DENV-2感染小鼠ANA-1巨噬細胞補體mRNA動態(tài)和細胞極化的初探
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【摘要】:目的:探討DENV-2對小鼠ANA-1巨噬細胞胞內(nèi)補體相關(guān)組分mRNA和細胞極化動態(tài)的影響。方法:用C6/36細胞增殖DENV-2, RT-PCR鑒定病毒,TCID50滴定病毒效價。分別以LPS/IL-4體外刺激小鼠ANA-1細胞3h、8h、12h及24h,Real-time PCR法檢測IL-1β、CCL2、Arg-1細胞極化指標的變化,檢測胞內(nèi)C3、CfB、CRIg、Clq補體成分mRNA的動態(tài)。用DENV-2感染M0/M2極化的ANA-1巨噬細胞,Real-time PCR檢測細胞的極化指標、NS1基因和Mavs抗病毒基因的表達,以及胞內(nèi)補體C3、CRIg、Clq mRNA的動態(tài)。結(jié)果:1)細胞極化后補體mRNA動態(tài):刺激3h后LPS組IL-1β、 CCL2 mRNA表達上調(diào),12h達高峰;IL-4組中以Arg-1 mRNA表達上調(diào)顯著,于24h達高峰,提示LPS組細胞向MI方向極化,IL-4組向M2方向極化。兩極化組的相應補體組分均表現(xiàn)為不同程度的上調(diào),其中:①C1q、C3在ANA-1向M2極化8h后上調(diào)顯著,12h時達高峰(2-△△ct分別為94.9±12.9和11.34±2.4);②CfB因子在M1極化組中上調(diào)顯著,12h表達上調(diào)達高峰(2-△△ct為61.4±6.2);③CRIg在兩組中均在24h時表達上調(diào)且具有顯著性差異(P0.05)。2)DENV-2感染M0/M2狀態(tài)的ANA-I細胞后補體mRNA動態(tài):①感染后C1qmRNA表達均受抑制,且M2感染組比M0感染組C1q表達均較高(差異具有統(tǒng)計學意義);②3h時M2感染組C3mRNA表達受抑制,12h時上調(diào)2-△△ct為5.08±2.25。與M0感染組相比,12h和24h時兩組間差異有統(tǒng)計學意義;③除12h檢測點外,DENV-2感染后CRIg表達均上調(diào)或在正常水平。④DENV-2感染后M2細胞CfB基因表達均被下調(diào),但與感染M0組比較兩組無明顯差異。3) DENV-2感染后M0/M2狀態(tài)的ANA-1細胞后細胞極化的動態(tài):DENV-2感染M0細胞后IL-1β、CCL2和Arg-1表達均受抑制,Arg-I基因于24h時恢復正常。DENV感染逆轉(zhuǎn)M2細胞Arg-I基因的表達。4)感染后胞內(nèi)NS1、Mavs mRNA的動態(tài):24h內(nèi)各感染組間NS1和Mavs基因的表達差異無統(tǒng)計學意義。結(jié)論:1)不同極化ANA-1細胞表達補體成分mRNA不同:M1極化細胞較高表達CfB,M2極化細胞高表達C1q、C3和CRIg。2) DENV-2感染不同極化狀態(tài)的細胞后補體mRNA表達的差異:DENV-2下調(diào)M2型ANA-1細胞C1q和C3的表達,而CRIg保持正常水平或表達上調(diào);與感染的M0細胞相比,C1q、CRIg在M2感染組相對上調(diào)。3)DENV-2可逆轉(zhuǎn)或延遲感染細胞的極化。4)感染后胞內(nèi)補體mRNA的動態(tài)可能與病毒增殖、細胞抗病毒反應Mavs的變化無關(guān)。
【關(guān)鍵詞】:DENV-2 巨噬細胞ANA-1 補體 NS1 Mavs
【學位授予單位】:貴州醫(yī)科大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2016
【分類號】:R392
【目錄】:
- 中文摘要4-6
- 英文摘要6-9
- 略縮詞表9-10
- 引言10-11
- 材料與方法11-19
- 結(jié)果19-33
- 討論33-39
- 結(jié)論39-40
- 參考文獻40-44
- 綜述44-60
- 參考文獻53-60
- 作者簡歷60-61
- 附件61-63
- 致謝63-64
- 學位論文數(shù)據(jù)集64
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本文編號:251715
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