發(fā)布時(shí)間：2019-07-24 13:45

【摘要】：幽門螺桿菌(Helicobacter pylori)感染能引起胃部疾病如胃炎、胃潰瘍甚至是胃癌。H. pylori感染率高,在胃中定植會(huì)導(dǎo)致胃炎,但是僅有小部分被感染的人會(huì)出現(xiàn)臨床病狀,而大部分無(wú)報(bào)警癥狀的患者常被忽視。H. pylori引發(fā)的疾病目前主要采用三聯(lián)法即質(zhì)子泵抑制劑加兩種抗生素的方法治療,但此療法存在副作用強(qiáng)烈、易導(dǎo)致抗藥性、愈后復(fù)發(fā)率高等問(wèn)題。有研究表明益生菌能夠輔助治療H. pylori感染引起的疾病,并能減輕不良反應(yīng)。因此,本文為了研究利用食療的方法干預(yù)無(wú)癥狀的H. pylori感染或未感染的人群,預(yù)防H. pylori的感染或是降低H. pylori的定植量并減輕炎癥,篩選具有拮抗H. pylori作用的益生菌,并嘗試闡述益生菌干預(yù)H. pylori感染的機(jī)制,最后研究篩選到的益生菌在乳品中的應(yīng)用。 利用乳酸菌的耐酸性、疏水性、自凝集和交互凝集作用以及抑制H. pylori生長(zhǎng)和尿素酶活性試驗(yàn),篩選到2株具有潛在拮抗H. pylori作用的乳酸菌,分別為L(zhǎng)actobacillus plantarum 18 (LP18)和L. gasseri Chen (LGChen)。LP18具有耐酸性,能抑制H. pylori生長(zhǎng)并降低尿素酶活性。LGChen具有抑菌能力及較強(qiáng)的疏水性、自凝集和與H. pylori交互凝集作用。這兩株菌除了可以抑制H. pylori SS1生長(zhǎng),還能抑制其他H. pylori菌株的生長(zhǎng)。 采用C57BL/6小鼠,建立H. pylori感染的小鼠模型。H. pylori感染的小鼠模型:先用抗生素預(yù)處理后,再以H. pylori SS1 (300μL 1×109CFU/mL)結(jié)合碳酸氫鈉(250μL 0.2mol/L)處理每只C57BL/6小鼠,感染5次,6個(gè)月造模結(jié)束的方式,可以得到感染率比較高(80%),定植量穩(wěn)定(106-107CFU/g)的H. pylori感染的小鼠模型。 利用小鼠模型評(píng)價(jià)乳酸菌干預(yù)H. pylori感染小鼠的效果。乳酸菌分別為商業(yè)菌株L. rhamnosus GG(LGG,作為陽(yáng)性對(duì)照菌)、L. bulgaricus 360(LB)和Streptococcus thermophilus TA460(ST)以及本文篩選出乳酸菌LP18和LGChen,并以藥物治療作為陽(yáng)性對(duì)照。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明藥物治療后H. pylori的定植量及胃組織的尿素酶活性降低;乳酸菌(LGG、LP18和LGChen)干預(yù)組也能減輕H. pylori引起的炎癥,其中LP18干預(yù)組可以顯著降低H. pylori的定植量,而LGChen干預(yù)組顯著降低血液中的抗H. pylori- IgG抗體水平,因此綜合比較LP18和LGChen干預(yù)效果比LGG好;普通商業(yè)菌株LB和ST的作用不明顯。同時(shí)發(fā)現(xiàn)H. pylori感染引起血清、肝臟和胃組織中活性氧自由基(ROS)的升高,谷胱甘肽(GSH)的降低以及丙二醛(MDA)的升高。而乳酸菌干預(yù)以及藥物治療后,則能夠提高胃和肝臟組織的GSH含量同時(shí)降低MDA含量。因此,推測(cè)乳酸菌可能具有抗氧化作用而保護(hù)機(jī)體免受H. pylori感染所引起的氧化損傷。 測(cè)定了LP18和LGChen的體外抗氧化能力,并用ICR小鼠模型再次評(píng)價(jià)LP18和LGChen干預(yù)H. pylori感染的效果。結(jié)果表明這兩株乳酸菌都具有抗氧化的能力,LP18和LGChen的DPPH清除率分別為43%和62%,羥自由基的清除率分別為48%和18%,還原力分別相當(dāng)于62μmol/L和82μmol/L的半胱氨酸的還原力。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明LGChen和LP18可以降低胃中H. pylori的定植量、尿素酶活性并減輕H. pylori引起的炎癥,同時(shí)可以提高胃和肝組織中的GSH含量并降低MDA的含量,但沒(méi)有降低血液中的抗H. pylori-IgG抗體水平。 通過(guò)瓊脂擴(kuò)散法、共培養(yǎng)法研究乳酸菌對(duì)H. pylori的生長(zhǎng)和尿素酶活性的影響,以及用細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究乳酸菌對(duì)H. pylori粘附人胃上皮細(xì)胞以及誘導(dǎo)細(xì)胞分泌IL-8的影響,來(lái)探討乳酸菌干預(yù)H. pylori感染的體外機(jī)制。結(jié)果表明乳酸菌活菌和發(fā)酵上清液可以抑制H. pylori生長(zhǎng);上清液的抗菌能力依賴于上清液中的代謝產(chǎn)物(如有機(jī)酸和蛋白質(zhì)類似物)并受pH值影響;共培養(yǎng)時(shí),乳酸菌的活菌和發(fā)酵上清液都能抑制H. pylori的生長(zhǎng)和尿素酶活性。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明乳酸菌發(fā)酵上清液、活菌和死菌均能夠通過(guò)排阻作用抑制H. pylori粘附于SGC7901細(xì)胞(抑制率達(dá)到50%),但是競(jìng)爭(zhēng)和替代作用只能通過(guò)上清液和活菌起作用(抑制率達(dá)30-40%),死菌無(wú)作用或者作用非常小。同時(shí),乳酸菌可以抑制由H. pylori誘導(dǎo)的SGC7901細(xì)胞分泌IL-8。 通過(guò)抑菌試驗(yàn)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)以及兩種品系的小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn),LP18和LGChen干預(yù)H. pylori感染的可能機(jī)制:當(dāng)乳酸菌與H. pylori直接接觸時(shí),一方面可以利用乳酸菌的代謝物抑制H. pylori的生長(zhǎng)和尿素酶活性,從而讓H. pylori失去在酸性環(huán)境中賴以生存的條件,另一方面可以通過(guò)乳酸菌的空間位阻作用阻礙H. pylori的定植,同時(shí)通過(guò)交互凝集作用把H. pylori共同沉淀排出體外;當(dāng)乳酸菌與H. pylori沒(méi)有接觸時(shí),乳酸菌可以通過(guò)其抗氧化作用和抑制H. pylori誘導(dǎo)上皮細(xì)胞分泌IL-8,保護(hù)機(jī)體避免因H. pylori感染引起的氧化損傷而造成的病變。 研究LP18和LGChen在乳品中的應(yīng)用,結(jié)果表明LP18和LGChen不能利用乳糖發(fā)酵,需添加葡萄糖方可在牛乳中生長(zhǎng),但LGChen在此條件下比LP18生長(zhǎng)好;兩株菌的發(fā)酵乳在4℃條件下可保存21d,不發(fā)生顯著性變化;LP18或LGChen分別與商業(yè)菌株(LB和ST)復(fù)合發(fā)酵,對(duì)發(fā)酵乳不產(chǎn)生不良影響,表明LP18或LGChen可以應(yīng)用在乳品中,開(kāi)發(fā)新產(chǎn)品。
【圖文】：

潛在的益生菌拮抗 H. pylori 感染。從實(shí)驗(yàn)可知，L. plani 生長(zhǎng)的能力，并且可以顯著性降低 H. pylori 的尿素酶制 H. pylori 生長(zhǎng)的特性，篩選出 L. plantarum 18 和 Llori 感染的乳酸菌。A-1.0 -0.8 -0.6 -0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0-1.0-0.8-0.6-0.4-0.20.00.20.40.60.81.0PC2(24.17%)PC 1 ( 28.87% )抑菌力交互凝聚力疏水作用耐酸力自凝集力尿素酶活力

的組織學(xué)病理改變也隨之好轉(zhuǎn)。本實(shí)驗(yàn)中，H. pylori感染的小鼠的確引發(fā)中重度的炎癥，同時(shí)經(jīng)過(guò)三聯(lián)法藥物治療后，炎癥顯著減輕。由于抗生素治療引起許多不良癥狀，如耐藥性菌株出現(xiàn)，腹瀉、腹痛等并發(fā)癥產(chǎn)生，給人們?cè)斐珊艽蟮睦�。根�?jù) H. pylori 感染率高，而發(fā)病率低的特性，對(duì)于那些感染H. pylori 而未發(fā)病的人群，人們提倡用微生態(tài)制劑或是食療法來(lái)預(yù)防或是防治 H. pylori感染。近十多年來(lái)，人們尋求多種天然產(chǎn)物干預(yù) H. pylori 感染，如植物提取物，乳鐵蛋白以及益生菌等。其中，益生菌由于具有耐酸性、調(diào)節(jié)腸胃微生態(tài)菌群、調(diào)高免疫力、抗氧化抗癌等功效，備受關(guān)注。不少研究者證實(shí)益生菌如嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌和格氏乳桿菌等具有降低 H. pylori 定植量和尿素酶活性，減輕 H. pylori 感染引起的炎癥。減輕炎癥的機(jī)制雖然不明確，但是主要可能是由于降低 H. pylori 定植量、提高宿主免疫系統(tǒng)、降低 H. pylori 毒力因子表達(dá)等幾個(gè)方面。本文研究也發(fā)現(xiàn)，乳酸菌能夠減輕 H. pylori感染引發(fā)的炎癥，由于本實(shí)驗(yàn)是對(duì)小鼠先進(jìn)行乳酸菌干預(yù)，而后再進(jìn)行 H. pylori 感染，同時(shí)在感染過(guò)程中也不斷補(bǔ)充乳酸菌，，因此減輕炎癥的原因可能與降低 H. pylori 定植量和尿素酶活性有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R371

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 寧佳;具有抑制單核細(xì)胞增生李斯特菌的乳酸菌的篩選及抑菌性質(zhì)的研究[D];江南大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2518673