【摘要】：目的構(gòu)建人源抗EV71病毒Fab噬菌體抗體庫,篩選具有中和活性的人源單克隆抗體,為EV71感染引起的手足口病臨床診斷及治療奠定基礎(chǔ)。方法從成人志愿者抗凝血中分離外周淋巴細胞,提取總RNA并逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。以cDNA為模板,用人源IgG Fab段基因引物擴增輕鏈及重鏈Fd區(qū)基因,分步克隆至pComb3載體,構(gòu)建Fab噬菌體抗體庫。以SP70為抗原對Fab噬菌體抗體庫進行富集篩選,將獲得的重組噬菌體感染XL1-Blue菌并誘導表達,用SP70對誘導表達的菌上清進行篩選。結(jié)果共獲得3株輕、重鏈基因組合序列不同的克隆,且這3株Fab抗體可特異性結(jié)合SP70多肽。結(jié)論成功構(gòu)建人源抗EV71病毒Fab噬菌體抗體庫,并從中篩選出3株針對EV71病毒結(jié)構(gòu)蛋白VP1上中和線性表位SP70的特異性人源Fab抗體,為研發(fā)新的手足口病診斷和治療工具奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to construct a human anti-EV71 virus Fab bacteriophage antibody library and screen human monoclonal antibodies with neutralizing activity, so as to lay a foundation for clinical diagnosis and treatment of hand, foot and mouth disease caused by EV71 infection. Methods Peripheral lymphocytes were isolated from anticoagulant blood of adult volunteers, total RNA was extracted and reverse transcribed into cDNA.. Using cDNA as template, light chain and heavy chain Fd region genes were amplified by human IgG Fab fragment primers and cloned into pComb3 vector step by step to construct Fab bacteriophage antibody library. Fab bacteriophage antibody library was enriched and screened with SP70 as antigen. the recombinant bacteriophage was infected with XL1-Blue strain and induced to express, and the supernatant of the expressed strain was screened by SP70. Results three clones of light and heavy chain gene combination sequences were obtained, and the three Fab antibodies could specifically bind to SP70 peptides. Conclusion Human anti-EV71 virus Fab bacteriophage antibody library was successfully constructed, and three specific human Fab antibodies against EV71 virus structural protein VP1 neutralizing linear epitope SP70 were screened out, which laid a foundation for the development of a new diagnostic and therapeutic tool for hand, foot and mouth disease.
【作者單位】： 福建省廈門市湖里區(qū)疾病預防控制中心;福建醫(yī)科大學公共衛(wèi)生學院;福建省疾病預防控制中心;
【基金】：國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃(863計劃)(No.2011AA02A114) 福建省自然科學基金(No.2010J01115)聯(lián)合資助~~
【分類號】：R392

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本文編號：2518286