒素性肺損傷炎癥消退的影響[D];華中科技大學(xué);2010年

7 陳劍;BMP2和BMP7基因共轉(zhuǎn)染兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建組織工程骨的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2011年

8 王鵬;表達(dá)His-tag-ICP47融合基因腺病毒載體的構(gòu)建及其免疫活性的研究[D];鄭州大學(xué);2011年

9 刁彥鵬;腺病毒載體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染CD基因抑制大鼠移植靜脈內(nèi)膜增生及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2005年

10 張巖;腺病毒介導(dǎo)的鳥氨酸脫羧酶反義RNA抑制前列腺癌的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 陳媛媛;hIL-12腺病毒載體的構(gòu)建及在人hBMSCs中的表達(dá)[D];山西醫(yī)科大學(xué);2010年

2 宋默;攜帶p53基因和Flt3L配體基因的腺病毒載體的構(gòu)建及鑒定[D];大連醫(yī)科大學(xué);2010年

3 宋付凱;高表達(dá)hRAMP1基因腺病毒載體的構(gòu)建及其在兔MSCs中表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2010年

4 閆莉;重組Gax腺病毒對(duì)IGF-1干預(yù)大鼠脂肪細(xì)胞通道蛋白FAK,PYK2的影響[D];山東大學(xué);2012年

5 劉海斌;腺病毒介導(dǎo)的mda-7/IL-24基因?qū)θ撕戆┘?xì)胞Hep-2的凋亡作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

6 魏菁;腺病毒介導(dǎo)ChM-I基因抑制BMSCs體內(nèi)構(gòu)建的軟骨血管化的實(shí)驗(yàn)研究[D];西北大學(xué);2010年

7 劉海平;非增殖性腺病毒攜帶全長(zhǎng)抗體Cetuximab的腫瘤基因治療的研究[D];浙江理工大學(xué);2010年

8 蘇秀云;應(yīng)用AdEasy腺病毒載體系統(tǒng)構(gòu)建攜帶人骨形成蛋白2基因的重組腺病毒[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2005年

9 毛亮;選擇增殖型腺病毒ZD55攜帶自殺基因Dm-dNK(果蠅脫氧核糖核苷酸激酶)治療大腸癌的研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2010年

10 王曉剛;人白細(xì)胞介素23基因克隆和攜帶EGFP腺病毒載體的構(gòu)建與鑒定[D];大連醫(yī)科大學(xué);2007年



本文編號(hào):2524018

資料下載
論文發(fā)表

本文鏈接:http://sikaile.net/xiyixuelunwen/2524018.html


Copyright(c)文論論文網(wǎng)All Rights Reserved | 網(wǎng)站地圖 |

版權(quán)申明:資料由用戶67977***提供,本站僅收錄摘要或目錄,作者需要?jiǎng)h除請(qǐng)E-mail郵箱bigeng88@qq.com
欧美不卡一区二区在线视频| 亚洲精品蜜桃在线观看| 免费在线观看欧美喷水黄片| 国产午夜精品在线免费看| 国产av熟女一区二区三区蜜桃| 成年女人午夜在线视频| 视频一区二区三区自拍偷| 日韩一区中文免费视频| 色欧美一区二区三区在线| 美女被后入福利在线观看| 国产精品福利精品福利| 欧美精品专区一区二区| 国产又粗又猛又爽又黄的文字| 老熟妇乱视频一区二区| 美女被草的视频在线观看| 欧美国产日韩变态另类在线看| 好吊一区二区三区在线看| 亚洲一区二区欧美激情| 亚洲天堂精品1024| 欧美做爰猛烈叫床大尺度| 九九九热在线免费视频| 日本成人三级在线播放 | 国产黄色高清内射熟女视频| 超薄肉色丝袜脚一区二区| 国产一区欧美一区日韩一区| 欧美日韩免费黄片观看| 亚洲中文字幕乱码亚洲| 日本中文字幕在线精品| 午夜福利视频日本一区| 亚洲最新av在线观看| 亚洲午夜福利不卡片在线| 国产欧美日本在线播放| av中文字幕一区二区三区在线| 国产又色又爽又黄又免费| 91人妻人人揉人人澡人| 亚洲中文字幕在线观看四区| 精品推荐久久久国产av| 亚洲欧洲一区二区综合精品| av一区二区三区天堂| 婷婷伊人综合中文字幕| 九九热在线视频观看最新|