發(fā)布時間：2017-03-16 21:04

  本文關(guān)鍵詞：PEN載ODN MT01復(fù)合物性能檢測及其對成骨細胞增殖的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：ODN MT01是模擬人線粒體核苷酸序列自主設(shè)計含有27個堿基的單鏈DNA序列[一種具有免疫抑制功能的寡核苷酸，國家發(fā)明專利，專利號：CN101643496]。實驗研究表明，ODN MT01在大鼠牙周炎所導(dǎo)致的牙槽骨吸收中其可起到阻止作用，并且可以促進大鼠的成骨細胞成熟活化；此外可以調(diào)控細胞內(nèi)Runx-2、Collagen-I和SP7等成骨相關(guān)因子的表達水平，同時可以促進骨髓間充質(zhì)干細胞向成骨細胞分化。以上研究提示，ODN MT01有可能對骨重塑具有調(diào)控作用。 ODN MT01作為一種寡核苷酸，受半衰期短和細胞內(nèi)DNA酶降解作用的影響，導(dǎo)致細胞有效攝取率無法達到閾值水平，影響其發(fā)揮作用；此外，由于未甲基化ODN MT01表面帶負電荷，這一特點使其與同帶負電荷的細胞膜結(jié)合難度明顯增加。針對以上問題，為提高其穩(wěn)定性，目前常對ODN進行硫代磷酸化修飾。但由于修飾后仍未能改變負電荷電性不能提高細胞攝取率。因此，研究學(xué)者致力于呈遞系統(tǒng)的設(shè)計及使用，目前研究主要包括陽離子脂質(zhì)體、陽離子高分子聚合物、陽離子多肽類、陽離子聚合物、微球和納米粒子等。PEI已經(jīng)成為非病毒基因類載體中發(fā)展最快及應(yīng)用最廣的一類傳輸載體。本研究擬用陽離子聚合物PEI的衍生物PEN作為ODN MT01的傳遞載體，探討PEN裝載ODN MT01的最佳質(zhì)量比以及能否高效率呈遞ODN MT01到MG63細胞促進其增殖，為后續(xù)研究奠定實驗基礎(chǔ)。 目的：檢測PEI衍生物PEN裝載ODN MT01復(fù)合物性能及PEN/ODN MT01復(fù)合物轉(zhuǎn)染MG63細胞對細胞增殖影響。 方法：通過Micheal加成反應(yīng)，利用N-異丙基丙烯酰胺對25K的PEI的氨基進行修飾，得到樣品PEN；運用Nanodrop檢測技術(shù)，確定載體PEN與ODN MT01的最佳配比比例范圍；通過瓊脂糖凝膠電泳對復(fù)合物進行定性檢測；利用1H NMR技術(shù)、納米粒度電位測定技術(shù)完成PEN結(jié)構(gòu)和表面電荷性質(zhì)及與非硫代磷酸化ODN MT01形成復(fù)合物粒徑的檢測；以PEN介導(dǎo)ODN MT01轉(zhuǎn)染大鼠骨髓基質(zhì)細胞和人源性成骨樣細胞系MG63，激光共聚焦顯微鏡觀察胞吞復(fù)合物，確定最佳裝載比例，采用流式細胞技術(shù)檢測復(fù)合物與單體對細胞周期影響的差異。 結(jié)果：PEN與ODN MT01質(zhì)量比為6:1時，，裝載率高達77.67%，且轉(zhuǎn)染MG63細胞熒光強度最大；PEN/ODN MT01復(fù)合物隨質(zhì)量比增加表面由負電轉(zhuǎn)為正電，粒徑大小90-110nm；PEN/ODN MT01復(fù)合物與對照組相比明顯促進MG63細胞增殖。 結(jié)論：PEN裝載ODN MT01后能可以改變復(fù)合物表面電性，利于細胞攝�。籔EN裝載ODN MT01后粒徑大小適合細胞攝��；PEN裝載ODN MT01質(zhì)量比為1:6時，可以高效轉(zhuǎn)運ODN MT01到MG63細胞，同時可以明顯促進MG63細胞增殖。
【關(guān)鍵詞】：寡核苷酸MT01 PEI衍生物 人骨肉瘤成骨細胞系 質(zhì)量比
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 英文縮略詞11-12
• 第1章 緒論12-22
• 1.1 研究意義12-13
• 1.2 文獻綜述13-18
• 1.2.1 ODN MT0113-14
• 1.2.2 ODN MT01 與骨重塑14
• 1.2.3 ODN 與遞呈系統(tǒng)14-18
• 1.3 研究現(xiàn)狀18-20
• 1.3.1 ODN 與骨改建研究進展18-19
• 1.3.2 ODN 與傳輸載體19-20
• 1.4 研究思路20-22
• 第2章 材料與方法22-24
• 2.1 材料22
• 2.2 方法22-24
• 2.2.1 PEN 合成及其裝載 ODN MT01 效率測定22-23
• 2.2.2 PEN/ODN MT01 復(fù)合物電位及粒徑測量23
• 2.2.3 PEN/ODN MT01 復(fù)合物對 MG63 細胞增殖檢測23
• 2.2.4 ODN MT01 與 PEN 按不同質(zhì)量比裝載轉(zhuǎn)染 MG63 細胞測定23-24
• 第3章 結(jié)果24-28
• 3.1 ODN MT01 與 PEN 按不同質(zhì)量比的裝載情況24-25
• 3.2 PEN/ODN MT01 復(fù)合物表面電位和粒徑25
• 3.3 ODN MT01 與 PEN 形成復(fù)合物促進 MG63 細胞增殖25-26
• 3.4 ODN MT01 與 PEN 按不同質(zhì)量比裝載轉(zhuǎn)染 MG63 細胞26-28
• 第4章 討論28-32
• 4.1 PEN 裝載 ODN MT01 效率29
• 4.2 PEN/ODN MT01 復(fù)合物表面電性29
• 4.3 PEN/ODN MT01 復(fù)合物粒徑29-30
• 4.4 PEN/ODN MT01 復(fù)合物促進細胞增殖30-31
• 4.5 展望31-32
• 第5章 結(jié)論32-33
• 參考文獻33-38
• 作者簡介及在校期間所取得的科研成果38-39
• 致謝39

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 ;Transient Expression of Exogenous Gene into Plant Cell Mediated by PEI Nanovector[J];Agricultural Sciences in China;2011年06期

2 姚祺;金雪;胡天楠;王啟聞;王訓(xùn)師;胡奇達;徐桑;周峻;湯谷平;;四種聚陽離子載體材料的體外細胞學(xué)及體內(nèi)性質(zhì)研究[J];浙江大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2012年06期

  本文關(guān)鍵詞：PEN載ODN MT01復(fù)合物性能檢測及其對成骨細胞增殖的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：252321