發(fā)布時(shí)間：2019-07-26 19:13

【摘要】：小鼠的子宮珠蛋白結(jié)合蛋白(uteroglobin-binding protein, UGBP,也稱UG受體,uteroglobin receptor)可能與Clara細(xì)胞分泌蛋白(CCSP/UG)發(fā)揮其多功能的生物學(xué)活性有著密切的聯(lián)系,但是當(dāng)前對(duì)于UGBP在肺纖維化時(shí)的確切的表達(dá)模式特點(diǎn)及其生物學(xué)意義都還不明確,值得進(jìn)一步研究。同時(shí)我們知道,TGF-β1在小鼠肺纖維化的發(fā)生發(fā)展中起著核心作用。提示TGF-β1信號(hào)通路對(duì)UGBP的轉(zhuǎn)錄調(diào)控可能與博萊霉素誘導(dǎo)小鼠肺纖維化中UGBP的變化有關(guān)。為此,本課題通過觀察博萊霉素誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化時(shí)肺內(nèi)UGBP基因和蛋白表達(dá)時(shí)間和空間模式的改變明確肺纖維化時(shí)UGBP的動(dòng)態(tài)表達(dá)規(guī)律,并在此基礎(chǔ)上觀察在體外組織培養(yǎng)模型中阻斷TGF-β1的作用時(shí)UGBP的變化初步探討UGBP的表達(dá)改變機(jī)制。為進(jìn)一步闡明肺纖維化發(fā)生發(fā)展過程中UGBP表達(dá)變化的分子機(jī)制和全面揭示UGBP轉(zhuǎn)錄調(diào)控原理的研究提供新的啟示。 方法： 1.UGBP在腹腔注射BLM誘導(dǎo)的肺纖維化小鼠模型肺組織中的表達(dá)。50只雄性昆明小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(Con組)和肺纖維化模型組(D1、D6、D12、D18組),每組10只。除Con組外,其余各組采用腹腔注射BLM致小鼠肺纖維化模型,連續(xù)注射10天,此后分別于最后一次注射后的第1、6、12、18天處死各組小鼠,左肺上葉制成組織芯片行蘇木素一伊紅(HE), Masson膠原染色并運(yùn)用免疫組織化學(xué)染色的方法觀察UGBP蛋白在小鼠肺組織的表達(dá),右肺及左肺下葉測(cè)定羥脯氨酸(HYP)的含量,RT-PCR法半定量測(cè)定UGBP、TGF-β1和前Ⅰ型膠原mRNA在肺內(nèi)的表達(dá)。 2. UGBP變化機(jī)制的初步探討 20只雄性昆明小鼠隨機(jī)分為正常小鼠組(Con組),正常小鼠+TGF-β1受體拮抗劑組(Con+R0158組),肺纖維化模型組(B組),肺纖維化模型+TGF-β1受體拮抗劑組(B+R0 1 58組),每組5只。B組和B+R0158組采用腹腔注射BLM致小鼠肺纖維化模型,連續(xù)注射10天,于注射后第6天處死各組小鼠,分別將其肺切片至于Transwell板上培養(yǎng),Con+R0158組和B+R0158組培基內(nèi)加入TGF-β1受體拮抗劑(R0158),培養(yǎng)4天后收集組織用RT-PCR法半定量測(cè)定UGBP、TGF-β1和前Ⅰ型膠原mRNA在肺內(nèi)的表達(dá)。 結(jié)果： 1.腹腔注射BLM肺纖維化模型成功,根據(jù)HE染色,膠原染色和羥脯氨酸的測(cè)定結(jié)果顯示注射后第1、6、12、18天小鼠肺纖維化程度逐漸加重。 2.免疫組織化學(xué)染色顯示不同時(shí)期UGBP蛋白表達(dá)情況不同。經(jīng)博萊霉素處理后第1天和第6天UGBP在氣道上皮的表達(dá)有所增強(qiáng),但在肺泡間質(zhì)的表達(dá)仍較弱；第12天在氣道上皮的表達(dá)變化不明顯,但在纖維組織增生的部位有不均一的表達(dá)；第18天在氣道上皮仍有強(qiáng)表達(dá),并且在膠原纖維沉積的部位的表達(dá)更為顯著。 3.RT-PCR檢測(cè)不同時(shí)期UGBP, TGF-β1,前Ⅰ型膠原,mRNA表達(dá)變化：TGF-β1的表達(dá)在博萊霉素處理后第6天開始顯著高于正常組(P0.05),12天時(shí)持續(xù)高表達(dá),第18天表達(dá)最高(P0.01)。前Ⅰ型膠原的表達(dá)在博萊霉素處理后第12天開始顯著高于正常組(P0.01),18天時(shí)持續(xù)高表達(dá)。正常對(duì)照組中UGBP僅為弱表達(dá),而纖維化模型組UGBPmRNA表達(dá)在第1天開始升高,但升高程度沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,第18天UGBP顯著升高(P0.05)。 4.肺組織體外培養(yǎng)4天后RT-PCR檢測(cè)各組UGBP, TGF-β1前Ⅰ型膠原mRNA表達(dá)變化：TGF-β1的表達(dá)在B組和B+R0158組顯著高于正常對(duì)照組(P0.01),B組和B+R0158組,Con和Con+R0158組之間沒有顯著性差異。B組前Ⅰ型膠原mRNA的表達(dá)顯著高于正常對(duì)照組(P0.01),B+R0158組前Ⅰ型膠原mRNA與B組相比顯著下降(P0.01),但仍高于正常對(duì)照組(P0.05)。B組UGBP mRNA的表達(dá)顯著高于正常對(duì)照組(P0.01), B+R01 58組UGBP mRNA與B組相比顯著下調(diào)(P0.01),而和正常對(duì)照組之間相比沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論： 1.腹腔注射BLM后小鼠肺組織纖維化程度逐漸加重,UGBP在肺纖維化過程中表達(dá)升高,在肺內(nèi)不同細(xì)胞UGBP表達(dá)的變化不同。 2.肺纖維化過程中肺組織UGBP表達(dá)的上調(diào)可能與內(nèi)源性TGF-β信號(hào)通路的激活有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R363

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 李湘;TGF-β1對(duì)UGBP啟動(dòng)子活性的影響及核心啟動(dòng)子區(qū)域的篩選[D];中南大學(xué);2012年

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本文編號(hào)：2519744