【摘要】：目的： 國(guó)內(nèi)中醫(yī)藥防治艾滋病的基礎(chǔ)研究相對(duì)于西醫(yī)藥防治艾滋病的同類研究起步晚,目前尚屬探索階段。利用適宜的動(dòng)物艾滋病模型進(jìn)行艾滋病研究具高度的可控性、可靠性、可重復(fù)性,同時(shí)可縮短研究進(jìn)程,減少干擾因素,降低試驗(yàn)風(fēng)險(xiǎn)。在某種程度上來(lái)說(shuō)艾滋病研究中,采用動(dòng)物艾滋病模型研究比采用人體試驗(yàn)進(jìn)行研究更易實(shí)現(xiàn)。國(guó)內(nèi)在上世紀(jì)90年代后期已經(jīng)開(kāi)始利用動(dòng)物模型進(jìn)行艾滋病的研究,但具有中醫(yī)證特征的艾滋病動(dòng)物模型研究方面屬于空白,這對(duì)中醫(yī)藥治療艾滋病療效的科學(xué)客觀評(píng)價(jià)帶來(lái)了明顯障礙。恒河猴艾滋病模型為艾滋病研究中動(dòng)物模型的金標(biāo)準(zhǔn),并被世界衛(wèi)生組織WHO所推薦。國(guó)外研究多采用印度恒河猴,但由于印度恒河猴目前數(shù)量減少、價(jià)格昂貴、出口受?chē)?yán)格限制,已經(jīng)不能滿足日益增長(zhǎng)的科研需求,這給開(kāi)展艾滋病的深入研究帶來(lái)了明顯阻礙。越來(lái)越多的研究采用來(lái)源相對(duì)充足的中國(guó)恒河猴替代印度恒河猴進(jìn)行艾滋病研究。本研究在國(guó)家“十一五”科技重大專項(xiàng)資助下,對(duì)中國(guó)恒河猴艾滋病模型以及具中醫(yī)證特征的中國(guó)恒河猴艾滋病模型開(kāi)展深入詳細(xì)研究,并利用這些動(dòng)物艾滋病模型進(jìn)行中醫(yī)藥治療艾滋病方面的研究。希望通過(guò)上述研究后實(shí)現(xiàn)以下的目標(biāo)：(1)通過(guò)開(kāi)展對(duì)中國(guó)恒河猴實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)規(guī)范的標(biāo)準(zhǔn)化制定及基礎(chǔ)背景的研究,進(jìn)而深入研究中國(guó)恒河猴艾滋病模型/病證復(fù)合模型,深化中醫(yī)對(duì)艾滋病的認(rèn)知；(2)在中醫(yī)理論指導(dǎo)下采用猴艾滋病病證復(fù)合模型觀察中藥干預(yù)的效果,探討中醫(yī)理論對(duì)艾滋病治療的意義；(3)采用猴艾滋病模型對(duì)中藥進(jìn)行療效優(yōu)化,為進(jìn)一步進(jìn)行新藥開(kāi)發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)；(4)通過(guò)中西藥代謝性相互作用研究,為進(jìn)一步探討中西醫(yī)結(jié)合治療艾滋病的合理性提供范例及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 1、文獻(xiàn)研究：使用ENDNOTE軟件收集國(guó)內(nèi)外主流醫(yī)學(xué)雜志文獻(xiàn),詳細(xì)閱讀后剔除重復(fù)或者資料不齊全文獻(xiàn),對(duì)文獻(xiàn)進(jìn)行整理分類和有效信息集中,最后選擇有代表性文獻(xiàn),進(jìn)行總結(jié)歸納,了解現(xiàn)代醫(yī)學(xué)在艾滋病研究方面的最新?tīng)顩r。文獻(xiàn)研究主要集中在三個(gè)方面,具體為艾滋病西醫(yī)研究進(jìn)展方面、艾滋病中醫(yī)研究進(jìn)展方面、動(dòng)物疾病模型在中醫(yī)藥研究中的應(yīng)用進(jìn)展方面。在完成文獻(xiàn)研究后提出本實(shí)驗(yàn)研究的整體設(shè)計(jì)思路。 2、中國(guó)恒河猴實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)規(guī)范的標(biāo)準(zhǔn)化制定及基礎(chǔ)背景研究：本部分研究將進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)規(guī)范化的研究,保證實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果的準(zhǔn)確、可靠、可重復(fù)性；同時(shí)對(duì)中國(guó)恒河猴基礎(chǔ)背景進(jìn)行研究,深入了解了動(dòng)物模型的研究背景。研究具體分為中國(guó)恒河猴艾滋病動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)研究相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)操作／作業(yè)流程(SOP)制定、健康中國(guó)恒河猴指標(biāo)參考范圍的研究?jī)纱蟛糠�。其中中�?guó)恒河猴艾滋病動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)研究相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)操作／作業(yè)流程制定部分為主要針對(duì)中國(guó)恒河猴動(dòng)物試驗(yàn)、檢測(cè)、操作、觀察規(guī)范化進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)制定；而健康中國(guó)恒河猴指標(biāo)參考范圍的研究部分采用健康中國(guó)恒河猴橫斷面調(diào)查研究,制定在本試驗(yàn)研究條件下多項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)正常參考范圍。 3、中國(guó)恒河猴艾滋病動(dòng)物模型研究：本部分研究主要針對(duì)中國(guó)恒河猴艾滋病動(dòng)物模型進(jìn)行深入細(xì)化研究,研究涉及猴艾滋病的疾病各階段。研究第一步是對(duì)急性感染過(guò)程中體質(zhì)量指標(biāo)、T淋巴細(xì)胞亞群指標(biāo)、病毒載量指標(biāo)、血常規(guī)指標(biāo)等多項(xiàng)指標(biāo)的變化情況進(jìn)行分析比較；研究第二步對(duì)長(zhǎng)期感染過(guò)程中T淋巴細(xì)胞亞群指標(biāo)、病毒載量指標(biāo)、中醫(yī)證候?qū)W指標(biāo)以及臨床癥狀變化情況等進(jìn)行長(zhǎng)期序貫性監(jiān)測(cè)；研究第三步是對(duì)中國(guó)恒河猴艾滋病動(dòng)物模型生存狀況的調(diào)查；研究第四步是綜合前三步試驗(yàn)結(jié)果對(duì)猴艾滋病模型進(jìn)行中醫(yī)基本病因病機(jī)的探索。通過(guò)這些研究試圖找到疾病變化的規(guī)律特征,在此基礎(chǔ)上為中醫(yī)藥治療艾滋病提供理論指導(dǎo)。 4、中國(guó)恒河猴艾滋病病證復(fù)合模型研究：本部分研究主要針對(duì)具中醫(yī)證特征的中國(guó)恒河猴艾滋病動(dòng)物模型進(jìn)行深入細(xì)化研究。研究的內(nèi)容為創(chuàng)建具中醫(yī)脾虛證特征的中國(guó)恒河猴艾滋病病證復(fù)合模型和具中醫(yī)腎虛證特征的中國(guó)恒河猴艾滋病病證復(fù)合模型,通過(guò)試驗(yàn)對(duì)比分析病證復(fù)合模型的指標(biāo)變化規(guī)律特征,同時(shí)比較中醫(yī)療法中的補(bǔ)腎療法、補(bǔ)脾療法、清熱療法在艾滋病治療中的療效。并對(duì)各種療法的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)進(jìn)行匯總分析,對(duì)艾滋病治療方案提出優(yōu)化后的具體方藥。 5、研究成果拓展應(yīng)用：本部分研究利用前面研究的成果進(jìn)行了拓展應(yīng)用。利用總結(jié)出的基本病因病機(jī)選擇藥物測(cè)試艾滋病晚期狀態(tài)下中醫(yī)藥干預(yù)的效果；通過(guò)中西藥代謝性相互作用研究,測(cè)試實(shí)驗(yàn)進(jìn)程中優(yōu)化后的中醫(yī)藥組方對(duì)植物單體化學(xué)物/西藥在各種模型及健康志愿者中的增效作用。 結(jié)果： 1、中醫(yī)藥防治艾滋病療效顯著,不易產(chǎn)生耐藥性,毒副反應(yīng)較少或較輕。恒河猴艾滋病模型是研究艾滋病的動(dòng)物模型“金標(biāo)準(zhǔn)”,廣泛應(yīng)用于艾滋病研究的各個(gè)方面。中醫(yī)藥研究中廣泛使用動(dòng)物模型進(jìn)行具中醫(yī)證特征的動(dòng)物模型構(gòu)建。利用中國(guó)恒河猴創(chuàng)建具中醫(yī)證特征的艾滋病動(dòng)物模型,進(jìn)行中醫(yī)藥治療艾滋病療效的科學(xué)客觀評(píng)價(jià)是必要和可行的方案。研究整體設(shè)計(jì)思路第一步為中國(guó)恒河猴實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)規(guī)范的標(biāo)準(zhǔn)化制定及基礎(chǔ)背景的研究；第二步為中國(guó)恒河猴艾滋病動(dòng)物模型研究；第三步為中國(guó)恒河猴艾滋病病證復(fù)合模型研究；第四步為利用不同的動(dòng)物艾滋病模型進(jìn)行抗艾滋病中藥復(fù)方優(yōu)化的研究。 2、在中國(guó)恒河猴實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)規(guī)范的標(biāo)準(zhǔn)化制定及基礎(chǔ)背景的研究中,首先制定出1、恒河猴動(dòng)物試驗(yàn)SOP；2、基礎(chǔ)研究試驗(yàn)檢測(cè)SOP；3、基礎(chǔ)研究觀察SOP；4、動(dòng)物模型構(gòu)建SOP；5、試驗(yàn)藥物制作及使用SOP；6、恒河猴疾病防治SOP；7、試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理SOP。對(duì)健康中國(guó)恒河猴研究后確立了血常規(guī)13項(xiàng)、肝腎功能4項(xiàng)、中醫(yī)證學(xué)相關(guān)12項(xiàng)、T淋巴細(xì)胞亞群7項(xiàng)等共36個(gè)監(jiān)測(cè)指標(biāo)的正常參考范圍。 3、對(duì)中國(guó)恒河猴艾滋病模型基礎(chǔ)背景進(jìn)行了深入的研究。對(duì)艾滋病急性感染期病毒載量、T淋巴細(xì)胞亞群等指標(biāo)變化分析表明：中國(guó)恒河猴艾滋病模型血漿病毒峰值在10～14天,隨后病毒載量整體出現(xiàn)波動(dòng)下降的趨勢(shì)。而T淋巴細(xì)胞亞群中CD4+%呈現(xiàn)下降趨勢(shì),CD4+/CD8+比值感染后在病毒載量高峰時(shí)期出現(xiàn)最低值,隨后出現(xiàn)上升趨勢(shì)。CD8+%則在急性感染階段出現(xiàn)上升趨勢(shì)。對(duì)中國(guó)恒河猴艾滋病模型感染18個(gè)月長(zhǎng)期觀察顯示：T淋巴細(xì)胞亞群CD4+%、CD4+/CD8+比值隨著感染時(shí)間延長(zhǎng)呈現(xiàn)波動(dòng)下降趨勢(shì)；病毒載量在感染后2-3個(gè)月進(jìn)入病毒調(diào)定點(diǎn),此后病毒載量一般在病毒調(diào)定點(diǎn)上下0.5個(gè)對(duì)數(shù)波動(dòng)；而中醫(yī)證學(xué)相關(guān)指標(biāo)皮質(zhì)醇(Cortisol, Cor)在感染后隨著感染時(shí)間延長(zhǎng)呈現(xiàn)波動(dòng)下降趨勢(shì)。對(duì)因艾滋病死亡的中國(guó)恒河猴艾滋病模型數(shù)據(jù)分析表明：CD4+%、CD4+/CD8+比值、CD4+計(jì)數(shù)與病情密切相關(guān)；T3指標(biāo)下降程度與病情惡化程度密切相關(guān),Cor水平則在死亡前1-2個(gè)月出現(xiàn)上升趨勢(shì)。對(duì)中國(guó)恒河猴艾滋病模型生存情況分析表明采用SIVmac239病毒株創(chuàng)建的猴艾滋病模型中位生存時(shí)間為2年左右。對(duì)艾滋病動(dòng)物模型中醫(yī)基本病因病機(jī)探索結(jié)果表明：本病的病因?yàn)椤鞍啊�。模型在急性感染期病機(jī)表現(xiàn)為外邪侵?jǐn)_,邪正相爭(zhēng)；在病毒潛伏期表現(xiàn)為邪毒內(nèi)伏,暗傷正氣；艾滋病前期表現(xiàn)為邪氣亢盛,正氣虧損；典型艾滋病期表現(xiàn)為正氣虧虛。 4、通過(guò)不同的復(fù)合模型構(gòu)建方案,試驗(yàn)成功首創(chuàng)了兩種共四類具中醫(yī)證特征的艾滋病病證復(fù)合模型。其中兩種病證復(fù)合模型為中國(guó)恒河猴脾虛艾滋病病證復(fù)合模型和中國(guó)恒河猴腎虛艾滋病病證復(fù)合模型。四類為脾虛Ⅰ型病證復(fù)合模型(簡(jiǎn)稱脾虛Ⅰ型)、脾虛Ⅱ型病證復(fù)合模型(簡(jiǎn)稱脾虛Ⅱ型)、腎虛工型病證復(fù)合模型(簡(jiǎn)稱腎虛Ⅰ型)、腎虛Ⅱ型病證復(fù)合模型(簡(jiǎn)稱腎虛Ⅱ型)。其中中國(guó)恒河猴脾虛艾滋病病證復(fù)合模型臨床癥狀表現(xiàn)出攝食減少、體質(zhì)量增長(zhǎng)緩慢、腹瀉等,血液學(xué)指標(biāo)三碘甲腺原氨酸(T3)、CD4+%、CD4+/CD8+比值水平均顯著下降,而中國(guó)恒河猴腎虛艾滋病病證復(fù)合模型臨床癥狀表現(xiàn)出畏寒、精神萎靡、消瘦、腹瀉等,血液學(xué)指標(biāo)三碘甲腺原氨酸(T3)、皮質(zhì)醇(Cor)、CD4+%、CD4+/CD8+比值水平均顯著下降。對(duì)四類病證復(fù)合模型深入研究后發(fā)現(xiàn)脾虛工型模型在復(fù)合模型創(chuàng)建階段中建模因素對(duì)艾滋病病情影響不顯著,但建模后造模因素對(duì)治療階段病情產(chǎn)生顯著影響,能加速艾滋病病情的進(jìn)展。在此類艾滋病模型中補(bǔ)脾法療效優(yōu)于清熱法療效；脾虛Ⅱ型模型研究結(jié)果顯示脾虛Ⅱ型與脾虛Ⅰ型病情進(jìn)展相類似,但比脾虛Ⅰ型病情更為嚴(yán)重,但在脾虛Ⅱ型試驗(yàn)中補(bǔ)脾法療效并不優(yōu)于清熱法；腎虛Ⅰ型模型研究結(jié)果顯示復(fù)合模型創(chuàng)建階段中建模因素對(duì)艾滋病病情影響不顯著,但建模后造模因素對(duì)治療及停藥期影響顯著,能加速病情的進(jìn)展。腎虛Ⅰ型試驗(yàn)中補(bǔ)腎法療效優(yōu)于清熱法療效,特別是補(bǔ)腎法在停藥后8個(gè)月療效與清熱法差異非常顯著；腎虛Ⅱ型模型研究結(jié)果顯示腎虛Ⅱ型比腎虛Ⅰ型病情嚴(yán)重、腎虛Ⅱ型在復(fù)合模型創(chuàng)建期間造模因素對(duì)艾滋病病情影響顯著,腎虛Ⅱ型試驗(yàn)中補(bǔ)腎法療效優(yōu)于清熱法、腎虛Ⅱ型非治療情況下病情進(jìn)展更加迅速。在總結(jié)艾滋病動(dòng)物模型/中國(guó)恒河猴艾滋病病證復(fù)合模型中醫(yī)干預(yù)的經(jīng)驗(yàn)基礎(chǔ)上,針對(duì)猴艾滋病的基本病機(jī),對(duì)原補(bǔ)腎處方進(jìn)行藥物優(yōu)化,優(yōu)化出新的補(bǔ)腎治療方藥(優(yōu)化后組方)。 5、在研究成果拓展應(yīng)用中,在艾滋病中醫(yī)病因病機(jī)探索研究而歸納出的結(jié)論指導(dǎo)下,采用大補(bǔ)腎(元)陽(yáng)藥物參附注射液對(duì)中國(guó)恒河猴艾滋病晚期模型進(jìn)行干預(yù),成功的延長(zhǎng)了模型的生存時(shí)間,減輕了臨床癥狀,延緩了病情的進(jìn)展。另外對(duì)優(yōu)化后組方聯(lián)合植物單體化學(xué)物治療猴艾滋病動(dòng)物模型的結(jié)果顯示：中藥和植物單體化學(xué)物E聯(lián)用能明顯增強(qiáng)植物單體化學(xué)物E的療效,同時(shí)無(wú)明顯毒副作用,具有良好的新藥開(kāi)發(fā)前景。進(jìn)一步進(jìn)行的優(yōu)化后組方對(duì)猴艾滋病動(dòng)物模型/健康志愿者服用蛋白酶抑制劑茚地那韋血藥濃度影響的試驗(yàn)提示：優(yōu)化后組方和茚地那韋聯(lián)用能明顯增加茚地那韋血藥濃度,具減緩健康志愿者茚地那韋清除率作用。 結(jié)論： 1、文獻(xiàn)研究表明了中醫(yī)藥在艾滋病防治方面具有明顯療效,對(duì)中醫(yī)藥防治艾滋病方面進(jìn)行深入研究可能會(huì)取得較大的進(jìn)展或突破。明確了在中醫(yī)藥防治艾滋病研究中采用適宜的恒河猴艾滋病動(dòng)物模型進(jìn)行研究比采用人體試驗(yàn)更容易實(shí)現(xiàn)。而且動(dòng)物試驗(yàn)研究具高度可控、可靠、可重復(fù)性,可縮短研究進(jìn)程,減少干擾因素,降低試驗(yàn)風(fēng)險(xiǎn)。明確了中國(guó)恒河猴創(chuàng)建具中醫(yī)證特征的艾滋病病證復(fù)合模型的理論可行性。 2、中國(guó)恒河猴實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)規(guī)范的標(biāo)準(zhǔn)化制定為本項(xiàng)目各試驗(yàn)的規(guī)范化研究提供了保證。制定出健康中國(guó)恒河猴多項(xiàng)指標(biāo)正常參考范圍,為實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確判斷提供了相關(guān)試驗(yàn)依據(jù)。 3、中國(guó)恒河猴艾滋病動(dòng)物模型能較好反應(yīng)艾滋病病情變化特征,可適用于艾滋病多種類型的研究中。中國(guó)恒河猴艾滋病模型艾滋病的病因?yàn)榘?疾病過(guò)程病機(jī)變化整體表現(xiàn)為艾邪侵?jǐn)_,邪正相爭(zhēng),隨后邪毒內(nèi)伏,暗傷正氣,之后邪氣亢盛,正氣虧損,最后元?dú)馓澨?五臟六腑氣血陰陽(yáng)虧竭。 4、具中醫(yī)證特征的艾滋病病證復(fù)合模型因模型不一樣,在艾滋病病情進(jìn)展方面和中藥干預(yù)效果方面也不完全一致。試驗(yàn)整體顯示出具中醫(yī)證特征的艾滋病病證復(fù)合模型病情比單純的艾滋病模型嚴(yán)重。治療效果比較中表明采用中藥治療遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于不治療效果,其中補(bǔ)腎療法優(yōu)于清熱療法,而補(bǔ)脾療法與清熱療法在不同艾滋病動(dòng)物模型中療效不同。 5、研究成果的拓展應(yīng)用證實(shí)了中醫(yī)藥在艾滋病治療中的療效,也再次證實(shí)了中西醫(yī)聯(lián)合治療艾滋病的益處。對(duì)從理論上說(shuō)明中藥聯(lián)合植物單體化學(xué)物／西藥治療艾滋病的合理性提供了范例和研究思路。
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R-332;R285.5

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 王士維;中國(guó)恒河猴脾虛證艾滋病動(dòng)物模型先天免疫因子MBL和α-防御素的研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：2518124