【摘要】：水通道蛋白(Aquaporins, AQPs)是一類與水通透性有關的跨膜蛋白家族,它的發(fā)現(xiàn)從分子水平上揭示了水快速跨膜轉運的基本機制。AQP7隸屬于水通道蛋白家族的一個亞型—水甘油通道蛋白,它既可以轉運水,也可以轉運甘油、尿素等小分子物質。目前越來越多的研究提示水甘油通道蛋白在皮膚、脂肪等多種組織有重要的生理功能,尤其是在皮膚腫瘤發(fā)生、腸上皮損傷修復等涉及細胞快速增殖的情況下,其轉運的甘油通過代謝產生ATPs為多種組織細胞提供能量。蛻膜化是小鼠胚胎植入的一個關鍵環(huán)節(jié),伴隨大量的細胞增殖分化及血管發(fā)生,子宮的體積和重量在短短數(shù)天內急劇增加,需要消耗大量的能量。鑒于蛻膜化與腫瘤發(fā)生在細胞行為和能量代謝等方面具有很大程度的相似性,我們推測AQPs介導的甘油轉運在蛻膜化過程中也扮演重要的角色。本研究利用原位雜交、免疫熒光、實時定量PCR等方法,通過體內體外實驗研究了AQP7在小鼠圍植入期蛻膜化過程中的表達并初步探討其相關功能。1 原位雜交結果顯示AQP7 mRNA在妊娠第4天子宮中無明顯表達,從第5天起開始在植入位點周圍的蛻膜組織表達,隨著蛻膜化的進展,其在第6-8天子宮中表達范圍逐漸擴大。免疫熒光結果與原位雜交類似,值得注意的是,當AQP7開始在妊娠第5天植入位點周圍的蛻膜組織表達時,其在蛻膜細胞局部呈點狀表達;而在第6-8天子宮中,其表達模式具有區(qū)域特異性:在緊鄰植入位點的蛻膜區(qū)呈網狀表達,而在邊緣蛻膜區(qū)呈點狀表達。在人工誘導蛻膜化的子宮中,AQP7的表達模式與正常妊娠的情況類似,表明AQP7的這種時空特異性表達并不依賴于胚胎的存在,而只依賴于子宮蛻膜化的進程。在體外誘導子宮基質細胞發(fā)生蛻膜化的體系中,AQP7陽性表達的細胞隨蛻膜化進程逐漸增多。以上結果表明AQP7的表達與蛻膜化進程密切相關。由于AQP7是水甘油通道蛋白,我們檢測了妊娠第4-8天小鼠子宮中甘油的含量和甘油激酶的表達。結果顯示這段時期子宮中甘油含量和甘油激酶的表達量均隨蛻膜化進程逐漸增高,表明這段時期子宮有利用甘油供能的潛力。 綜上所述,AQP7在圍植入期小鼠子宮中呈時空特異性表達,其表達模式與蛻膜化進程密切相關,而這段時期子宮中甘油含量和甘油激酶表達也隨蛻膜化進程逐漸增加,提示小鼠子宮蛻膜化很可能利用甘油作為一種潛在的能量物質供能,AQP7則很可能通過介導相應的甘油轉運而參與蛻膜化。
【圖文】：

25圖1.AQP7 mRNA 在圍植入期小鼠子宮的原位雜交定位。A-E分別代表D4-8小鼠子宮，F(xiàn)是陰性對照組，雜交時用正義探針代替反義探針�！锎砼咛ニ谖恢�。標尺代表500 μm。Figure.1 In situ hybridization of AQP7 mRNA in mouse uteri during pregnancy on Day4(A), Day5 (B), Day6 (C), Day7 (D), Day8 (E), Negative control using sense probe (F)

26.AQP7 在圍植入期小鼠子宮的免疫熒光表達。其中 A-D 代表 D4, E-H 代表 D5，，6，M-Q 代表 D7，R-V 代表 D8。綠色信號代表 AQP7 的表達部位，紅色信號染核�！畲砼咛ニ谖恢�。A,E,I,M,R 中的標尺代表 500 μm，D,H,L 中的標尺代表，P,Q,U,V 中的標尺代表 100 μm。ure.2 AQP7 immunofluorescence detection in mouse uteri during pregnancy o) D5 (E-H), D6 (I-L), D7 (M-Q), D8 (R-V). FITC labeled AQP7 antibody in greled nuclei in red. ☆ represents the location of embryo. Bars in A, E, I, M, R rep μm; Bars in D, H, L represent 200 μm; Bars in P, Q, U, V represent 100 μm.
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R321

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本文編號：2519701