【摘要】：隨著廣譜抗生素、免疫抑制劑的廣泛應(yīng)用和介入療法、器官移植等的深入開展,侵襲性真菌感染的發(fā)病率不斷增高,盡管白念珠菌仍是臨床最為常見的真菌,但非白念珠菌的分離率不斷升高,而抗真菌藥物的廣泛應(yīng)用則加速了菌株的耐藥進(jìn)程,非白念珠菌臨床分離株中耐藥株的比例明顯增加,非白念珠菌耐藥問題逐漸引起人們的重視。從分子水平研究非白念珠菌對抗真菌藥尤其是唑類藥物的耐藥機(jī)制是目前的熱點(diǎn)。 ERG11是羊毛甾醇14a-去甲基化酶的編碼基因,14a-去甲基化酶是念珠菌細(xì)胞膜麥角固醇合成途徑中的關(guān)鍵酶,對維持細(xì)胞膜的正常結(jié)構(gòu)和功能具有重要意義。唑類抗真菌藥物分子可與14a-去甲基化酶分子結(jié)合,阻斷羊毛固醇去甲基化過程,影響麥角固醇合成。ERG11的突變可以改變14a-去甲基化酶的氨基酸序列,當(dāng)這種改變足以影響酶分子的空間構(gòu)型時(shí),酶分子與藥物分子間的親和力可能被削弱,導(dǎo)致菌株耐藥。目前的研究主要針對白念珠菌,對于克柔念珠菌國內(nèi)外均未見相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。 目的：研究克柔念珠菌臨床分離菌株麥角固醇合成途徑中關(guān)鍵酶編碼基因ERG11突變與耐唑類藥物伊曲康唑之間的關(guān)系。 方法：選擇2009年6月至2010年10月從本院臨床科室送檢標(biāo)本中分離得到的來自痰液、尿液、陰道分泌物的6株克柔念珠菌伊曲康唑耐藥株和3株敏感株,1株ATCC6258克柔念珠菌標(biāo)準(zhǔn)株(購自北大一院真菌中心),以抽提的克柔念珠菌基因組DNA為模板,對ERG11基因序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增,PCR產(chǎn)物直接DNA序列測定,最后應(yīng)用BLAST軟件對測序結(jié)果進(jìn)行比較。 結(jié)果：10株克柔念珠菌的ERG11基因序列(以已知序列第1個(gè)ATG起始密碼的A作為第1個(gè)記數(shù)單位)共有7個(gè)位點(diǎn)發(fā)生突變,均為同義突變位點(diǎn)。在第447bp位點(diǎn)耐藥菌株和敏感株均發(fā)生堿基突變。在第12bp、327bp、429bp、552bp位點(diǎn)耐藥菌株發(fā)生堿基突變,在第696bp、927bp位點(diǎn)敏感菌株發(fā)生堿基突變。 結(jié)論：本研究證實(shí)克柔念珠菌ERG11基因序列存在多態(tài)性,未發(fā)現(xiàn)因ERG11基因突變引起靶酶氨基酸改變而導(dǎo)致的克柔念珠菌對伊曲康唑耐藥。
[Abstract]:With the wide application of broad-spectrum antibiotics, immunosuppressants, interventional therapy, organ transplantation and so on, the incidence of invasive fungal infection is increasing. Although candida albicans is still the most common fungus in clinic, the isolation rate of non-candida albicans is increasing, while the wide application of antifungal drugs accelerates the process of drug resistance, and the proportion of drug-resistant strains in non-candida albicans clinical isolates is significantly increased. The drug resistance of non-candida albicans has been paid more and more attention. It is a hot spot to study the resistance mechanism of non-candida albicans antifungal drugs, especially Azoles, at the molecular level. ERG11 is the coding gene of lanosterol 14a-demethylase. 14a-demethylase is the key enzyme in the synthesis of ergosterol in candida cell membrane, which is of great significance to maintain the normal structure and function of cell membrane. Zole antifungal molecules can bind to 14a demethylase molecules, block the demethylation process of wool sterol and affect ergosterol synthesis. ERG11 mutation can change the amino acid sequence of 14a demethylase. When this change is enough to affect the spatial configuration of enzyme molecules, the affinity between enzyme molecules and drug molecules may be weakened, resulting in drug resistance. At present, the research is mainly aimed at candida albicans, but there is no related literature report on candida albicans at home and abroad. Aim: to study the relationship between the ERG11 mutation of the key enzyme coding gene in ergosterol synthesis pathway and itraconazole. Methods: from June 2009 to October 2010, 6 strains of itraconazole resistant strains and 3 sensitive strains of C. roxburghii isolated from sputum, urine and vaginal secretions, and one standard strain of ATCC6258 (purchased from the fungal center of the first hospital of Peking University) were selected. Using the extracted genomic DNA of candida cerevisiae as template, the ERG11 gene sequence was amplified by PCR and the PCR product was sequenced directly. Finally, BLAST software is used to compare the sequencing results. Results: a total of 7 loci were mutated in the ERG11 gene sequence of 10 strains of candida cerevisiae (using A of the first ATG initiation code of the known sequence as the first counting unit), all of which were synonymous with each other. Base mutations occurred in both drug-resistant and sensitive strains at 447 BP site. At 12bp, 327bp, 429bp, 552 BP resistant strain and 696bp, 927bp site sensitive strain had base mutation. Conclusion: this study confirmed that there was polymorphism in the ERG11 gene sequence of candida krooensis, and no resistance to itraconazole was found due to the change of amino acid in the target enzyme caused by the mutation of ERG11 gene.
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R379

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本文編號：2506904