本文關(guān)鍵詞：載脂蛋白M-1-磷酸鞘氨醇軸在巨噬細(xì)胞炎癥中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:明確載脂蛋白M(apolipoprotein M,apoM)在外周血細(xì)胞表面的表達(dá)情況,探討apoM在炎癥中的作用及可能機(jī)制。方法:采集健康成年志愿者新鮮全血,經(jīng)淋巴細(xì)胞分離液分離后,CD3、CD19、CD14、CD56和CD16抗體分別標(biāo)記T細(xì)胞、B細(xì)胞、單核細(xì)胞、NK細(xì)胞,用藻紅蛋白(P-phycoerythrin,PE)標(biāo)記apoM,流式細(xì)胞儀及激光共聚焦分別檢測(cè)不同細(xì)胞亞群上apoM蛋白的表達(dá)情況。以人單核細(xì)胞THP-1細(xì)胞為研究對(duì)象,體外構(gòu)建巨噬細(xì)胞炎癥模型。實(shí)驗(yàn)分組:(1)對(duì)照組;(2)10μg/ml人重組apoM蛋白單獨(dú)預(yù)處理3h;(3)10μg/ml人重組apoM蛋白預(yù)處理細(xì)胞3h,10ng/ml脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)孵育6h;(4)10ng/ml LPS孵育6h。雙重?zé)晒舛縋CR法(dual fluorescent quantitative real-time PCR)檢測(cè)腫瘤壞死因子(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素1β(Interleukin 1 beta,IL-1β)的mRNA水平。用1-磷酸鞘氨醇受體2(Sphingosine 1 Phosphatereceptor 2,S1P2)拮抗劑JTE-013(30μM)、激動(dòng)劑CYM-5520(1μM、10μM、50μM)和S1P1、S1P3、S1P4、S1P5激動(dòng)劑FTY720(10μM)分別預(yù)處理巨噬細(xì)胞0.5h,再用人重組apo M蛋白孵育9h,采用雙重?zé)晒舛縋CR法檢測(cè)TNF-α和IL-1β的mRNA水平。結(jié)果:激光共聚焦結(jié)果顯示,T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞和單核細(xì)胞表面均表達(dá)apoM蛋白。流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果顯示,apoM在CD14+單核細(xì)胞上表達(dá)的比例最高,達(dá)到14.4%,其次為CD3+T細(xì)胞,表達(dá)比例為7.4%,CD19+B細(xì)胞、CD56+NK細(xì)胞和CD16+NK細(xì)胞表達(dá)apoM的比例分別為6.2%、2.4%和4.2%。LPS刺激巨噬細(xì)胞可顯著上調(diào)TNF-α和IL-1β的mRNA表達(dá)水平,人重組apoM蛋白和LPS共同處理組TNF-α和IL-1β的m RNA表達(dá)水平與LPS單獨(dú)刺激組相比分別升高1.15和1.21倍(P值分別為0.0383和0.0034)。在體外,apoM重組蛋白單獨(dú)作用可顯著上調(diào)巨噬細(xì)胞中TNF-α和IL-1β的mRNA的表達(dá)(分別升高2.09倍和1.35倍,P值為0.0007和0.0026)。JTE-013和apoM重組蛋白共同處理組與單獨(dú)apoM重組蛋白處理組相比,TNF-α和IL-1β的mRNA水平升高1.86和1.65倍(P值均小于0.0001),CYM-5520和apoM重組蛋白共同處理組與apoM單獨(dú)處理組相比,TNF-α和IL-1β的表達(dá)顯著降低(分別降低1.41和1.24倍,P值為0.0406和0.0275)。雙因素方差分析顯示apoM和JTE-013對(duì)巨噬細(xì)胞TNF-α、IL-1βmRNA表達(dá)水平的交互作用有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。FTY720和apoM重組蛋白共同作用也能顯著抑制巨噬細(xì)胞TNF-α、IL-1βmRNA表達(dá)(分別降低1.48和1.6倍,P值均小于0.0001),但雙因素方差分析顯示apoM和FTY720對(duì)巨噬細(xì)胞TNF-α、IL-1βmRNA表達(dá)水平的交互作用沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:健康人外周血單個(gè)核細(xì)胞中,T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞和單核細(xì)胞都表達(dá)apoM蛋白,單核細(xì)胞表達(dá)量最高。人重組apoM蛋白能夠促進(jìn)LPS介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞TNF-α和IL-1βmRNA水平的表達(dá)。JTE-013能夠影響人重組apoM的促炎作用,人重組apoM蛋白可能通過(guò)S1P2受體途徑發(fā)揮其促炎作用。
【關(guān)鍵詞】：apoM S1P受體 巨噬細(xì)胞 炎癥因子
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R364.5
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 第一部分 健康人外周血單個(gè)核細(xì)胞上apoM蛋白的表達(dá)9-17
• 一、前言9-10
• 二、材料與方法10-12
• 三、結(jié)果12-15
• 四、討論15-17
• 第二部分 S1P2受體降低人重組apoM引起的巨噬細(xì)胞炎癥因子的表達(dá)17-32
• 一、前言17-18
• 二、材料與方法18-23
• 三、結(jié)果23-27
• 四、討論27-32
• 結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-38
• 綜述38-49
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 英文縮略詞表49-51
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文51-52
• 致謝52-53

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本文編號(hào)：252266