本文關(guān)鍵詞：IGF-1對肌萎縮側(cè)索硬化細胞穩(wěn)轉(zhuǎn)模型的保護作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：肌萎縮側(cè)索硬化(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)是一種進行性、致死性的神經(jīng)系統(tǒng)變性性疾病,主要侵犯腦和脊髓的上、下運動神經(jīng)元,最終導(dǎo)致癱瘓和死亡。然而其確切的發(fā)病機制目前仍不清楚并且尚無行之有效的治療手段。最近,在ALS和含有泛素陽性包涵體的額顳葉癡呆患者的運動神經(jīng)元及膠質(zhì)細胞中均發(fā)現(xiàn)了異常泛素化的蛋白聚集體,主要成分是43KD的TAR DNA結(jié)合蛋白(TDP43),它由TARDBP基因編碼。正常情況下TDP-43主要分布于細胞核,參與剪切和轉(zhuǎn)錄調(diào)控。TDP43由414個氨基酸組成,包括兩個RNA識別區(qū)域和一個富含甘氨酸的羧基末端區(qū)域。最近研究表明TARDBP突變是ALS較為常見的一種基因突變,并且?guī)缀跛信cALS相關(guān)的TDP43突變都源于其羧基末端的甘氨酸富含區(qū)域。然而目前我們?nèi)圆磺宄?突變的TDP-43是通過毒性功能的獲得還是正常功能的丟失來介導(dǎo)神經(jīng)元退行性變的。突變的TDP43可以被截斷,產(chǎn)生一個25KD的羧基末端片段:TDP25,它更容易錯誤折疊和聚集,在ALS的病理過程中發(fā)揮著重要作用。據(jù)文獻報道,穩(wěn)定表達TDP25能夠誘導(dǎo)細胞產(chǎn)生顯著的氧化應(yīng)激及凋亡,具有細胞毒性作用。運動神經(jīng)元正常的生理功能依賴于神經(jīng)生長因子持續(xù)、嚴格的調(diào)控,在運動神經(jīng)元不同的發(fā)育階段,神經(jīng)生長因子參與神經(jīng)元增殖、軸突生長、突觸形成等重要生理過程。胰島素樣生長因子-1(IGF-1)是一種神經(jīng)生長因子,屬于胰島素家族。由于它在生長及代謝方面的作用,IGF-1已經(jīng)用于生長因子缺乏和糖尿病等疾病的治療。目前,越來越多的人開始關(guān)注它對神經(jīng)變性性疾病的治療作用。最近研究表明IGF-1對中樞及外周神經(jīng)系統(tǒng)都具有神經(jīng)保護作用。IGF-1可以激活PI3K/Akt和P44/42 MAPK信號通路,產(chǎn)生一系列的細胞保護效應(yīng),包括:細胞增殖、分化、抑制凋亡。另外,JPK、P38 MAPK和m TOR信號通路也與IGF-1相關(guān)。然而IGF-1信號系統(tǒng)十分復(fù)雜,受IGF-1受體(IGF-1R)及IGF-1結(jié)合蛋白(IGFBPs)等多種因子的調(diào)控。對IGF-1系統(tǒng)的深入研究有可能為ALS治療提供一個新的靶點。目的:研究IGF-1對穩(wěn)定表達TDP25蛋白的NSC34細胞的保護作用。方法:本研究采用TDP25穩(wěn)轉(zhuǎn)的NSC34細胞作為肌萎縮側(cè)索硬化的細胞模型。用不同濃度(0ng/ml,0.1ng/ml,1ng/ml,10ng/ml,100ng/ml,1000ng/ml)IGF-1干預(yù)穩(wěn)轉(zhuǎn)的NSC34細胞24小時,顯微鏡下觀察不同濃度IGF-1干預(yù)后細胞形態(tài)變化,并通過CCK-8試劑盒檢測不同濃度IGF-1對細胞活力的影響,確定IGF-1最適藥物濃度;采用適當(dāng)濃度的IGF-1干預(yù)細胞24小時后,通過LDH及MDA試劑盒檢測IGF-1是否能減少TDP25產(chǎn)生的細胞毒性;采用適當(dāng)濃度的IGF-1干預(yù)細胞24小時后,通過Western免疫印記法檢測IGF-1對caspase3(凋亡標(biāo)記蛋白)和HO-1(抗氧化蛋白)表達的影響。結(jié)果:(1)通過免疫印跡法檢測到穩(wěn)轉(zhuǎn)TDP25質(zhì)粒的NSC34細胞中有外源性TDP25蛋白的表達,成功建立ALS細胞穩(wěn)轉(zhuǎn)模型。(2)不同濃度(0-1000ng/ml)IGF-1干預(yù)穩(wěn)轉(zhuǎn)NSC34細胞后,鏡下觀察發(fā)現(xiàn)100ng/ml IGF-1能顯著促進細胞軸突生長,維持細胞良好形態(tài);CCK-8檢測發(fā)現(xiàn)除0.1ng/ml IGF-1外,其他不同濃度IGF-1給藥組均能提高細胞活力,并且10ng/ml及100ng/ml的IGF-1效果更好,所以最終我們選擇10ng/ml和100ng/ml作為IGF-1的最適濃度。依次用0ng/ml、10ng/ml(低劑量)、100ng/ml(高劑量)IGF-1干預(yù)穩(wěn)轉(zhuǎn)NSC34細胞24小時后,分別檢測不同IGF-1濃度下細胞毒性LDH及MDA水平變化,結(jié)果顯示與對照組比,給藥組兩個濃度下的IGF-1均能顯著降低LDH及MDA水平,且兩個給藥劑量組之間無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。(3)依次用0ng/ml、10ng/ml(低劑量)、100ng/ml(高劑量)IGF-1干預(yù)穩(wěn)轉(zhuǎn)NSC34細胞24小時后,通過western印跡檢測caspase3、HO-1蛋白表達水平變化,結(jié)果顯示,與對照組相比,給藥組兩個濃度下的IGF-1均能抑制caspase3表達水平,并上調(diào)HO-1表達水平,而且高劑量組作用效果優(yōu)于低劑量組。結(jié)論:在穩(wěn)定表達TDP25蛋白的ALS細胞模型中,IGF-1能夠降低TDP25產(chǎn)生的細胞毒性,抑制凋亡和氧化應(yīng)激,且高劑量的IGF-1能夠促進細胞軸突生長,具有明顯的細胞保護作用。
【關(guān)鍵詞】：IGF-1 肌萎縮側(cè)索硬化 TDP25 caspase3 HO-1
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R744.8;R-332
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮寫10-11
• 前言11
• 材料與方法11-21
• 結(jié)果21-23
• 附圖23-29
• 討論29-31
• 結(jié)論31
• 參考文獻31-35
• 綜述 胰島素樣生長因子1對肌萎縮側(cè)索硬化的研究進展35-46
• 參考文獻41-46
• 致謝46-47
• 個人簡歷47

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王志均;消化道的細胞保護作用[J];生理科學(xué);1986年01期

2 吳健;;前列腺素對消化器官的細胞保護作用[J];鐵道醫(yī)學(xué);1986年04期

3 朱文玉;;生長抑素的細胞保護作用及其機制的研究[J];醫(yī)學(xué)研究通訊;1994年06期

4 田培燕,鄧祖國;胃腸道的細胞保護[J];黔南民族醫(yī)專學(xué)報;1999年04期

5 梁名踐,蔣茨蕾,魯宏,竇志勇,孫敏;新生小牛血清在精制地鼠腎細胞狂犬疫苗組織培養(yǎng)中對腎細胞保護作用的觀察[J];中國媒介生物學(xué)及控制雜志;2001年02期

6 張建福;上皮生長因子對胃粘膜的細胞保護作用[J];生理科學(xué)進展;1982年03期

7 王志均;消化道的細胞保護[J];北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;1990年02期

8 陳長志;王一山;;山莨菪堿的細胞保護作用及其機制[J];上海醫(yī)學(xué);1990年02期

9 燕福生,宋學(xué)英,陳致清,張錦楠,閻淑蓮;甘草對人紅細胞保護作用的研究[J];中國中藥雜志;1996年11期

10 王志均;細胞保護與消化道損傷[J];北京醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1985年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 尚喜雨;丁玉琴;劉萍;;談胃的細胞保護作用[A];中南地區(qū)第六屆生理學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2004年

2 郭一峰;周文麗;張建鵬;劉軍華;馮偉華;焦炳華;;海螵蛸多糖對小鼠胃黏膜細胞保護作用的研究[A];2008年全國糖生物學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2008年

3 魏錫云;張錦;陳肅標(biāo);孫勁旅;;扶正中藥對小鼠免疫細胞保護作用的形態(tài)定量分析[A];第五屆全國生物醫(yī)學(xué)體視學(xué)學(xué)術(shù)會議、第八屆全軍軍事病理學(xué)學(xué)術(shù)會議、第四屆全軍定量病理學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2002年

4 初亮;邵薈竹;王帥;周琴;劉克辛;姚繼紅;;槲皮素對HepG2細胞二相酶的誘導(dǎo)及細胞保護作用的研究[A];第九屆全國藥物和化學(xué)異物代謝學(xué)術(shù)會議論文集[C];2009年

5 吳迪;閔偉;駱丹;;黃芩苷對UV損傷皮膚細胞保護作用的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十五次全國皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2009年

6 謝建瓊;方琴;王季石;胡秀英;崔欣;;人DNA修復(fù)基因MGMT導(dǎo)入NK細胞增強其抗藥特性[A];貴州省2008年血液學(xué)年會論文匯編[C];2008年

7 范黎黎;尹蔚蘭;唐小卿;;H2S對MPP~+損傷PC12細胞的拮抗作用及其機制[A];Proceedings of the 8th Biennial Conference of the Chinese Society for Neuroscience[C];2009年

8 陳曉宇;席加喜;;血栓通對順鉑損傷HK-2細胞保護作用及其機制的研究[A];2013年中國藥學(xué)大會暨第十三屆中國藥師周論文集[C];2013年

9 曹莉;尹鴻操;周禮;王擁軍;;氧化型低密度脂蛋白致PC12細胞的毒性作用[A];全國第三屆心腦血管疾病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2003年

10 閔偉;駱丹;;黃芩苷對紫外線輻射損傷人表皮細胞保護作用的差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究[A];2009全國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 本報記者 王丹;在圍術(shù)期心腦保護領(lǐng)域書寫歷史[N];健康報;2012年

2 王建高;留學(xué)長才干報國正當(dāng)時[N];科技日報;2004年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 鄭曉磊;甲基牛扁亭對阿爾茨海默氏病細胞模型的作用及其相關(guān)分子機制的研究[D];山東大學(xué);2015年

2 趙然尊;Nrf2對缺氧預(yù)處理內(nèi)皮祖細胞成血管作用的影響及相關(guān)機制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 陳亞紅;細胞內(nèi)NAD水平分析及多酶氧化體系抑制效應(yīng)的研究[D];武漢大學(xué);2004年

4 陳雪梅;細胞應(yīng)激適應(yīng)中HSP90的作用和應(yīng)激適應(yīng)保護蛋白的初步篩選[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2004年

5 馮惠茹;～（32）Pβ射線持續(xù)低劑量率照射腫瘤細胞的放射生物學(xué)機制及端粒酶的治療監(jiān)控和放射增敏價值基礎(chǔ)研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學(xué)院;2002年

6 楊紹楠;丁內(nèi)酯衍生物對阿爾茨海默氏病細胞模型的作用及其相關(guān)分子機制的研究[D];山東大學(xué);2012年

7 宮智勇;熱休克蛋白70在苯并（a）芘致細胞DNA損傷修復(fù)中的作用[D];華中科技大學(xué);2006年

8 徐益苗;熱休克蛋白27及其磷酸化對p53的調(diào)控及介導(dǎo)MCF-7細胞多柔比星耐受的研究[D];南京師范大學(xué);2013年

9 李新毅;雌激素對Aβ所致PC12細胞損傷保護作用的研究[D];華中科技大學(xué);2006年

10 何志松;GATA-4加強MSCs細胞對梗死后缺血心肌細胞保護作用及其機制探討[D];蘇州大學(xué);2012年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 馬東東;SchB對UVA損傷HaCat細胞和鼠皮膚的保護作用的研究[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

2 魏菀怡;IGF-1對肌萎縮側(cè)索硬化細胞穩(wěn)轉(zhuǎn)模型的保護作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 張明明;成纖維細胞生長因子9在肌萎縮側(cè)索硬化癥細胞模型中的保護作用及機制探討[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 涂立英;魔芋多糖及其降解產(chǎn)物生物活性的研究[D];集美大學(xué);2015年

5 王宏心;急性腦梗死患者外周血Treg細胞及其相關(guān)炎性因子水平的觀察分析[D];山東大學(xué);2015年

6 馮英同;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)紫檀芪抗食管癌細胞的機制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

7 馮利杰;Tau蛋白介導(dǎo)的細胞毒性及泛素連接酶Hrd1的保護作用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2007年

8 馬晨曦;重金屬對HeLa細胞中熱激蛋白70（HSP70）表達的影響[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

9 劉曼;多胺類化合物WJ01對PC12細胞擬缺血性損傷的保護作用及其機制研究[D];河南大學(xué);2011年

10 李玉娟;ADMA對MPP~+損傷PC12細胞的拮抗作用及機制[D];南華大學(xué);2010年

  本文關(guān)鍵詞：IGF-1對肌萎縮側(cè)索硬化細胞穩(wěn)轉(zhuǎn)模型的保護作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：251618