本文關(guān)鍵詞：PEN載ODN MT01復(fù)合物性能檢測及其對(duì)成骨細(xì)胞增殖的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：ODN MT01是模擬人線粒體核苷酸序列自主設(shè)計(jì)含有27個(gè)堿基的單鏈DNA序列[一種具有免疫抑制功能的寡核苷酸，國家發(fā)明專利，專利號(hào)：CN101643496]。實(shí)驗(yàn)研究表明，ODN MT01在大鼠牙周炎所導(dǎo)致的牙槽骨吸收中其可起到阻止作用，并且可以促進(jìn)大鼠的成骨細(xì)胞成熟活化；此外可以調(diào)控細(xì)胞內(nèi)Runx-2、Collagen-I和SP7等成骨相關(guān)因子的表達(dá)水平，同時(shí)可以促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化。以上研究提示，ODN MT01有可能對(duì)骨重塑具有調(diào)控作用。 ODN MT01作為一種寡核苷酸，受半衰期短和細(xì)胞內(nèi)DNA酶降解作用的影響，導(dǎo)致細(xì)胞有效攝取率無法達(dá)到閾值水平，影響其發(fā)揮作用；此外，由于未甲基化ODN MT01表面帶負(fù)電荷，這一特點(diǎn)使其與同帶負(fù)電荷的細(xì)胞膜結(jié)合難度明顯增加。針對(duì)以上問題，為提高其穩(wěn)定性，目前常對(duì)ODN進(jìn)行硫代磷酸化修飾。但由于修飾后仍未能改變負(fù)電荷電性不能提高細(xì)胞攝取率。因此，研究學(xué)者致力于呈遞系統(tǒng)的設(shè)計(jì)及使用，目前研究主要包括陽離子脂質(zhì)體、陽離子高分子聚合物、陽離子多肽類、陽離子聚合物、微球和納米粒子等。PEI已經(jīng)成為非病毒基因類載體中發(fā)展最快及應(yīng)用最廣的一類傳輸載體。本研究擬用陽離子聚合物PEI的衍生物PEN作為ODN MT01的傳遞載體，探討PEN裝載ODN MT01的最佳質(zhì)量比以及能否高效率呈遞ODN MT01到MG63細(xì)胞促進(jìn)其增殖，為后續(xù)研究奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 目的：檢測PEI衍生物PEN裝載ODN MT01復(fù)合物性能及PEN/ODN MT01復(fù)合物轉(zhuǎn)染MG63細(xì)胞對(duì)細(xì)胞增殖影響。 方法：通過Micheal加成反應(yīng)，利用N-異丙基丙烯酰胺對(duì)25K的PEI的氨基進(jìn)行修飾，得到樣品PEN；運(yùn)用Nanodrop檢測技術(shù)，確定載體PEN與ODN MT01的最佳配比比例范圍；通過瓊脂糖凝膠電泳對(duì)復(fù)合物進(jìn)行定性檢測；利用1H NMR技術(shù)、納米粒度電位測定技術(shù)完成PEN結(jié)構(gòu)和表面電荷性質(zhì)及與非硫代磷酸化ODN MT01形成復(fù)合物粒徑的檢測；以PEN介導(dǎo)ODN MT01轉(zhuǎn)染大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞和人源性成骨樣細(xì)胞系MG63，激光共聚焦顯微鏡觀察胞吞復(fù)合物，確定最佳裝載比例，采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測復(fù)合物與單體對(duì)細(xì)胞周期影響的差異。 結(jié)果：PEN與ODN MT01質(zhì)量比為6:1時(shí)，，裝載率高達(dá)77.67%，且轉(zhuǎn)染MG63細(xì)胞熒光強(qiáng)度最大；PEN/ODN MT01復(fù)合物隨質(zhì)量比增加表面由負(fù)電轉(zhuǎn)為正電，粒徑大小90-110nm；PEN/ODN MT01復(fù)合物與對(duì)照組相比明顯促進(jìn)MG63細(xì)胞增殖。 結(jié)論：PEN裝載ODN MT01后能可以改變復(fù)合物表面電性，利于細(xì)胞攝取；PEN裝載ODN MT01后粒徑大小適合細(xì)胞攝��；PEN裝載ODN MT01質(zhì)量比為1:6時(shí)，可以高效轉(zhuǎn)運(yùn)ODN MT01到MG63細(xì)胞，同時(shí)可以明顯促進(jìn)MG63細(xì)胞增殖。
【關(guān)鍵詞】：寡核苷酸MT01 PEI衍生物 人骨肉瘤成骨細(xì)胞系 質(zhì)量比
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 英文縮略詞11-12
• 第1章 緒論12-22
• 1.1 研究意義12-13
• 1.2 文獻(xiàn)綜述13-18
• 1.2.1 ODN MT0113-14
• 1.2.2 ODN MT01 與骨重塑14
• 1.2.3 ODN 與遞呈系統(tǒng)14-18
• 1.3 研究現(xiàn)狀18-20
• 1.3.1 ODN 與骨改建研究進(jìn)展18-19
• 1.3.2 ODN 與傳輸載體19-20
• 1.4 研究思路20-22
• 第2章 材料與方法22-24
• 2.1 材料22
• 2.2 方法22-24
• 2.2.1 PEN 合成及其裝載 ODN MT01 效率測定22-23
• 2.2.2 PEN/ODN MT01 復(fù)合物電位及粒徑測量23
• 2.2.3 PEN/ODN MT01 復(fù)合物對(duì) MG63 細(xì)胞增殖檢測23
• 2.2.4 ODN MT01 與 PEN 按不同質(zhì)量比裝載轉(zhuǎn)染 MG63 細(xì)胞測定23-24
• 第3章 結(jié)果24-28
• 3.1 ODN MT01 與 PEN 按不同質(zhì)量比的裝載情況24-25
• 3.2 PEN/ODN MT01 復(fù)合物表面電位和粒徑25
• 3.3 ODN MT01 與 PEN 形成復(fù)合物促進(jìn) MG63 細(xì)胞增殖25-26
• 3.4 ODN MT01 與 PEN 按不同質(zhì)量比裝載轉(zhuǎn)染 MG63 細(xì)胞26-28
• 第4章 討論28-32
• 4.1 PEN 裝載 ODN MT01 效率29
• 4.2 PEN/ODN MT01 復(fù)合物表面電性29
• 4.3 PEN/ODN MT01 復(fù)合物粒徑29-30
• 4.4 PEN/ODN MT01 復(fù)合物促進(jìn)細(xì)胞增殖30-31
• 4.5 展望31-32
• 第5章 結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-38
• 作者簡介及在校期間所取得的科研成果38-39
• 致謝39

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 ;Transient Expression of Exogenous Gene into Plant Cell Mediated by PEI Nanovector[J];Agricultural Sciences in China;2011年06期

2 姚祺;金雪;胡天楠;王啟聞;王訓(xùn)師;胡奇達(dá);徐桑;周峻;湯谷平;;四種聚陽離子載體材料的體外細(xì)胞學(xué)及體內(nèi)性質(zhì)研究[J];浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2012年06期

  本文關(guān)鍵詞：PEN載ODN MT01復(fù)合物性能檢測及其對(duì)成骨細(xì)胞增殖的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：252321